ANALISIS Y COMENTARIOS LA BIOTECNIA Y EL … · ventajas y desventajas del uso de cada una de las...

AGRONOMIA MESOAMERICANA 5: 140-158. 1994

1 Presentado en la XXXIX Reunión Anual del PCCMCA en Guatemala, América Central. 28 de marzo - 3 de abril, 1993.2 Investigador del Programa de Biotecnología del Instituto Nacional de Investigaciones Forestales y Agropecuarias (INIFAP).

Apartado Postal Nº10, 56230 Chaapingo, Edo de México, México.

LA BIOTECNIA Y EL SECTOR AGROPECUARIO1

Azpíroz, Susana2

RESUMEN

La biotecnia y el sector agropecuario. En este trabajose presenta una síntesis, de como las nuevas técnicas de labiotecnología moderna pueden ser usadas como herramientasque hagan más eficiente las metodologías tradicionales demejoramiento genético en plantas y animales. Se analizan lasventajas y desventajas del uso de cada una de las técnicasbiotecnológicas en las diferentes etapas de selección realiza-das en mejoramiento genético, comparando sobre todo lafacilidad de manipulación y el ahorro de tiempo logrado me-diante la integración de la componente biotecnológica a losprocesos usados corrientemente por el mejorador. Las téc-nicas discutidas son: a- Cultivo in vitro de órganos y tejidos;b- Transformación génica; c- Marcadores genéticos molecu-lares. Así mismo, se analiza el interés actual de las transna-cionales en la agricultura modificada por la biotecnología,incluyendo las consecuencias del acaparamiento en elconocimiento y la propiedad intelectual. Se resalta la importanciade reglamentar como grupo de países latinoamericanos enmateria de propiedad intelectual y bioseguridad, con la finalidadde unificar criterios y presentar un frente común legal, quepermita un desarrollo armónico de la biotecnología moderna ennuestros países.

ABSTRACT

Biotechnology and the agricultural field. This articlesummarizes how the modern biotechnology techniques canbe used as a tool to make the traditional animal and plantbreeding methodologies more efficient. The advantages anddisadvantages of using these techniques were analyzed ateach stage of the selection process of the breeding program.We compared the ease of handling and time saving obtainedwhen the biotechnology component is integrated in theprocess used by the breeder. The new techniques analyzedwere: a- Tissue and organ culture; b- Genetic transformation;c- Molecular genetic markers. Likewise, the current interestof multinational corporations on the potential of theagriculture modified by the biotechnology and the furtherconcentration of knowledge and intellectual rights was ana-lyzed. The importance for the Latin American countries torule as a group and to share a common criteria in order tolegislate in favor of the intellectual rights and biosafty wasalso emphasized. This legislation would allow a harmonicdevelopment of biotechnology among our countries.

ANALISIS Y COMENTARIOS

INTRODUCCION

En este documento se analizarán lasposibilidades de aplicación de algunas técnicas dela biotecnología en el mejoramiento genético, asícomo algunos aspectos socioeconómicos rela-cionados con la transferencia de la biotecnologíaa los países del tercer mundo, la propiedad inte-lectual de las obtenciones biotecnológicas y la

reglamentación necesaria en bioseguridad comoprotección a nuestros recursos genéticos y naturales.

Como preámbulo a esta exposición,mencionaremos dos de las definiciones más co-nocidas en Biotecnología, la de Bull et al. (1982) yla definición oficial de la Oficina de Asesoramien-to Tecnológico del Congreso de Estados Unidos,las cuales se presentan a continuación:

141AZPIROZ: LA BIOTECNIA Y EL SECTOR AGROPECUARIO

1. Biotecnología es la aplicación de los principioscientíficos y de Ingeniería al tratamiento de losmateriales de los agentes biológicos paraproducir bienes y servicios.

2. Biotecnología es cualquier técnica que useorganismos vivos o parte de ellos para hacer omodificar productos, mejorar plantas , animales,o para desarrollar microorganismos que tenganusos específicos.

La Biotecnología en sí es un proceso de prin-cipios y técnicas que se ha utilizado desde tiem-pos muy antiguos, empezando con el uso delevaduras en la fabricación de pan o las fer-mentaciones tradicionales. Actualmente, losavances tecnológicos nos permiten clasificar a laBiotecnología en Tradicional y Moderna. Dentrode la Biotecnología Tradicional podemos men-cionar las fermentaciones, la propagación rápida,el control biológico de plagas y enfermedades y laproducción convencional de vacunas.

La Biotecnología Moderna comprende el usode nuevas tecnologías generadas por el conoci-miento profundo de la genética molecular y laBiología Molecular, como son las técnicas re-lacionadas con el cultivo in vitro de órganosinmaduros, la manipulación de ADN recombi-nante y los marcadores genéticos moleculares.Debe señalarse que la mayoría de estos métodoshan sido utilizados primeramente en el sectorsalud y, sólo hasta hace poco, han pasado a seraplicados en plantas y animales.

Las técnicas de la biotecnología, que nos inte-resan como herramientas, para complementar yhacer más rápidos los procesos de mejoramientogenético en plantas y animales, son aquellas quenos permitan:

a.) Crear variación genética.b.) Explotar más efectivamente la variabilidad

existente.c.) Acelerar las diferentes etapas dentro del

programa de mejoramiento.

Así, tenemos que las técnicas del cultivo invitro, la manipulación de genes por medio de

ingeniería genética y el uso de marcadores genéti-cos moleculares, son poderosos auxiliares en elmejoramiento tradicional que están permitiendoavances sustanciales, tanto para la obtención denuevos individuos más productivos como parala comprensión de ciertos fenómenos ligadosa la genética cuantitativa.

Cultivo "In Vitro" de órganos y tejidos

En el área de cultivo in vitro de órganos ytejidos tanto vegetales como animales, las técni-cas desarrolladas han permitido apoyar fuertemen-te a la biotecnología moderna, siendo su utiliza-ción necesaria tanto en investigaciones básicascomo en procesos industriales.

Actualmente, es de todos conocido que las cé-lulas aisladas pueden continuar funcionando yreproduciéndose in vitro si se les provee de unmedio de cultivo adecuado. En el caso de célulasvegetales, éstas son totipotentes y omnipotentes,es decir, cada célula puede reproducir una plantacompleta si al medio de cultivo se le agregan losnutrimentos y un balance de hormonas ade-cuados. Este descubrimiento ha tenido granrepercusión en la investigación agrícola, pero aúnhoy en día algunas familias de plantas son muydifícil es de manejar in vitro (especies recalci-trantes).

La utilización del cultivo de tejidos y/uórganos inmaduros dentro de la genotecniatradicional es de gran ayuda para acelerar el pro-greso genético. Ciertas técnicas de cultivo detejidos se han desarrollado con este objetivo; asítenemos:

1. El cultivo de embriones inmaduros, somáti-cos y cigóticos.

2. La producción de plantas haploides, a partirdel cultivo in vitro de gametofitos.

3. La producción de híbridos somáticos a partirde protoplastos.

4. Selección in vitro y,5. La regeneración in vitro.

142 AGRONOMIA MESOAMERICANA

Cultivo "In Vitro" de embriones cigóticos

Un caso concreto de la utilización de estastécnicas en el mejoramiento de plantas, es el cultivoin vitro de embriones cigóticos inmaduros comotécnica complementaria de los métodos tradicio-nales de selección. El cultivo de embrionesinmaduros, evita la larga fase de maduración yde dormancia de las semillas permitiendo unareducción notable en la duración del ciclo de selec-ción (Alissa, 1986; Azpíroz, 1987). Por lo que éstametodología puede ser usada en la obtención delíneas endocriadas, extirpando los embrionesinmaduros 3 o 18 días después de la polinización(dependiendo de la especie). Esta operación serealiza en cada ciclo de autofecundación yaprovechando las siembras denominadas de invier-no o los invernaderos, se pueden tener hasta cuatrociclos por año. Así mismo, esta técnica puede serutilizada para realizar retrocruzas aceleradas, con lafinalidad de adicionar algún carácter agro-nómico importante que haga más redituable el usode la variedad.

