Alter Ac i Ones Faineticor Maco Cine Tica

7/24/2019 Alter Ac i Ones Faineticor Maco Cine Tica

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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA

SECCION DE ESTUDIOS DE POSGRADO E INVESTIGACION

Alteraciones en la Farmacocintica de la Fenacetinainducida por Lesin Medular

QUE PARA OBTENER EL GRADO DEDOCTOR EN CIENCIAS

PRESENTA

M en F. Leticia Cruz Antonio

DIRECTOR DE TESIS

Dr. Gilberto Castaeda Hernndez

Dr. Francisco Javier Flores Murrieta

2006


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El trabajo experimental de esta tesis se desarrollo en el

laboratorio de Farmacocintica del Centro de

Investigacin Proyecto Camina A.C., bajo la direccin del

Dr. Gilberto Castaeda Hernndez y del Dr. Francisco

Javier Flores Murrieta .


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Dedicatorias

A mis padres: amigos, maestros y motividadores

incansables a que logre da a da lo que me proponga,

siguiendo su ejemplo de amor, rectitud, fortaleza y

entusiasmo.

A mi hermana, hermanos, cuadas, sobrinas y

sobrinos:por su amor y apoyo incondicional.


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Agradecimientos

A Dios, por hacerse presente en cada instante de

mi vida.


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Agradecimientos

Con especial admiracin y respeto al Dr Gilberto Castaeda

Hernndez, quien adems de siempre brindarme su incondicional

apoyo, confianza, enseanzas y amistad, es y ser el ejemplo a

seguir para continuar creciendo profesionalmente y alcanzar la

excelencia en cada meta propuesta.

A los miembros de la comisin revisora de esta tesis por sus

comentarios y sugerencias que enriquecieron la culminacin de

este trabajo. Dr. Francisco J. Flores Murrieta, Dr. Guillermo

Ceballos Reyes, Dr. Jorge Eduardo Herrera Abarca, Dra. Patricia

Garca Lpez y Dr. Castillo Henkel.


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Agradecimientos

A mis compaeros y amigos del laboratorio 34 de la seccin externa de

Farmacologa del CINVESTAV, en especial a la QFB. Lourdes

Gonzlez, por la amistad brindada.

A todo el personal de Proyecto Camina, con especial afecto al Dr. Gabriel

Guzar Sahagn y la MVZ. Angelina Cruz M., por su apoyo y

enseanzas.

A la Universidad Nacional Autnoma de Mxico, por la beca otorgada a

travs del Programada de Apoyos para la Superacin del Personal

Acadmico de la UNAM (PASPA).

A mis amigas y compaeras de aventuras acadmicas: Irma, Cire, Tila,

Francis, Ll y Angelita.

A mi entraable maestro y amigo Dr. Andrs Navarrete Castro.

A todas aquellas personas que de una u otra forma estuvieron presentes

apoyando y enriqueciendo este trabajo.


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Resultados de esta investigacin se presentaron y estn publicados en:

45th Annual Meeting of the Western Pharmacology Society. Mazatln, Sin.

Mxico. Alteration of phenacetin pharmacokineticas after experimental spinal

cord injury. L. Cruz,G. Castaeda-Hernndez, F.J. Flores-Murrieta,

P.Garca-Lpez& G. Guzar Sahagn.

46th Annual Meeting of the Western Pharmacology Society. Lake Tahoe,

Nevada, USA. Effect of experimental spinal cord injury on Phenacetin

Pharmacocokinetics and metabolism after i.v. and oral Administration. L.

Cruz , F.J. Flores-Murrieta, G, Castaeda-Hernndez& G. Guzar-Sahagn.

XXXVI Congreso Nacional de Ciencias Farmacuticas. Cancn, Quintana,

Roo, Mxico. Desarrollo y validacin de un mtodo por CLAR para la

determinacin de Fenacetina y acetaminofn en sangre de rata: Una

aplicacin para estudios farmacocinticos. Cruz-Antonio Leticia, Castaeda-

Hernndez Gilberto, Flores-Murrieta Francisco Javier, Garca-LpezPatricia,

Guzar-Sahagn Gabriel.

