ANÁLISIS EN FRESCO DE PECES

SANIDAD ACUICOLA 2013

• ANATOMIA EXTERNA E INTERNA DE PECES OSEOS Y CARTILAGINOSOS

PROTOCOLOS GENERALES DE DIAGNÓSTICO

• Niveles de actuación• 1 Información básica y situación epidemiológica

general• 2 Historia clínica y anamnesis• 3 Examen "in situ"• 4 Selección y envío de muestras• 5 Análisis directo de los peces• 6 Pruebas “rápidas” directas• 7 Análisis complementarios• 8 Diagnóstico e interpretación de los resultados

ANAMNESIS E HISTORIA CLÍNICA

Sobre la instalación y el problema observado:

• - Características del sistema de cultivo: Jaulas, esteros.• - Localización geográfica.• - Situación dentro de la granja de las unidades afectadas• - Historiales de enfermedades previas• - Especies afectadas: Si tenemos más de una en nuestra instalación• - Rango de tallas afectadas: Tamaño, edad• - Alimentación: Tipo y pautas• - Problema específico que se ha observado: Mortalidad, mal crecimiento, anorexia• - Desde cuándo se observa ese problema• - Día donde ha comenzado el problema: “Síndrome del fin de semana”• - Condiciones ambientales y climatología previa al problema.• - Historial previo de situación de estrés: Movimientos, clasificaciones• - Tratamientos terapéuticos y vacunaciones administradas• - Temperatura: Niveles de riesgo, variaciones bruscas• - Evolución en el tiempo de la mortalidad: Aguda, crónica, intermitente.

Sobre los peces:• - Respuesta a estímulos: Alimentación, captura• - Distribución de los peces en el agua: Aislados, en

grupo, en superficie• - Alteraciones de la natación: Ataxia, errática, en

círculos, “rascado”• - Alteraciones de la actividad respiratoria: Rápida,

lenta• - Alteraciones en el aspecto externo• - Se observa alguna lesión interna

PROCEDIMIENTO DE LA NECROPSIA

• Para la realización de la necropsia realizaremos las siguientes operaciones:

• 1- Extracción del ojo(s) de su(s) órbita(s) y examen interno

• 2- Separación del opérculo y exposición de branquias

• 3- Apertura de la cavidad abdominal• 4- Apertura y exposición del cerebro• 5- Observación de la musculatura

1.- Extracción del globo ocular de la órbita.

Lo observaremos y realizaremos una incisión en su plano medio para evidenciar su interior. Nos fijaremos en su forma, la presencia de la retina y el cristalino, su aspecto y la presencia de alteraciones como masas anormales de tejido, sangre, burbujas de aire, opacidad de córnea o de cristalino, etc.

2.- Separación de opérculo y observación de branquias.

• Procederemos a cortar el opérculo, observando también su cara interna. Procederemos posteriormente a observar cada uno de los arcos branquiales observando su color, aspecto y presencia de formaciones extrañas.

3.- Apertura de la cavidad abdominal

• . Para la apertura de la cavidad abdominal, procederemos del modo siguiente:

• - Realizaremos una incisión a nivel del ano (recomendamos con tijeras), dirigiéndonos en unos 45 grados y en dirección craneal hacia la línea lateral del ejemplar, siguiendo la incisión cranealmente más o menos a nivel de esta línea lateral hasta llegar a la región branquial.

• - A continuación, volveremos al ano y realizaremos una incisión en dirección craneal en la línea media ventral hasta llegar a la base de las branquias.

• - Realizaremos una tercera incisión uniendo los dos cortes en la zona branquial y podremos levantar la pared abdominal.

• Al levantarla, observaremos si hay adherencias y el aspecto que presenta la cara interna del abdomen.

• Reconoceremos todos y cada uno de los órganos internos, su color y aspecto.

• Retiraremos la vejiga natatoria para exponer mejor el riñón.

• También podemos cortar a nivel de esófago e intestino posterior y extraer el paquete visceral para su mejor examen. En este punto observaremos y anotaremos cualquier lesión que aparezca.

• Más adelante del capítulo comentaremos las más importantes que podemos encontrar.

4.- Apertura del cráneo y exposición del sistema nervioso central.

• Esta técnica es bastante variable según la especie y la localización del cerebro en ésta.

• La apertura puede iniciarse por una incisión entre las narinas, para seguir de forma simétrica hacia la zona superior de cada una de las órbitas oculares.

• Desde esta zona hay que seguir cortando el cráneo en dirección caudal hasta llegar a la zona de separación entre cráneo y tronco y unir las dos incisiones paralelas.

• Posteriormente y haciendo palanca con las pinzas, levantar cuidadosamente para exponer el encéfalo.

5- Observación de la musculatura

• Es conveniente también levantar la piel de la región media para observar el aspecto de la musculatura.

• Una sección transversal de la cola del pez puede ser también útil para examinar la musculatura.

• Esta maniobra puede realizarse también al inicio del proceso de la necropsia.