Tenemos como ejemplos, las retrocruzas conmateriales resistentes a enfermedades o paraintroducir el carácter de androesterilidad, este últi-mo puede favorecer al productor de semilla yaque se reducirían los costos de obtención de loshíbridos. Por ejemplo en Girasol (Helianthusannuus), Maíz (Zea mays), Colza (Brassica napus),y Sorgo (Sorghum bicolor L. Moench) tenemosesta posibilidad. Este carácter de androesteri-lidad puede introducirse por retrocruzas acelera-das mediante el cultivo de embriones inmaduros,en 390 días. Por otra parte, es una técnica emplea-da en el rescate de embriones interespecíficos(Alissa et al. 1985).

La variabilidad genética es una de las condi-ciones primordiales para el éxito del mejoramien-to genético de cualquier especie. Una de las fuen-tes de esa variabilidad son las especies llamadassilvestres.

El intercambio de genes entre especies dife-rentes, permite el enriquecimiento del acervogenético, lográndose:

1. Resistencias a diferentes enfermedades.2. Resistencia a plagas.3. Introdución de genes que confieren a la planta

mejor adaptación a medios adversos.

Sin embargo, debe tomarse en cuenta queentre distintas especies existen marcadas barrerasde incompatibilidad, lo que representa una difi-cultad para el cruzamiento, la viabilidad y la ferti-lidad de sus híbridos (Al-Yasiri y Coyne, 1966).Sin embargo, como este problema se debe a lamalogración del endospermo como consecuenciade la tardanza de la división celular en la microspora (Rabakoarihanta et al, 1979), el cultivo delos embriones inmaduros in vitro evita el aborto ypermite el desarrollo normal del embrióninterespecífico.

También los embriones inmaduros puedenser cultivados in vitro para producir embrionessomáticos vía callo (Green y Philips, 1975). Laproducción de callo se logra cultivando los embrio-nes inmaduros en condiciones de rigurosa asepsiasobre medio de cultivo nutritivo (Chu et al.,1975), utilizando fitohormonas como agentes quepropiciarán el desarrollo celular en forma masiva.Una vez desarrollado el callo se transplanta en elmismo medio sin hormonas para propiciar ladiferenciación celular o producción de embrionessomáticos.

Posteriormente, los embrioides y brotes daránorigen a nuevas plántulas, las cuales serántrasplantadas en otros medios para su desarrolloadecuado, siendo después transferidas en cubos detierra estéril e incubadas en invernadero para quemás tarde se trasplanten en el campo.

Esta técnica puede ser útil en la propa-gación masiva y rápida de algún genotipo enespecial, como es el caso de líneas necesarias enla producción de híbridos; o bién, en el mejo-ramiento de poblaciones pensando en la varia-ción somaclonal, si se demuestra que ésta essuficientemente grande y que las variantesdeseables son reproducibles a través de lasgeneraciones.


Asimismo, esta técnica permite detectar losgenotipos aptos a la regeneración in vitro comolo están haciendo actualmente en un proyectode colaboración el Centro Internacional de Me-joramiento de Maíz y Trigo (CIMMYT) y elInstituto Nacional de Investigaciones Forestalesy Agropecuarias (INIFAP) de México, con suslíneas élite y variedades de Maíz (Bohorova yHoisingyon, 1991); esta aplicación es impor-tante porque el carácter de regeneración in vitropuede introducirse a otros genotipos por retro-cruzas y esos materiales pueden ser susceptiblesde transformación por ingeniería genética, yaque el procedimiento de transformación géni-ca necesita como materia prima callos embriogé-nicos que puedan regenerar plantas completas.

Este tipo de transformación puede ser útilpara la introducción de caracteres monogénicosque no se encuentren dentro de la especie o gé-nero, como podría ser el caracter de apomixis(o partenogénesis) que vendría a revolucionar laindustria semillera, ya que las semillas apomícti-cas darían origen a una planta idéntica al proge-nitor y, así, el productor de semillas ya notendría necesidad de aislar sus lotes de pro-ducción.

Este caracter se encuentra en el genéroTripsacum y actualmente existen grupos cientí-ficos que trabajan en la introducción de genes deTripscacum al maíz (Hanna y Bashaw, 1987;Savidan, 1986). Este tema de transformación seanalizará más adelante.

En el caso de animales, la técnica del cultivode embriones inmaduros y trasplante de losmismos ha tenido gran éxito para la obtenciónde genotipos con características sobresa-lientes similares. Asimismo, se ha desarrolladola crioconservación de los embriones y/ogametofitos para ser utilizados posteriormenteen explotaciones ganaderas. En el caso detransformación génica los embriones inmadurosde animales se usan frecuentemente lográndoseun éxito hasta de 99% (Van Brunt, 1988).

Obtención de haploides "In Vitro"

Otra aplicación de las técnicas in vitro enmejoramiento vegetal es la haploidización. Loshaploides in situ se presentan de una maneraespontánea o son inducidos por la acción de diver-sos tratamientos. La frecuencia de este tipo dehaploides varía según la especie y el genotipo;pero, en general, es muy baja; pueden ser detec-tados gracias a dos métodos: uno es con la trillade granos poliembrionarios y el otro usando mar-cadores genéticos. Aparentemente la técnica delcultivo in vitro de gametofitos (anteras y ovarios)ha permitido la obtención de haploides en ciertasespecies, con una frecuencia más elevada(Alissa et al., 1985). El interés de la obtenciónde haploides radica en los siguientes puntos:

1. La obtención de líneas homocigóticas pordoblamiento espontáneo o artificial (Colchi-cina) del stock cromosómico de individuoshaploides.

2. Esta vía presenta una ganancia en tiempo muyapreciable, si la comparamos con la víatradicional, donde la homogeneidad fenotípicase obtiene después de 7 a 10 generaciones deautofecundaciones sucesivas.

3. Bajo el plan de conocimiento del genoma, la víahaploide presenta igualmente numerosasventajas (sobre todo si se admite que larealización de la fase haploide se opera sinselección).Así por ejemplo:- Permite un análisis fino de las interaccio-nes alélicas pudiéndose apreciar directamen-te ciertos parámetros de la genética cuanti-tativa.- Se logra la obtención de una gama de se-gregación gamética y favorece su difusión demanera estable bajo la forma de líneas puras.- Esta técnica pone en evidencia ciertas re-combinaciones recesivas, que pueden elimi-narse o utilizarse a conveniencia de la selec-ción.

La obtención de plantas haploides puedeser realizada espontáneamente o utilizandoprocedimientos inductivos, dentro de estos últi-


mos se puede mencionar el aislamiento in vitroque puede realizarse en gametos masculinos(técnica llamada androgénesis) y en gametosfemeninos (ginogénesis).

Se ha señalado por varios autores (Nakata yTanaka, 1968; Clapham, 1971; Cuyan et al., 1973)que los mejores resultados para la mayoría de lasespecies se han obtenido cuando las microsporas,en el seno de la antera, se encuentran en el estadopremitótico (microsporas nucleadas maduras) opostmitótico (microsporas binucleadas jóvenes).

Obtención, cultivo y fusión de protoplastos

Otra de las técnicas en la que se puede apoyarel mejorador es el cultivo de protoplastos. Losprotopastos son células cuya pared celular hasido removida por métodos mecánicos y enzimá-ticos (cloroplastos, mitocondrias, etc).