Alteration of phenacetin pharmacokinetics after experimental spinal cord

injury. (2003). L. Cruz, G. Castaeda-Hernndez, F.J. Flores-Murrieta,

P.Garca-Lpez & G. Guzar Sahagn. Proccedings of the Western

Pharmacology Society. 46: 198.

Understanding Drug Disposition Alterations Induced by Spinal Cord Injury:

Role of Injury Level and Route of Administration for Agents Submitted to

Extensive Liver Metabolism. (2006). Leticia Cruz-Antonio, Francisco Javier

Flores-Murrieta, Patricia Garca-Lpez, Gabriel Guzar-Sahagn, and Gilberto

Castaeda-Hernndez. Journal of Neurotrauma. 23(1):75-85.


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NDICE

Pgina

ABSTRACT.................................................................................................. 13

RESUMEN................................................................................................... 141 FUNDAMENTO...................................................................................... 16

1.1. Farmacocintica............................................................................... 16

1.1.1. Factores que afectan las etapas de la Farmacocintica........ 20

1.1.1.1. Absorcin..................................................................... 20

1.1.1.2. Distribucin................................................................... 21

1.1.1.3. Biotransformacin........................................................ 22

1.1.1.4. Eliminacin................................................................... 25

1.2. Lesin Traumtica de Mdula Espinal............................................. 26

1.2.1. Incidencia de la lesin traumtica de mdula

espinal.......................................................................................26

1.2.2. Aspectos fisiopatolgicos del trauma medular....................... 28

1.2.3. Alteraciones metablicas y sistmicas secundarias a la

Lesin Traumtica de la Mdula Espinal...................................

311.2.4. Cambios Farmacocinticos atribuidos a una Lesin

Traumtica de Mdula Espinal..................................................

341.2.4.1. En estudios Clnicos..................................................... 34

1.2.4.2. En estudios con modelos experimentales.................... 36

1.3. Importancia y descripcin de modelos experimentales de lesin

medular............................................................................................

371.4. Fenacetina........................................................................................ 40

1.5. Validacin......................................................................................... 41

1.5.1. Selectividad......................................................................... 42

1.5.2. Intervalo lineal y Funcin respuesta....................................... 42

1.5.3. Exactitud y Precisin.............................................................. 43

1.5.4. Lmite de cuantificacin.......................................................... 44

1.5.5. Lmite de deteccin................................................................ 44


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11

1.5.6. Estabilidad de la muestra....................................................... 44

2 JUSTIFICACIN..................................................................................... 46

3 HIPTESIS............................................................................................. 49

4 OBJETIVOS............................................................................................ 50

4. 1 Objetivo general.............................................................................. 50

4.1.1. Objetivos particulares............................................................. 50

5 MATERIALES Y MTODOS.................................................................. 51

5.1. Metodologa Analtica por Cromatografa Lquida de Alta

Resolucin para la Cuantificacin de Fenacetina y Acetaminofn

en sangre de rata..........................................................................

53

5.1.1. Condiciones cromatogrficas.................................................. 53

5.1.2 Procedimiento general para el anlisis de muestras para lavalidacin................................................................................

535.1.3 Muestras blanco para la validacin.......................................... 54

5.1.4. Muestras de tratamientos........................................................ 54

5.2. Validacin del mtodo analtico........................................................ 54

5.2.1. Selectividad............................................................................. 54

5.2.2. Intervalo Lineal y Funcin Respuesta..................................... 54

5.2.3. Exactitud y Precisin.............................................................. 55

5.2.4. Lmite de cuantificacin.......................................................... 55

5.2.5. Limite de deteccin................................................................. 56

5.2.6. Estabilidad de la muestra....................................................... 56

5.3. Condiciones Generales para los Estudios farmacocinticos....... 56

5.3.1. Animales de experimentacin................................................ 56

5.3.2. Anestesia................................................................................ 56

5.3.3. Laminectoma......................................................................... 57

5.3.4. Lesin medular a nivel T1 y T8.............................................. 57

5.3.5. Cuidados post-operatorios..................................................... 58

5.3.6. Administracin del frmaco..................................................... 58

5.3.7. Toma de muestras.................................................................. 58

5.3.8. Anlisis de las muestras.......................................................... 59


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12

5.4. Efecto del nivel de la lesin medular experimental a nivel T1 y

T8 sobre la farmacocintica de la fenacetina en una

administracin intravenosa y oral................................................