• 1. El corazón bombea sangre hacia las branquias.• 2. La sangre es aireada en las branquias.• 3. La sangre arterial es dispersada dentro de los capilares, donde tiene lugar la transferencia de

oxígeno y nutrientes al tejido circundante.• 4. Los nutrientes del alimento ingerido son absorbidos del intestino y transportados al hígado y

posteriormente dispersados en la sangre a lo lardo de todo el cuerpo.• 5. En los riñones la sangre es "purificada" y los productos de desecho son excretados por vía urinaria.http://www.fao.org/docrep/v7180s/v7180s04.htm

PRUEBAS DIAGNÓSTICAS RÁPIDAS

• Además de la necropsia, puede hacerse una observación con lupa binocular de los

• órganos, además de una serie de pruebas directas que son de realización fácil y rápida

• que son muy útiles en el diagnóstico patológico en peces, sobre todo en planta. Estas

• pruebas son las siguientes:

• RASPADOS DE PIEL• - PREPARACIÓN EN FRESCO DE BRANQUIA• - "SQUASHES" DE TEJIDO: Cerebro y órganos

internos• - IMPRONTAS DE BRANQUIA• - IMPRONTAS DE TEJIDOS• - PREPARACIONES DE LÍQUIDO BILIAR Y ASCÍTICO• - PREPARACIONES DE CONTENIDO INTESTINAL• - PREPARACIONES DE MUSCULATURA

Raspados de piel

• En los raspados de piel podremos detectar la presencia de ectoparásitos como

• protozoos ciliados, monogenea, bacterias, hongos etc. El procedimiento es bastante

• simple.• a/ Raspar la superficie del cuerpo y de las aletas

del pez a examinar usando una hoja de• bisturí o simplemente mediante un

portaobjetos

Preparaciones en fresco de branquia

• Esta sencilla técnica puede darnos, con un mínimo de experiencia, bastante información

• acerca del estado y las patologías de un órgano diana como la branquia.

• a/ Tomar uno de los arcos branquiales y separar parte de los filamentos del eje del arco

• hasta que se individualicen los distintos filamentos.

"Squashes” de tejido

• Esta técnica está especialmente indicada para la detección de parásitos en los órganos.

• a/ Cortar una sección fina y de pequeño tamaño del tejido a examinar.

• b/ Cubrir con un cubreobjetos haciendo presión suave hasta que vemos que el tejido se

• expande e introducir solución salina de la misma forma que describimos en el raspado

• de piel.• c/ Observar al microscopio

Improntas de branquia y tejidos

• En estas muestras se pueden observar la presencia de parásitos y bacterias en los diferentes tejidos.

• A Cortar un trozo pequeño del órgano o branquia a examinar y con unas pinzas presionar varias veces con este trozo sobre la superficie de un portaobjetos, hasta que veamos que deja una huella.

• B Dejar secar al aire o secar a la llama • C Teñir con las coloraciones habituales. Particularmente rápidas son

las tinciones de Giemsa, Diff-Quick y especialmente la tinción de GRAM

• D Observación al microscopio. A 1000x aumentos, si existe una infección bacteriana activa, las bacterias puedes ser observadas claramente.

• Hay que prestar atención a su morfología, tamaño y disposición dentro de los órganos.

• Ejemplos de bacterias que se pueden observar:

• GRAM negativa, bacilos muy largos, formaciones en red: Tenacibaculum maritimum

• GRAM negativa, bacilos muy cortos, tinción bipolar, agrupados, intracelulares: Photobacterium damselae sp piscicida.

• GRAM negativa, bacilos largos, forma de coma: Vibrios

Preparaciones de líquido biliar, ascítico y contenido intestinal

• También el examen del líquido ascítico, bilis o contenido intestinal pueden aportar información.

• En líquido ascítico podremos observar la presencia de células inflamatorias, macrófagos con bacterias, bacterias libres, hongos, etc.

• En la bilis y contenido intestinal podremos observar la presencia de parásitos (sobre todo mixosporidios) y algunos microorganismos (aunque considerando siempre la posibilidad de contaminación retrógrada de la bilis procedente del tubo digestivo). Ambos líquidos pueden recogerse mediante una punción con aguja.

• El líquido ascítico lo trataremos como si fuera para realizar una extensión de sangre mientras que el líquido biliar lo depositaremos en un portaobjetos, pondremos un cubreobjetos y lo examinaremos directamente al microscopio.

• Para el examen del contenido intestinal, cortaremos una sección del intestino y realizaremos un raspado de la mucosa, depositando este material en un portaobjetos, lo cubriremos y examinaremos.

Preparaciones de musculatura• Para los casos de control de parásitos en musculatura podemos

aprovechar la técnica que se utiliza para el control de Triquinas en el músculo de cerdo.

• Consiste en dos placas de cristal (placas de triquina) que se unen a presión con unos tornillos. La muestra de musculatura se introduce entre ambos cristales y se hace presión con los tornillos para que se extienda bien

• Observando esta placa en la lupa se puede observar la presencia de quistes de parásitos, nematodos, etc.

• Otra forma más sencilla consiste en cortar un trocito pequeño de músculo donde sospechemos que están los parásitos y lo colocaremos entre dos portaobjetos o entre un porta y un cubreobjetos.

• Examinaremos a condensador cerrado.