Estas células o protoplastos son viables yrápidamente sintetizan una nueva pared celular,crecen y se pueden dividir llegando en algunasespecies a regenerar una nueva planta. Cuando lacélula está en estado de protoplasto se puedemanipular y ésta absorbe varios tipos de materia-les genéticos. Esta propiedad de los protoplastosse utiliza ampliamente en biotecnología.

Esta técnica ofrece la oportunidad de fusio-nar protoplastos derivados de especies que sonsexualmente incompatibles en la naturaleza.Siempre debe recordarse que todo el proceso defusión es enteramente físico y difícil de repetir, yaque se pueden obtener autofusiones, heterofusio-nes, fusiones incompletas y, ésto dá origen a unagama muy diversa en cada experimento.

En especies de Tabaco (Nicotiana tabacoL.), Papa (Solanum tuberosum), Tomate(Lycopersicum spp), Colza y Arabidopsis(Arabidopsis talyana), se han obtenidos varioshíbridos; sin embargo, el uso está limitado debi-do a que no siempre es posible regenerar plantasa partir de sus protoplastos. En arroz (Oryza spp.)hay algunas líneas de las subespecies Indica yJaponica han contribuido mediante este método

al mejoramiento de Indica. En maíz es tambiénposible regenerar plantas a partir de protoplastos.(Fischer, 1990).

Otra aplicación de esta técnica es la fusiónentre protoplastos de la misma especie o entreespecies sexualmente compatibles a fin de intro-ducir recombinaciones epigénicas y citoplás-micas (aloplasmia y fusión citoplasmática paraintroducir androesterilidad) (Fischer, 1990).

Selección "En Vitro"

Por otra parte, la posibilidad de mejorar laresistencia de plantas frente a la acción de facto-res bióticos y abióticos del medio reviste unagran importancia para el fitomejorador. Al res-pecto, se ha propuesto la selección in vitro paraaislar plantas resistentes a enfermedades, salini-dad, frío y al déficit hídrico.

La ventaja potencial de esta técnica radicatanto en la rapidez de selección como en la ca-pacidad de efectuar el tratamiento sobre un grannúmero de individuos ubicados en un espaciorelativamente pequeño.

La selección in vitro se hace por medio delaislamiento aséptico de células y órganos en unmedio de cultivo que contiene substancias quími-cas o metabolitos, así como otras sales que inhi-ben el crecimiento. Entre esas substancias pode-mos mencionar los plagicidas, toxinas o filtradosde organismos patógenos, metales pesados, salesminerales o simplemente substancias que aumen-ten la presión osmótica del medio de cultivo.

Este tipo de selección de materiales conresistencia a factores bióticos o abióticos puederealizarse tanto a nivel celular como a nivel deórganos jóvenes (Azpíroz et al., 1988). La selec-ción a nivel celular parte de un grupo de célulasllamado callo, el cual una vez demostrada suresistencia a ciertos factores, se cambia del mediopara permitir el desarrollo de embrioides so-máticos que serán el origen de plantas con resis-tencia al factor limitante. En cambio, la selección anivel de embriones inmaduros permite una


eliminación de los no resistentes y los resistentesse cambian a un medio propicio o directamente atierra para su desarrollo.

Regeneración "In Vitro"

Como hemos indicado en párrafos anterioreslas células que se cultivan en condiciones apropia-das, son capaces de desarrollar individuos com-pletos como lo hace el cigote. El éxito en elestablecimiento de un sistema de regeneración sebasa en tres condiciones: la selección del explan-te adecuado, la elección apropiada del medio decultivo y el control de las condiciones físicas.(Thorpe, 1980).

Los explantes in vitro evolucionan mor-fológicamente hacia la producción de meriste-moides, porteriormente primordios, brotes yfinalmente la formación de raíces adventicias aesto se le llama diferenciación directa de tejidos uorganogénesis. Otra vía es la formación de em-briones somáticos directamente de la masa decélulas desarrollada a partir del explante (Wintony Verhagen, 1977). Uno de los factores determi-nantes en la regeneración de plantas a partir deexplantes es la interacción cuantitativa de losreguladores de crecimiento (fotohormonas) quedeterminan el desarrollo organizado de las célulasiniciales.

Tanto la organogénesis como la embriogé-nesis somática son formas eficientes para lamultiplicación clonal; por otro lado esta regene-ración es importantísima para los trabajos deingeniería genética, ya que un explante transfor-mado que no llega a regenerar plantas no tieneningún valor de aplicación directa a la pro-blemática agropecuaria.

Transformación génica

La introducción de genes en la misma espe-cie, entre especies o géneros diferentes, puedelograrse mediante cruzas tradicionales o, bien, usan-do sistemas de transformación de IngenieríaGenética. La manipulación de genes o transforma-

ción de plantas y animales comprende una seriede técnicas que permiten la inserción de uno omás genes provenientes de otros organismos oque han sido sintetizados en el laboratorio. Antesde insertar un nuevo gen es necesario identificary aislar ese gen, para luego clonarlo con el promo-tor, el cual va a regular la expresión del gen,posteriormente se debe identificar el mejor siste-ma para introducirlo en la planta o animal a mo-dificar.

La aplicación de esta metodología equivalea la incorporación de una característica mo-nogénica por retrocruzamiento a un materialgenético dado, con la ventaja de que con latransformación la incorporación de dichacaracterísticas es instantánea.

Los sistemas de transformación en plantashan resultado más difíciles que en animales, dondela microinyección directa en embriones unicelu-lares, es la técnica más usada (Van Brunt, 1988).

Hay varias maneras de introducir genes otransformar plantas y animales, y ésto se halogrado en varias especies. En la última décadalos nuevos conocimientos de la estructura yregulación de genes, así como el desarrollo devectores, han abierto nuevas expectativas y sehan logrado producir y estudiar plantas y ani-males transgénicos. Las plantas en que se halogrado dicha transformación con éxito son lasdicotiledoneas que se pueden reproducir porcultivo de tejidos a partir de protoplastos y,además, responden bien al sistema de tras-ferencia de genes que en la naturaleza lleva acabo la bacteria Agrobacterium tumefaciens.(Fromm et al., 1985). En la actualidad, se lograntransformaciones genéticas estables en formarutinaria sobre varias especies vegetales, comoTabaco, Tomate, Papa, Algodón (Gosypiumspp.), Colza Kiwi (Actinidia deliciosa), Pepino(Solanum muricatum), (Uematsu et al., 1991;Alkinsomy Garder, 1991) y, aún, en algunasespecies forestales (Fischhoff et al., 1987) así comoen los animales (Van Brunt, 1988).

En plantas los sistemas de transformación sepueden dividir en directos e indirectos:


a) Los directos, que incluyen absorción directa deADN por protoplastos, electroporación,microinyecciones y el uso de microproyectiles(Klein et al., 1987 y 1988; From et al., 1985).

b) Los indirectos, se realizan mediante el uso devectores, tales como A. tumefaciens, virus,bacterias, hongos y elementos genéticos móvileso transpones (Klee et al., 1987).

Métodos directos de transformación

Las dificultades que presenta el uso de A.tumefaciens en algunas especies vegetales haaumentado el interés por encontrar otros sistemasde transformación alternos, entre ellos tenemos:

1. Uso de protoplasmos.

Los protoplastos absorben ADN provenientede cromosomas, pásmidos y fagos. Además, se hademostrado que la asociación de este ADN conel núcleo de los protoplastos en cuestión, seaumenta con la presencia de policationes comopoly-L-lisina y poly-L-ornitina al igual que el usode polietilenglycol (PEG); sin embargo, la frecuen-cia de transformación es baja (1 por cada 10protoplastos). Estos tipos de procedimientos sehan utilizado en Cebada (Hordeum vulgare) y enTrigo diploide (Triticum monococcumm). Perolos protoplastos que formaron pequeños callos yque mostraron resistencia al marcador empleado(Kanamicina) no fueron capaces de regenerarplantas. En Arroz también se ha intentado usareste procedimiento alcanzándose frecuencias detransformación más altas. El mayor problema eneste método, además de las bajas frecuencias detransformación, lo constitu-ye la regeneración deplantas a través de los protoplastos (Rodes et al.,1988).