59

5.5. El efecto de los cambios farmacocinticos de la fenacetina en

una lesin traumtica de mdula espinal en fase de choque

medular experimental sobre la biodisponibilidad de la

fenacetina....................................................................................60

5.6. Influencia de una lesin traumtica de mdula espinal en fase

de choque medular experimental en la cintica del principal

metabolito (acetaminofn) de la fenacetina.................................

60

5.7 Clculos farmacocinticos............................................................ 60

5.8 Anlisis estadstico....................................................................... 616 RESULTADOS....................................................................................... 63

7 ANLISIS DE RESULTADOS................................................................ 94

8 CONCLUSIONES................................................................................... 110

9 PERSPECTIVAS DEL TRABAJO........................................................... 111

10 ANEXO................................................................................................ 112

11 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS....................................................... 127


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ABSTRACT

It has been previously reported that acute spinal cord injury (SCI)

produces hemodynamic alterations, including a significant reduction in liver

blood flow which is more pronounced after a high than after a low lesion. Todetermine if these changes have an impact in the pharmacokinetics of high

extraction drugs (i.e. which clearance mainly depends on liver blood flow) we

studied the pharmacokinetics of a model compound, phenacetin, and of its

main metabolite, acetaminophen, in rats 24 h after a high (T1) or a low (T8)

SCI, as well as in sham-lesioned controls. SCI induced significant alterations

in the pharmacokinetics and metabolism of phenacetin. After iv administration

to animals with SCI, reductions in drug clearance and distribution leaded to

an increase in drug blood concentrations which was more pronounced after

the high than after the low injury, as expected from the reported data on SCI-

induced hemodynamic changes. After oral administration, phenacetin blood

levels were similar in sham-lesioned and T1-injured animals, but decreased

by injury at T8. This is likely due to a reduction in drug absorption which

compensates the changes in distribution and elimination induced by injury at

T1, whereas it prevails in T8-lesioned animals. Acetaminophen blood

concentrations after iv phenacetin administration were reduced by SCI likely

by the reduction in biotransformation, but this reduction was less important

than expected as it was compensated by an impairment in the elimination of

the metabolite. After oral phenacetin administration, acetaminophen blood

levels were similar in T1-injured and control rats probably due to a

compensation between alterations in the absorption, first pass effect,

distribution and elimination of the parent compound as well as in the

distribution and elimination of the metabolite. After SCI at T8, the reduction indrug absorption prevails in a manner that acetaminophen blood levels are

reduced. Results demonstrate that SCI significantly alters the

pharmacokinetics of high extraction drugs. The outcome of such alterations

depend on the level of SCI and on the route of drug administration.


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RESUMEN

Previamente se ha reportado que una lesin traumtica de mdula

espinal (LTME) en etapa aguda provoca alteraciones hemodinmicas,

incluyendo una reduccin importante en el flujo sanguneo heptico el cual es

ms evidente a niveles altos de la lesin que en niveles bajos. Para

determinar si estos cambios tienen un impacto en la farmacocintica de

frmacos de alta extraccin (en los cuales su depuracin depende de flujo

sanguneo heptico), se estudio la farmacocintica de un frmaco usado

como modelo, la fenacetina y su principal metabolito, acetaminofn, en ratas

24 horas despus de una LTME alta (nivel torcico, T1) o baja (nivel torcico,

T8), as como tambin en un grupo control (sin LTME). Encontrndose que laLTME provoca alteraciones significativas en la farmacocintica y

metabolismo de la fenacetina.