2. Electroporación.

La electroporación es un proceso en el quelas células se someten a pulsos eléctricos de altovoltaje. Esto causa perforaciones pequeñas enla membrana celular; así se logra la difusiónde moléculas de ADN al interior de la célula, lacual regenera su pared celular y continua

desarrollándose normalmente. Este procedimien-to se usa mucho en la transformación de célulasanimales y se ha usado con éxito en la transforma-ción de protoplastos de Maíz, Arroz y Colza quellegaron a regenerar plantas transformadas (Rodeset al., 1988).

3. Uso de microproyectibles.

La metodología llamada de microproyectileso balística se realiza mediante un bombardeo, conuna especie de pistola, que proyecta bajo vacíopequeñas partículas de tungsteno (1.2 micromilímetros) que van cubiertas de moléculas deADN. Este procedimiento requiere tejidosvegetales, callos embriogénicos o, inclusive,embriones cigóticos. En maíz se ha logradotransformar para la obtención de resistencia aherbicidas y también en cebada (Klein et al. 1987;Klein, et al., 1988).

4. Microinyección.

La microinyección es una técnica que se haprobado en embriones cigóticos, inflorescenciasen desarrollo de diversos cultivos, el ADN que seinyecta ha contenido el gen para la resistencia ala kanamicina; sin embargo, la frecuencia deesta transformación es muy baja en plantas, peroen embriones unicelulares de animales la frecuen-cia de transformación ha sido todo un éxito.

Métodos Indirectos

Los métodos indirectos comprenden el usode vectores en transformación de plantas con loscuales se logra la inclusión de genes que hansido debidamente caracterizados y, a su vez, éstosson incorporados en las células vegetales. Enplantas, el vector más ampliamente utilizado esAgrobacterium tumefaciens, una bacteria delsuelo que tiene un sistema natural para transferirgenes a la planta hospedera causando la enferme-dad de la Agalla de la Corona.

En 1975 se estableció que el plásmido PTIcontenía a los genes que controlaban la inducciónde las agallas en la planta. Asimismo, se demostró


que en la región VIR se encontraban los genesresponsables de la producción de la agalla y losgenes responsables de la transferencia del TADNa las células vegetales. Es precisamente en estazona donde se sustituyen los genes que producenlos tumores, por los genes que van a transformara la planta en estudio, incluyendo genes marca-dores responsables de la resistencia a antibióticosque servirán para la selección de los materialestransformados ( Zambryski et al.,1984).

Este sistema de transformación se puede resu-mir en cinco etapas:

1. Identificación y aislamiento de los genes aintroducir.

2. Introducción de genes foráneos en cepasdesarmadas de A. tumefaciens

3. Infección con A. tumefaciens a células o teji-do vegetal para permitir la transferencia delgen o genes deseados.

4. Selección y regeneración de células y tejidostransformados.

5. Análisis y verificación de la expresión delos genes en las plantas transformadas.

Las plantas transformadas tienen apariencianormal y la herencia del ADN transformado (T-ADN) es Mendeliana.

La mayor parte de las plantas transgénicasque existen en estos momentos han sido creadasusando como vector a A. tumefaciens.

Así, por ejemplo, se introdujeron en el geno-ma de girasol , el gene responsable de la produc-ción de faseolina, que se aisló del genéroPhaseolus, usando como vector A. tumefaciens,pero este gene no se expresó. El material genéticoque se introduce en la planta debe tener todos loselementos reguladores que aseguren la correctaexpresión de los genes introducidos.

En 1989 se probaron las primeras plantastransformadas de tomate con el gene responsablede la producción de una endotoxina (Bacillusturingensis), que evita el ataque de insectos a estaespecie.

También, usando los genes antisentido selogró la obtención de tomate transgénico conmayor vida de anaquel, ya que este gen impedíala producción de la poligalacturonasa en el fruto yéste se conserva verde por más tiempo.

En Papa fue transformada mediente A.tumefaciens, el cual contenía los genes que codi-fican para la proteina de la cápside de los virus"X" y "Y". Se obtuvo un rendimiento deplantas transformadas de un 18%, del cual el 25%expresaron la resistencia a los virus "X" y "Y".

Gould J. et al. (1991), demostró que el maízpuede transformarse usando Agrobacteriumtumefaciens y el plásmido PGUS3, conteniendolos genes para la resistencia a la Kanamicina(NPT II) y la producción de B-glucoronidasa(Gus).Con este estudio se demostró que lasmonocotiledoneas también pueden ser transfor-madas usando como vector Agrobacterium.

Otros vectores que se han desarrollado paratransformación son los virus de ADN de cadenadoble y simple, así como de hongos. En la actuali-dad se está trabajando para transformar cerealescomo el maíz, pero desde un punto de vista prác-tico como lo es la introducción de los genesresponsables de la producción de la endotoxina deBacillus turingenesis, lo que haría a este cultivoresistente al ataque de insectos.

La utilización de estas técnicas de transforma-ción podrían auxiliar fuertemente a la producciónde semillas cuando se necesite introducir rápida-mente algún gene en particular que mejore algunavariedad ya existente, o para la introducción rápi-da de la apoximis, por ejemplo, una vez que seidentifique el gen responsable de esa caracterís-tica y se aisle.

Otra aplicación práctica de la técnica detransformación es en la producción de biopesti-cidas, la Agencia Americana de la Protección delAmbiente (EPA) autorizó en Junio de 1991 porprimera vez a la Compañía Mycogen, de SanDiego, California, dos bioinsecticidas genéticamen-te modificados (Bouguerra, 1992).


Estos bioinsecticidas son virus modificados,así, por ejemplo, tenemos los trabajos de Tomalski,1991 y Stewart, 1991, quienes han logrado aislarlos genes responsables de la producción deneurotoxinas en los himenópteros; esta neurotoxi-na causa la parálisis en lepidópteros. Estos genesse han usado para transformar los báculovirus;estos virus atacan específicamente a lepidópterosy transformados sirven de vehículo para quedentro del cuerpo del insecto se produzca la toxi-na. Por lo tanto, las larvas infectadas por baculo-virus modificados se paralizan mientras el virussigue su proceso destructivo convencional en elinterior de la larva, evitándose así el ataquedestructivo por parte de las larvas a los cultivos deinterés comercial, ya que normalmente cuando ellepidóptero es atacado por el virus no transfor-mado, la larva del insecto sigue destruyendo elcultivo por una semana hasta que muere,presentándose pérdidas económicas muy fuertespara el productor.

Las ventajas del uso de estos bioinsectici-das radican por un lado en evitar el uso indiscri-minado de insecticidas convencionales los cualesdeterioran el ambiente y, por otro lado, la es-pecificidad de éstos evita la destrucción de insec-tos benéficos.

Marcadores genéticos moleculares

Otra técnica biotecnológica importante en loque se refiere al mejoramiento genético, es el usode marcadores genéticos moleculares. En laactualidad, varios países han integrado a susprogramas de mejoramiento genético el uso demarcadores genéticos moleculares como son: elpoliformismo de isoenzimas, el de la longitud defragmentos de ADN determinados por sitios derestricción (RFLP) y el del ADN amplificado alazar (RAPD). Estas técnicas pueden ser usadaspara identificar y localizar genes de caracterescuantitativos, medir cambios de frecuencias géni-cas por efectos de selección natural o artificial; sepueden predecir grados de heterosis mediante lamedición de divergencia genética. Además, a unnivel práctico los marcadores genéticos molecu-lares están siendo usados en algunos países paracomplementar la caracterización fenotípica yfenológica en el registro de las nuevas varieda-des vegetales y animales.