Posterior a la administracin intravenosa a los animales con LTME, la

reduccin en depuracin y distribucin provocaron un incremento en las

concentraciones sanguneas del frmaco las cuales fueron mas evidentes en

los animales con lesin alta (T1) que con los de baja (T8), tal como se

esperaba a partir de los datos en cambios hemodinmicos promovidos por la

LTME. Despus de la administracin oral, los niveles sanguneos de

fenacetina fueron similares en los animales lesionados a nivel T1 y en el

grupo control, pero decrecieron con los animales lesionados a T8. Los

resultados a nivel T1 fueron probablemente debido a que si bien existi una

disminucin de la absorcin del frmaco, sta fue compensada por los

cambios en distribucin y eliminacin inducidas por la lesin a nivel T1, en

tanto a nivel T8 la disminucin en absorcin prevaleci. Las concentraciones

del acetaminofn despus de la administracin intravenosa de fenacetina

fueron disminuidas significativamente cuando la lesin medular esta

presente, factiblemente debido a la reduccin en la biotransformacin, pero

esta reduccin no fue evidenciada nivel dependiente como se esperaba,

posiblemente como consecuencia de la compensacin por un impedimento


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en la eliminacin del metabolito. Inmediatamente despus de la

administracin oral de fenacetina, los niveles sanguneos de acetaminofn

fueron similares en los grupo control y el lesionado en T1, debido a la

compensacin entre alteraciones en la absorcin, efecto de primer paso,

distribucin y eliminacin del metabolito; en tanto que en la LTME a nivel T8,

la reduccin en la absorcin del frmaco prevalece en forma tal que los

niveles sanguneos de acetaminofn fueron disminuidos. Estos resultados

demuestran que la LTME altera significativamente la farmacocintica de

frmacos de alta extraccin, donde tales alteraciones dependen del nivel

lesin y de la ruta de administracin del frmaco.


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Alteraciones en la Farmacocintica de la Fenacetina inducidapor Lesin Medular.

1. FUNDAMENTO

1.1 Farmacocintica.

El objetivo de la farmacoterapia es prevenir, curar o controlar diversas

anormalidades patolgicas. Para lograrlo se deben administrar dosis

adecuadas de frmacos, de tal forma que se alcancen niveles teraputicos

que no produzcan toxicidad. Se reconocen cuatro vas fundamentales de

movilizacin y modificacin de una sustancia en el organismo: absorcin,

distribucin, metabolismo y eliminacin, que controlan la velocidad del inicio

de accin de un agente, la intensidad de su accin y la duracin de su efecto.

La farmacocintica se refiere a los cambios cuantitativos totales de un

frmaco en el organismo y a su concentracin en el plasma, considera

tambin el tiempo tras su administracin por diferentes vas. Las

interacciones de los procesos mencionados anteriormente determinan el

perfil farmacocintico de un medicamento. La importancia de identificar la

farmacocintica de un agente no solo reside en la definicin de los factores

que modifican su concentracin y persistencia en el organismo, tambin en la

posibilidad de adecuar el uso de frmacos en condiciones especificas

(Endrenyi, 1989).

De un modo ideal, debera existir una relacin constante entre la dosis

administrada y la concentracin plasmtica y tisular, y entre la tisular y el

efecto teraputico o txico; sin embargo, no es as en primer lugar, existendiferencias entre unas personas y otras con relacin a los procesos de

absorcin, distribucin y eliminacin, lo que hace que una dosis determinada

origine efectos diversos en individuos distintos. En conjunto, gran parte de

las diferencias inter individuales en la respuesta a una dosis media o

estndar se debe a las diferencias en los procesos farmacocinticos, lo que


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repercute en los niveles plasmticos alcanzados. De aqu que la

determinacin del nivel plasmtico de los frmacos sea un procedimiento til

para detectar estas diferencias e individualizar untratamiento. No obstante,existen tambin factores que pueden alterar el significado de nivel

plasmtico, haciendo que un mismo nivel origine efectos distintos (Endrenyi,

1989; Nies y Spielberg, 1996).

Dado que la farmacocintica estudia los procesos y factores que

determinan la cantidad de frmaco presente en el sitio en que debe ejercer

su efecto biolgico en cada momento, a partir de la aplicacin del frmaco

sobre el organismo vivo, se requiere del anlisis de las concentraciones de

frmacos y sus metabolitos en los lquidos orgnicos. El movimiento de los

frmacos est sometido a leyes formulables por modelos matemticos,donde sus representaciones facilitan la descripcin del curso temporal de su

disposicin en el organismo y su conocimiento proporciona importante

informacin para valorar o predecir la accin teraputica o txica de un

frmaco (Endrenyi,1989; Arms y Trovis,1988).

Es posible seguir el avance de un frmaco en el organismo a travs de

un perfil plasmtico, el cual pude describir las variaciones sufridas por la

concentracin de un frmaco en el plasma, desde su administracin hasta su

desaparicin del organismo. Tras la administracin oral de un frmaco, la

concentracin plasmtica, alcanza un mximo y luego desciende (Figura

1.1). Esta variacin temporal se debe a la intervencin de los diversos

procesos farmacocinticos, que actan con intensidad diferente. As, al inicio

predomina la velocidad de absorcin sobre la distribucin y la eliminacin, y

cuando la intensidad de la eliminacin supera a la de absorcin, la curva

desciende (Seeman y Kalant, 1989). Parmetros tales como la

concentracin mxima (Cmax), el tiempo requerido para alcanzar esta

concentracin (tmax), el rea bajo la curva (ABC), y la vida media terminal

(t 1/2), son fcilmente obtenidos cuando el frmaco se administra por va oral

(p.o), mientras que parmetros tales como el volumen de distribucin (Vd) y

la depuracin (CL) slo pueden obtenerse cuando el frmaco se administra


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por va intravenosa (figura 1.2.) (Endrenyi, 1989). La magnitud de la

absorcin de un frmaco es referida al clculo matemtico del ABC, que

permite una estimacin de la biodisponibilidad. La velocidad de absorcin es

observada por la Cmax y el tiempo requerido para esta (tmax) puede ser

tambin empleado (Endrenyi y Yan, 1991), el tiempo de vida media de un

frmaco (t ) representa la estimacin de la duracin del efecto

farmacolgico y se define como el tiempo que se requiere para que la

concentracin del frmaco disminuya en un 50%. El Vd aparente indica la

distribucin de un frmaco en el organismo y la CL indica el volumen de

sangre que queda libre del frmaco por unidad de tiempo (Gibaldi,1991).

Figura 1.1. Curva de niveles plasmticos: evolucin que sigue la concentracin de

frmaco en el plasma despus de administrar una dosis extravascular. Cmax:

concentracin mxima. t max : tiempo en el que se alcanza la Cmaxy ABC:

rea bajo la curva (Adaptado de: Shargel y Yu, 1995).

ConcentracinPlasmtica

t max

ABC

C max

Tiem o


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Figura 1.2. Curva de niveles plasmticos: evolucin que sigue la concentracin de

frmaco en el plasma despus de administrar una dosis intravenosa. Cp:

concentracin a tiempo cero, ABC: rea bajo la curva, Vd: volumen de

distribucin y Cl: depuracin (Adaptado de: Shargel y Yu, 1995).

La interpretacin de los datos experimentales para describir el curso

temporal de las concentraciones de un frmaco, se realiza generalmente con

la ayuda de modelos basados en compartimentos. Estos modelos

usualmente se ajustan bien para la administracin intravenosa, en la que se

aprecian las fases de distribucin y eliminacin, dado que no hay absorcin.

Sin embargo, para las vas extravasculares, por lo general se prefiere el uso

de modelos no compartimntales, ya que el poder caracterizar

adecuadamente la fase de absorcin es difcil, sobre todo cuando se trata de

frmacos administrados por va oral y que se absorben muy rpido. Para estetipo de frmacos los parmetros farmacocinticos aceptados para indicar

biodisponibilidad son la Cmax y el ABC (Pabst y Jaeger, 1990).

ConcentracinPlasmtica

ABC

Cp

Vd = Dosis/C

CL = Dosis/ABC

Tiem o


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1.1.1. Factores que afectan las etapas de la Farmacocintica.