Estos marcadores tienen las ventajas de pre-sentar efectos neutros sobre la planta; en la mayo-ría de esos "loci" se presentan efectos codomi-nantes como en el caso en isoenzimas y RFLP’s ydominante en caso de los RAPD’s (Figura 1); se

Figura 1. Marcadores dominantes vrs codominantes

Marcadores Genotipos

RAPD AA Aa aa

RFLP EISOENZIMAS


pueden tener marcadores a lo largo del genoma;el genotipo se puede determinar en cualquierestado fenológico de la planta y en cualquier tejido;se puede trabajar casi con cualquier poblaciónnatural y estos marcadores no se enmascaran por elambiente.

Enzimas

Las enzimas son proteínas con una actividadcatálica, cuyo estudio y análisis nos permite cono-cer también la variabilidad genética en pobla-ciones de individuos que poseen polimorfismospara estos componentes.

Los genes que codifican las enzimas poseendos propiedades que las hacen interesantes paralos genotecnistas:

1a. Una porción importante de esos genes sonpolimofos, es decir, que ellos existen bajo laforma de dos o más alelos.

2a. Los alelos de genes codificadores de las enzi-mas son generalmente codominantes.

Para estudiar las enzimas se utiliza la técnicade electroforesis que las discrimina por su pesomolecular y su cargo superficial sobre gel de almi-dón, poliacrilamida o agarosa. Estos dos paráme-tros están ligados a la constitución en aminoá-cidos y reflejan la diversidad genética asociadade la misma forma que en el caso de las proteínasde reserva.

Las enzimas así separadas se revelan pormedio de reacciones específicas de coloración,dando bandas que forman un diagrama elec-troforético.

Con las isoenzimas sólo se pueden estudiaralrededor de 40 loci dependiendo de la especieque se esté analizando, en cambio con los RFLP ylos RAPD se puede estudiar todo el genoma dela especie de interés.

Polimorfismo de la longitud de fragmentos derestricción

Un RFLP es simplemente una diferencia enel ácido desoxiribonucleico entre dos individuos.Esta diferencia se puede deber a muchas razonespero la más común es, generalmente, la insercióno eliminación de un pequeño segmento de ADNo un cambio en una o dos bases dentro de la se-cuencia del ADN. Para detectar un RFLP se aislael ADN de un individuo y se digiere con una omás enzimas de restricción. Estas enzimas cortan lasecuencia de ADN en sitios específicos. El ADNdigerido se separa en un gel mediante cargaseléctricas, se transfiere a una membrana y ésta seusa como un molde original para detectar el largode cada fragmento individualmente.

Un RFLP se observa como una diferenciaentre dos individuos en el largo de los fragmentosgenerados por una enzima de restricción especí-fica e hibridados con una sonda específica(Figura 2). A veces se pueden generar patrones máscomplicados que abarcan no sólo diferencias enlos largos de los fragmentos, sino también en elnúmero de bandas, ésto dependerá de la nuevaubicación del sitio de restricción.

Estos marcadores, desde su descripción en1975 por Grodzicken y colaboradores, se han usadocon varios fines y en producción de semilla hanpermitido el establecimiento de similitudes ydisimilitudes genéticas muy interesantes (Smithand Smith, 1991; Melchinger et al., 1991).

Polimorfismo del ADN amplificado al azar

Hace poco tiempo, en diciembre de 1990,se publicó información acerca de un segundo tipode marcadores moleculares (Welsh y McClellan,1990 y Williams et al., 1990). Estos marcadoresse han denominado polimorfismo del ADNamplificado al azar (RAPD’s) y se basan en laamplificación del ADN mediante la reacción cícli-ca múltiple para amplificar pequeñas secuenciasde ácido desoxiribonucleico usando una secuen-cia primaria de nucleótidos como iniciador.Esta secuencia primaria es conocida, por loque las reacciones de amplificación se puedenrepetir.


Figura 2. Polimorfismo en el largo de Fragmentos del ADN de maíz, contados con la enzima de restricciones,Hind III, e hibridados con la sonda BNL 5.09.

Una reacción típica se realiza con unamortiguador simple, los cuatro dinucleótidostrifosfatados (D’ATP, D’CTP, D’GTP y D’TTP),la secuencia primaria, taq polimerasa y unospocos nanogramos del ADN del organismoestudiado. Después de cuatro horas de amplifi-cación donde se pasa por procesos de desnatu-ralización, anillamiento y replicación mediantecambios bruscos de temperatura de 92, 35 y 72 °Crespectivamente (Figura 3), los productos seseparan en un gel de agarosa mediante cargaseléctricas donde directamente se tiñe y visualizael ADN amplificado (Figura 4). Esta técnica hasido propuesta para la caracterización de varie-dades de polinización libre recientemente(Fisher, 1991).

Reacción en cadena de la polimerasa

Otra de las técnicas que se está utilizando enel sector pecuario para detectar genotipos con

características sobresalientes de resistencia aenfermedades o para diagnóstico de enferme-dades, es la llamada reacción en cadena de lapolimerasa uno de los más recientes trabajos enesta última aplicación se ha realizado en Méxicopara la detección temprana de Brucella abortus.Esta técnica se basa en la amplificación delADN mediante una reacción cíclica múltipleusando dos secuencias primarias que flanqueanel fragmento de ADN a replicar mediante la enzimaPolimerasa.

La brucelosis bovina infecta además a ovinos,caprinos y al hombre. En animales propicia dañoseconómicos, ya que provoca abortos, mortandadde crías y problemas reproductivos. El diagnósti-co de la brucelosis animal se realiza con pruebasserológicas cuya utilidad es limitada debido a sufalta de especificidad y sensibilidad. La pruebaserológica más utilizada (aglutinación) no detectainfecciones latentes o tempranas, ni permitediferenciar los anticuerpos de animales vacunados


Figura 4. Fragmentos de ADN genomico de maíz, ampliados al azar mediante la técnica de la reacción en cadenade la Polimelasa, usando como promotor (primer) una ausencia de 10 nuceotidos "MO2" (OperomCompany).

Figura 3. Ciclo térmico para la amplificación del ADN al azar.


de los animales enfermos. En cambio, esta nuevaprueba que usa la técnica en cadena de lapolimerasa (RPC) ha detectado exitosamente lapresencia de Brucella, así como la o las especiespresentes que causen en la infección (Martínezet al., 1993, y López et al., 1993).

Propiedad intelectual, transferenciabiotecnológica y bioseguridad

Todas estas metodologías, que son podero-sas herramientas en varios campos del sectoragropecuario, como son: mejoramiento genético,en el diagnóstico de enfermedades de especiesvegetales, forestales y animales, en la producciónde bioinsecticida y otros campos más, han propi-ciado un debate sobre el desarrollo de la biotec-nología agropecuaria en América Latina y elCaribe, sobre todo porque las grandes compañíastransnacionales han analizado las altas posibili-dades de la agricultura transformada por labiotecnología y, actualmente, todas esas compa-ñías realizan grandes inversiones en investi-gación biotecnológica, como Monsanto que invier-te hasta mil millones de dólares por año, lo mismoque Dupont, INI, Pfizer y Ciba Geigy.

Las relaciones Industria-Universidad, Indus-tria-Gobierno, que se han establecido en los paísesdesarrollados, han permitido que la empresatransnacional tenga un control en la generación,flujo de información y conocimiento científico;ésto implica la protección de dicho conocimiento,por lo que se promueve a nivel mundial elpatentamiento de productos, procesos y organismosvivos obtenidos mediante la biotecnología(Solleiro 1991).