1.1.1.1. Absorcin.

La absorcin puede describirse como la velocidad a la que un frmaco

deja su sitio de administracin y el grado o la medida en que lo hace

(Seeman y Kalant, 1989). Cuando las velocidades de absorcin, distribucin

y eliminacin cambian en forma proporcional a las variaciones de las dosis, la

concentracin plasmticas del frmaco varia en proporcin a la cantidad de

frmaco absorbido y se dice que el frmaco tiene una cintica de primer

orden, en estas circunstancias la concentracin plasmtica del frmaco

aumentar en forma proporcional cuando se aumente la cantidad de frmaco

absorbido o podr presentarse una disminucin de la concentracinplasmtica cuando se presente una disminucin en la absorcin del frmaco,

stas variaciones en la cantidad de frmaco absorbido se reflejan en la

intensidad del efecto farmacolgico, el cual puede aumentar o disminuir en

funcin de la cantidad de frmaco absorbido (Benet, 1996).

En la absorcin de frmacos influyen muchas variables adems de los

factores fisicoqumicos que modifican el transporte transmembrana. Este

fenmeno, independientemente del sitio en que ocurra, depende de la

solubilidad del frmaco y las circunstancias que privan en el propio sitio de

absorcin modifican la solubilidad de la sustancia, en particular la va

gastrointestinal (Gibaldi, 1991). La absorcin por la va gastrointestinal esta

regida por factores como son el rea superficial para la absorcin; el flujo

sanguneo en el sitio de sta, la motilidad, el pH, la presencia o no de

alimentos, el estado fisicoqumico del frmaco y su concentracin en dicho

sitio. La absorcin de casi todos los frmacos en la va gastrointestinal se

hace mediante procesos pasivos, por lo cual facilita la absorcin cuando el

frmaco esta en su forma no ionizada y ms lipoflica, as mismo cualquier

factor que acelere el vaciamiento gstrico, muy probablemente acelerar la

absorcin del frmaco, tanto la velocidad de vaciamiento gstrico y el trnsito

intestinal estn influenciados por el flujo sanguneo (Tietze y Laksmi, 1994),


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por lo que la circulacin en el sitio de absorcin tambin es un factor que

influye en el proceso de absorcin, donde una disminucin en el flujo

sanguneo, como la que se presenta en un estado de choque medular

modificar la absorcin de frmacos (Rowland y Tozer, 1989, Gibaldi,1991).

Los elementos anteriores, sea por separado o en combinacin,

pueden ejercer un efecto profundo en la eficacia clnica y en la toxicidad de

un frmaco determinado.

1.1.1.2. Distribucin.

Comprende los procesos de transporte del frmaco dentro del

compartimiento sanguneo y su posterior penetracin en los tejidos, diluido

en los lquidos intersticiales y celulares (Rowland y Tozer, 1989). Ladistribucin de un frmaco es generalmente referida como rpida y

reversible, contemplando un equilibrio dinmico (entre frmaco en torrente

sanguneo y frmaco en tejidos), donde cambios en la concentracin de

frmaco en el plasma son indicativos de cambios del frmaco en otros

tejidos, incluyendo los sitios del efecto farmacolgico (Gibaldi, 1991).

La distribucin de los frmacos del torrente sanguneo a los tejidos del

organismo ocurre a varias velocidades y en varias magnitudes. Algunos

factores que determinan la distribucin del frmaco incluyen la liberacin del

frmaco al tejido, la habilidad del frmaco para atravesar las membranas del

tejido, y la unin del frmaco tanto a protenas plasmticas como a

componentes tisulares (Rowland y Tozer, 1989). De tal forma, que los

patrones de distribucin del frmaco reflejan algunos factores fisiolgicos y

propiedades fisicoqumicas de las formas farmacuticas. Existe una fase

inicial de distribucin, que refleja la intervencin del gasto cardaco y el flujo

sanguneo regional, la velocidad con la cual la sangre entra y deja cualquier

tejido est por tanto directamente relacionada con el gasto cardaco, el cual

es un factor determinante en la distribucin, cuando del flujo sanguneo

disminuye sea por una insuficiencia cardiaca, un estado de choque o alguna

otra circunstancia, el cerebro y el miocardio reciben ms irrigacin sangunea


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que los rganos abdominales y en consecuencia los procesos de distribucin