Especialistas en la materia consideran queel desarrollo de la biotecnología en América La-tina y el Caribe, deberá realizarse en un contextode relaciones armónicas entre países desarrolladosy en desarrollo, ya que se involucran aspectosde interés común muy importantes como:

- El manejo y conservación de germoplasma- La transferencia de tecnología moderna- El medio ambiente

- La seguridad biológica- La propiedad intelectual

Sobre el germoplasma, se ha recomendadoque éste sea considerado patrimonio de nuestrospaíses; y que se establezcan políticas económicasque permitan la conservación y explotación racio-nal del germoplasma de América Latina y el Caribe,donde los países desarrollados que estén interesa-dos contribuyan activamente a la implementacióny ejecución de esa acción.

En lo que se refiere a la transferencia de lasnuevas biotecnologías se recomienda a los paísesen desarrollo la unión de esfuerzos y la cooopera-ción internacional para que esta transferenciase pueda lograr.

Existen variadas metodologías en Biotecno-logía que pueden ser aplicadas a varios procesosdel sector agropecuario para hacerlo más efi-ciente. Por lo que es importante un programa detransferencia de biotecnología hacia los usuarios,llámense mejoradores o productores, para que estashe-rramientas biotecnológicas puedan ser apli-cadas correctamente a problemas concretos.

Dicha transferencia se puede lograr median-te entrenamientos cortos que permitan a losusuarios interaccionar con los laboratorios detransferencia de biotecnología y también con losgrandes centros de investigación básica en el áreade la biología molecular, lo que permitirá resol-ver problemas de interés agropecuario a nivellocal y regional.

Actualmente, a nivel mundial existe envarios centros de investigación y otros más detransferencia el firme propósito de simplificarlas técnicas de cultivo de tejidos, transformacióngenética y marcadores genéticos para que éstaspuedan ser utilizadas en mejoramiento genético,tanto de animales como vegetales, lo cual dará comofruto, en breve:

- Un mayor uso de estas técnicas en mejo-ramiento genético- Obtención de genotipos con la componentebiotecnológica


Dentro del nuevo contexto de desarrollo tec-nológico y comercial donde la liberación de laseconomías e interacción de los mercados in-ternacionales conviven, cobra gran importanciala protección de las invenciones biotecnológicas.

A nivel internacional, se ha propuesto elSistema de Patentes, este derecho confiere al titu-lar de la patente una protección monopólica"temporal" que tiene intrínsecamente un elevadovalor económico.

La posibilidad de contar con esta protec-ción monopólica temporal en el campo de labiotecnología es reciente. La Legislación en lamateria, en la mayoría de los países había conside-rado hasta hace poco que los cambios en materialbiológico se producían libremente sin interven-ción del hombre, por lo que no se podría hablarde invenciones.

Sin embargo, las aplicaciones a nivel indus-trial de las investigaciones de la ingeniería genéti-ca y biología molecular, han provocado la revi-sión del sistema de patentes en muchos paísesdesarrollados; donde se acepta actualmente elpatentamiento de nuevos seres vivos o, de losprocesos para su obtención. (Correa 1992).

En Estados Unidos desde el caso Chakrabartyen 1980, se admitó el patentamiento de un ser vivo(una nueva bacteria del grupo de Pseudomonascapaz de degradar 4 de los principales componen-tes del petróleo crudo).

Posteriormente, en 1985 en el caso Hibberd,se admitió la patentabilidad de plantas (cultivo detejidos de maíz), así como la de animales en 1988(con el ratón de "Harvard").

Debido a las presiones de los países indus-trializados, América Latina y el Caribe han dedi-cado grandes esfuerzos para revisar y adecuarsus legislaciones en la materia. Así, por ejemplo,México tiene una nueva Ley de Patentes vigentedesde el 27 de junio de 1991, en la cual son paten-tables las variedades vegetales, los procesosbiotecnológicos de obtención de farmacoquí-micos, medicamentos en general, bebidas y alimen-

tos para consumo animal y humano, fertilizantes,plaguicidas o "productos de actividad biológica".

La gran controversia con referencia a la pa-tentabilidad y no patentabilidad de productos yprocesos biotecnológicos, ha propiciado que envarios foros se argumenten los pros y los contrasde este tipo de monopolio temporal. Los paísesdel tercer mundo tienden a modificar sus legisla-ciones en pro de las patentes como una respuestaa los posibles riesgos de no otorgar patentes(como son las represalias comerciales, Solleiro 1990).Así se ha propiciado la realización de diferentesseminarios y reuniones científicas para el análisisde esos riesgos y de la conveniencia de enrolarseen el cambio propiciado por la corriente liberalque recorre Latinoamérica. Este tipo de foros reco-miendan que la participación de los diferentespaíses sea activa, reglamentando en favor de nues-tro desarrollo y protección.

Así, por ejemplo, se ha recomendado en lamedida de lo posible:

1. Buscar que sólo se otorgue protección aprocesos.

2. Excluir la posibilidad de patentar varieda-des vegetales o animales. Se recomiendabuscar alternativas como adoptar el sistemade la Unión para la Protección de las Obten-ciones Vegetales (UPOV) y, en el caso deanimales, a nivel internacional hay múlti-ples dudas sobre el patentamiento por lo quese recomienda mantenerse a la expectativamientras no haya respuestas satisfactorias aestas preguntas.

3. En el caso de conceder patentes a micro-organismos será indispensable exigir ladescripción completa y depósito de la cepa(Tratado de Budapest, Abril 1977).

4. Será necesario organizarse a nivel latinoa-mericano apoyándose en la OrganizaciónMundial de la Propiedad Intelectual (OMPI)y en el Programa Regional de Biotecno-logía (PNUD/ONUDI/UNESCO) paraestablecer una red de comunicación eficiente,"a nivel Latinoamericano",( ejem. CorreoElectrónico) que dé a conocer la informa-ción contenida en la patente.


5. Será requisito indispensable la obligaciónde explotar industrialmente la patente. Estopermitirá promover el uso de nuevas tecnolo-gías mediante el aprovechamiento concretode la invención , por lo tanto, no bloquearáel progreso tecnológico.

6. Se recomienda que los gobiernos latinoa-mericanos se reserven el derecho de otorgarlicencias obligatorias.

7. La vigencia de los títulos en los países deAmérica Latina puede ser más corta que enlos países industrializados lo que proporcio-naría un acceso más libre y rápido alconocimiento.

8. Finalmente, se recomienda a los países la-tinoamericanos y del Caribe elaborar enforma conjunta un programa de desarrollo enbiotecnología que les permita abordar conmayor seguridad los problemas inherentes alcambio propiciado por la revolución tecnoló-gica actual.

Bioseguridad

Dicho programa deberá contemplar losdiferentes sectores de la biotecnología con elpropósito de propiciar el desarrollo o apoyo a losCentros de Investigación Básica, Laboratoriosde Transferencia de Biotecnología, Comités adhoc relacionados con la implementación dereglamentos referentes a la Legislación de Paten-tes y la Bioseguridad. Este último tema es degran importancia para nuestros países, ya quedebemos establecer reglamentos que impidan queAmérica Latina llegue a convertirse en territoriode prueba, sobre todo tomando en cuenta el peli-gro que correría el germoplasma vegetal y animalconcentrado en esta zona privilegiada por lanaturaleza.

Al respecto, algunos países desarrolladoscomo Australia, Canadá y Estados Unidos deAmérica, tienen reglamentaciones precisas conreferencia a la evaluación en el campo de organis-mos genéticamente modificados (NationalResearch Council 1989).

Así por ejemplo, el Consejo Nacional deInvestigaciones (NRC) de la Académica Nacionalde Ciencias en E.U.A., dio siete recomendacio-nes para la evaluación de plantas transgénicas, yaque en animales se abstuvieron por la complejidadque involucra su introducción al ambiente. Susconsideraciones se basan en las condicionesecológicas que prevalecen en los Estados Unidos,sobre todo en lo referente a especies silvestres. Lassiete consideraciones son:

1. Las plantas modificadas por métodos clási-cos de mejoramiento, se juzgan seguras parala evaluación en el campo, sobre la base de lasexperiencias con cientos de miles de genotiposevaluados en el campo por varias décadas enese país.El Comité enfatiza que los métodos comunespara tomar decisiones acerca de las introduccio-nes de plantas clásicamente mejoradas soncompletamente apropiadas.

2. Los granos de plantas modificadas pormétodos moleculares y celulares no debenposeer riesgos diferentes de aquellosmodificados por métodos genéticos clásicospara características similares. Con forme losmétodos moleculares sean más específicos,los usuarios de estos métodos estarán másseguros de las características que introducen ala planta.Las características que no sean familiares enuna planta específica requerirán una evaluacióncuidadosa en pruebas a pequeña escala dondelas plantas que exhiban fenotipos indeseablesserán destruidas.

3. En este momento, en E.U.A. el potencial de lasmalezas para aumentar sus poblaciones es elprincipal riesgo ambiental que se precibe conlas introducciones de plantas genéticamentemodificadas.

4. El confinamiento es la condición primaria paraque se tenga seguridad de introducciones encampo de plantas clásicamente modificadas.

5. Dependiendo de las especies cultivadas lasopciones probadas de confinamiento incluyenlos sistemas biológicos, químicos, físicos deespacio y aislamiento temporal, así como eltamaño de la parcela experimental.


6. Las plantas cultivadas dentro de un confi-namiento para propósitos experimentalesraramente causan problemas en el ecosistemanatural.

7. Las opciones de confinamiento establecidasson tan aplicables a las introducciones en campode plantas modificadas por métodos molecu-lares y celulares, como para las introducciones de plantas modificadas por métodos ge-néticos clásicos.

Como podemos observar a través de unejemplo de reglamentación, no tenemos porquealarmarnos sí establecemos las reglas para que ennuestros paises se puedan probar materialestransgénicos.

CONCLUSIONES

En resumen hemos tratado de dar una pano-rámica de la utilización de las herramientasbiotecnológicas en el Sector Agropecuario, asícomo sus implicaciones en el contexto legal deMercadeo, Propiedad Intelectual y Bioseguridad.

Por otro lado y de acuerdo a las posibilidadesen cada país así como a la capacidad de colabora-cion internacional, podríamos concluir de loanteriormente expuesto que:

1. Es posible la rápida integración de la com-ponente biotecnológica a los procesos demejoramiento genético en América Latina

2. Es necesaria la integración de los países deAmerica Latina para la elaboración de unalegislación común en materia de PropiedadIntelectual y Bioseguridad.

3. El desarrollo armónico de las nuevas técni-cas biotecnológicas en América Latina,dependerá de las políticas comunes en la ma-teria que determinen en forma unificadanuestras Naciones (mediante un ProgramaCooperativo).

Espero que así como en esta XXXIX Reu-nión del PCCCMCA, se observa el poder de laorganización y la cooperación internacional, en lo

que se refiere al mejoramiento de especies vege-tales y animales, muy pronto podamos unir esfuer-zos, todos los países de América Latina y elCaribe, para contribuir a la conservación y desa-rrollo armónico del sector agropecuario en nuestraregión bajo esta nueva perpectiva del uso de lasherramientas biotecnológicas.

LITERATURA CITADA

ALISSA, A.; R. JONARD; H. SERIEYS; P.VINCOURT, 1986. La culture d’embryons isolesin vitro dans un programme d’amèlioration duTournesol C.R. Acad. Sc. Paris t.302, Serie II, no 5,p. 161-164.

AL-YASIRI, S. A; COYNE D. P. 1966. Interspecifichybridizationin the genus Phaseolus. Crop. Science6:59-60.

ATKINSON, R. G.; GARDER, R. C. 1991.Agrobacterium-mediated transformation of pepinoand regeneration of transgenic Plants. Plant CellReports V. 10(4): 208-212.

AZPIROZ, H. S.; P. VINCOURT; H. SERIEYS; A.GALLAIS, 1987. La culture in vitro des embryonsimmatures dans l’accélération du cycle deselection des lignés detournesol et ses effetsmorphovègétatifs. Helia 10, 35-38.

____________, P. VINCOURT; H. SERIEYS. 1988Utilization of in vitro test as an early screeningtechnique for drought stress evaluation insunflower. Proc. 12th. International SunflowerConf. Novi Sad, Yugoslavia. pp.207-213.

BARLEY, D.; DENIS, L.; BACKERT, M. 1989.Comparison of the aptitude for anter culture insome androgenic doubled haploid maize lines.Maydica 34:303-308.

BOHOROVA, N. E.; HOISINGTON, D. 1991. Maizetissue at CIMMYT. Memorias del Simposio:Actualidades de la Biotecnología Vegetal enMéxico. Sociedad Mexicana de Fitogenética, A. C.27-29.

BOUGUERRRA, M. L. 1992. Les virus modifiés: Unenouvelle arme biologique contre les chenilles?. LaRecherche No 241, 23: 364-365.


BULL, A. T.; G. HOLT; M. D. LILLY, 1982. Biotechno-logy: International Trends and Perspectives,OECD. Paris.

CLAPHAM, D. 1971. In vitro development of callusfrom de pollen of Lolium and Hordeum Z.Pflanzenzucht 65; 285-292.

CORREA, C. M. 1990. Patentes y Biotecnología:Opciones para America Latina. In: Biotecnologíay patentes. Revista de Derecho Industrial. No. 34:p. 5-53.

CONEY, D. P. 1966. Species hybridization inPhaseolus J. Hered. 55: 5-6.

CUYANG T. W.; HU, H.; CHUAG, C. C. ; TSENG,C. C. 1973. Inductions of pollen plants fromanthers of Triticum aestivum L. cultured in vitro.Sci. Sinica 16: 79-95.

CHU, C. C.; WANG, C. C.; SUN, C. S.; HSU, C.;YIN, K. C.; CHU, C. Y. 1975. Establishement ofan efficient medium for anther culture of ricethrough comparative experiments on the nitrogensources. Sci. Sin 16. 659-688.

FISCHER, M. 1990. Aplicaciones de la biotecnologíaen la mejora de cereales. (Mimeografiado). Colegiode Postgraduados. Montecillo, Méx. p. 48.

FISCHER, M.; AZPIROZ, S.; Hoisington, D. 1991.Comparison of RFLP and RAPD technologies foranalyzing genetic diversity in open-pollinatedmaize varieties. The International Society forPlant Molecular Biology. Third InternationalCongress Molecular Biology of Plant Growthand Development. Tucson, Arizona.

FiISCHHOFF, D. A.; BOWDISH, K. S.; PERLAK, F.L.; MARRONE, P. G.; CORMICK, S. M.;NIEDERMEYER, J. G.; DEAN, D. A.; KUSANO-KRETTZEMER, K.; MAYER, E. J.;ROCHESTER, D. E.; ROGERS, S. G.; FRALEY,R. T. 1987. Insect-tolerant transgenica tomatoplants. Bio/Technologie 5:807-813.

FROMM, M.; TAYLOR, L. P.; WALBOT, V. 1985.Expression of genes transforred into monocot anddicot plant cells by electroporation. Proc. Natl.Acad. Sci. USA 82: 5824-5828.

GOULD, J.; DEVEY, M.; HASEGAWA, O.; ULIAN,C. E.; PETERSON, G.; SMITH, R. 1991.

Transformation of Zea mays L. using Agrobacteriumtumefaciens and the shoot apex plant. Physiol. 95:426-434.

GREEN, C. E.; PHILIPS, R. I. 1975. Plant regenera-tion from tissue culture of maize. Crop Sci. 15:417-42.

GRIMSLEY, N.; HOHN, Y. T.; DAVIS, J. W.; HOHN;B. 1987. Agrobacterium mediated delivery ofinfections maize streak virus into maize plants.Nature 325: 177-179.

GRODZCKER, T.; WILLIAMS, J.; SHARP, P.;SAMBROOK, J. 1975. Physical mapping oftemperature sensitive mutations of adenoviruses.Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 39:439-446.

HANNA, W. W.; BASHAW, E. C. 1987. Apomixis:its identification and use in plant breeding. CropSc. 27:1136.

HERRERA-ESTRELLA, L.; DEPICKER, A.; VANMONTAGU, M.; SCHELL, J. 1983. Expressionof chimaeric genes transferred into plantcells usinga Ti-plasmid derived vector. Nature 303:209-213.

KLEE, H.; HORSCH, R.; ROGERS, S. 1987.Agrobacterium mediated plant transformationand its further applications to plant biology. Ann.Rev. Plant Physiol. 38: 487-496.

KLEIN, T. M.; WOLF, E. D.; WU, R.; SANDORF,J. C. 1987. High velocity microprojectiles fordelivering nucleic acids into living cells. Nature327: 70-73.

KLEIN, T. M.; GRADZIEL, T.; FROMM, M. E.;SANFORD, J. C. 1988. Factors influencing genedelivery into Zea mays cell by h i g h - v e l o c i t ymicroprojectiles. Biotechnology 6: 559-663.

LOPEZ, H. M.; J. P. MARTINEZ, 1993. Diferenciasgenotípicas en diversas especies de Brucella, dete-ctadas por la reacción en cadena de la polimerasa.En prensa. Monterrey, Nuevo León.

MARTINEZ, J. P.; D. S. LEAL; H. BARRERA, E. L.;CAB. 1993. Detección de Brucella Abortus pormedio de la reacción en cadena de la polimerasa.En prensa. Apdo. postal 3-425. Monterrey, NuevoLeón.


MELCHINGER, A. E.; MESSMER, M. M.; LEE, M.;WOODMAN, W. L.; LAMKEY, K. R. 1991.Diversity and relationships among U. S. maizeinbreds revealed by restriction fragment lengthpolymorphisms. Crop Sci. 31:669-678.

NAKATA, K.; TANAKA, M. 1968. Differentiation ofembriods from developing germ cells in antherculture of Tobacco. Jap. J. Genet. 43; 65-71.

NATIONAL RESEARCH COUNCIL 1989. Fieldtesting of genetically modified organisms. N.C.R.,U.S.A.

NEWELL, C. A.; ROZMAN, R.; HINCHEE, M. A.;LAWSON, E. C.; HALEY, L.; SANDERS, P.;KANIEWSKI, W., TUMER, N. E.; HORSCH, R.B.; FRALEY, R.T. 1991. Agrobacterium-mediatedtransformation of solanum tuberosum L. cv.'Russet Burbank! Plant cell reports V 10(1): 30-34.

RABAKOARIHANTA, A. D.; E. S. MOK; M. C.MOK, 1979. Fertilization an early embryodevelopment in reciprocal interspecific crosses ofPhaseolus. Theor. Appl. Genet 54 (2): 55-59

RODES, C. A.; LOWE, K. S.; RUBY, K. L. 1988aPlant regeneration from protoplast isolated fromembriogenic maize cell cultures. Biotechnology6:56-60.

_________,PIERCE, D. A.; METLER, T. J.;MASCARENHAS, D.; DETMER, J. J. 1988b.Genetically transformed maize plants fromprotoplasts. Science 240: 204-206.

ROGERS, S. G.; HORSCH, R. B.; FRALEY, R. T.1985. Gene transfer in plants: Production oftransformed plants using ti-plasmid vectors. InMethods for plant molecular biology (ed). A.Weisbach & H. Weissbach 423-436. Acad. PressNew York.

SAVIDAN, Y. 1986. Apomixis as a new tool toincrease grain crop productions in semi-arid tropics,a research proyect. Agriculture, ecosystems andenvironment. 16:285.

SMITH, J. S. S.; SMITH, O. S. 1991. Restrictionfragment length polymorphisms can differentiateamong U. S. maize hibrids. Crop Sc. 31:893-899.

SOLLEIRO, J. L. 1990. Patentes en Biotecnología:Oportunidades, amenazas y opciones para

América Latina en: Biotecnología y Patentes.Revista de Derecho Industrial No. 34. pág. 107-142.

SOLLEIRO, J. L. 1991. Patentes en Biotecnología:Oportunidades, amenazas y opciones para Améri-ca Latina y el Caribe. In: Políticas de la propiedadindustrial de inventos biotecnológicos y uso degermoplasma en America Latina y el Caribe. Ed.Instituto Interamericano de Cooperación para laAgricultura (IICA). p. 343-380.

STEWART, L. M.; M. H. HIRST; M. LOPEZ FEBER;A. I. MENYWEATHER; P. J. CLAYLEY; R. D.POSSEE. 1991. Construction of an improvedbaculo virus insecticide containing an insect-specifictoxin gene. nature vol 352:85-22

THORPE, T. A. 1980. Organogenesisi in vitro:structural physiological and biochemical aspects:Int. Rev. of Cytology, Supplement 11A: 71-111.

TOMALSKI, M. D.; L. K. MILLER, 1991. Insectparalysis by baculo virus mediated expression of amite neurotoxin gene. nature. vol. 352:82-85

TRAN THANH VAN, M. 1980. control of morphogenesisby inherent and exogenously applied factors in thincell layers. Int. Rev. of Cytology Supplement 11A:175-194.

UEMATSU, C.; MURASE, M.; ICHIKAWA, H.;IMAMURA, J. 1991. Agrobacterium-mediatedtransformation and regeneration of Kiwi fruit: PlanCell Reports V. 10(6/7): 286-290.

VAN BRUNT, J. 1988. Molecular Farming:Transgenic animals as bioreactors Bioltechnology.Vol. 6 No. 10 1159-1154. Welsh J. and McClellandM. 1990. Finger printing genomes using PCR witharbitrary primers. Nucl. Acids Res. 18:7213-7218.

WELSH, J.; McCLELLAND, M. 1990. Finger printinggenomes using PCR with arbitrary primers. Nucl.Acids Res. 18: 7213-7218.

WILLIAMS, J. G. K.; KUBELIK, A. R.; LIVAK,K. J.; RAFALSKI J, A.; TINGEY, S. W. 1990DNA polymorphisms amplified by arbitraryprimer are useful as genetic markers. NucleicAcids Res.: 18:6531-6535.

WINTON, L. L.; VERHAGEN, S. A. 1977. Shots fromDouglas-fir cultures. Can. J. Bot. 55: 1246-1250.


ZAMBRYSKIi, P.; HERRERA-ESTRELLA, L.; DEBLOCK, M.; VAN MONTAGU, M.; SCHELL,J. 1984. The use of the tiplasmid of Agrobacteriumto study the transfer and expression of foreingDNA in plant cells; new vectors and methods. InGenetic engineering: Principles & Methods. (ed) J.K. Setlow. S. A., Hollaender 6: 253-278. New York/London: Plenum.

ANALISIS Y COMENTARIOS LA BIOTECNIA Y EL … · ventajas y desventajas del uso de cada una de las...

Documents

Transcript of ANALISIS Y COMENTARIOS LA BIOTECNIA Y EL … · ventajas y desventajas del uso de cada una de las...