y eliminacin del frmaco se ven modificados (Benet y Sheiner,1996; Deutsh

et al., 1991). Una segunda fase de distribucin puede distinguirse, la cual

tambin esta limitada por el flujo sanguneo e incluye una fraccin mucho

mayor de masa corporal que la primera fase (Benet y Sheiner, 1996), donde

la extensin de la distribucin del frmaco ser el grado en el cual ste se

distribuye ms all del suero o plasma, esta propiedad es representada por

el parmetro de volumen de distribucin que se define como el volumen

terico de los fluidos o tejidos corporales en los que un frmaco se disuelve o

se fija respectivamente. La velocidad con la cual un frmaco se distribuye en

varios tejidos puede influir sobre el tiempo que toma ste en alcanzar la

concentracin plasmtica teraputica (Rieschel, 1992). Es muy frecuenteque los frmacos puedan unirse a protenas plasmticas por lo que cualquier

factor que altere significativamente esta unin modificar su distribucin y

excrecin sobre todo en aquellos frmacos que se unen en ms de un 80 %

a las protenas del plasma, ya que esta unin limita la concentracin de

frmacos en los tejidos y en el sitio de accin debido a que slo la forma libre

esta en equilibrio a travs de las membranas (Endrenyi, 1989). Por otro lado,

los frmacos pueden acumularse en los tejidos en concentraciones ms

elevadas que lo esperado, en funcin del equilibrio de difusin, como

resultado de gradientes de pH, fijacin a constituyentes intracelulares o por

su afinidad por los lpidos (Benet y Sheiner, 1996).

1.1.1.3. Biotransformacin.

En trminos generales, las reacciones de biotransformacin generan

metabolitos inactivos ms polares, que se excretan fcilmente al exterior. Sin

embargo, en algunos casos se producen metabolitos con potente actividadbiolgica o con propiedades txicas (Benet y Sheiner, 1996). Los sistemas

enzimticos responsables de la biotransformacin de muchos frmacos estn

principalmente localizados en la fraccin microsomal de las clulas hepticas

(Kalant, 1989 y Gibaldi, 1991). Muchos tejidos en el organismo son capaces

de biotransformar a los frmacos (rin, pulmones, epitelio gastrointestinal,


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piel) y tienen tambin un papel importante en la cintica de algunos

frmacos (Kalant, 1989).

Las enzimas biotransformadoras de los frmacos, oxidan, reducen,

hidrolizan o conjugan compuestos. La reduccin, oxidacin y reacciones de

hidrlisis (Reacciones de Fase I o de biotransformacin) resultan en

metabolitos con grupos funcionales con caractersticas de mayor polaridad

que pueden ser conjugados con acetatos, sulfatos, glicina o cidos

glucornidos (Reacciones de Fase II o de biosntesis), conjugados que

suelen ser inactivos y se excretan con rapidez en orina y heces (Benet y

Sheiner, 1996; Gibaldi, 1991).

La eficiencia del sistema heptico para biotransformar los frmacos

depende de tres factores principales, flujo sanguneo heptico, el cualparticipa en el transporte del frmaco al rgano, el grado de unin a

protenas, expresado como la fraccin libre del frmaco en la sangre capaz

de entrar a los hepatocitos; y la actividad del sistema enzimtico, implicado

en la biotransformacin heptica del frmaco (Levy y Bauer, 1986).

La funcin heptica deficiente en sujetos con hepatitis, hepatopata

alcohlica, hgado adiposo, entre otros, puede culminar en alteraciones en la

biotransformacin. El grado de la disminucin de la actividad de

monooxigenasa del citocromo P450 y de la eliminacin por el hgado es

proporcional a la gravedad del dao heptico. La disminucin del flujo

sanguneo en el hgado, caracterstica de la insuficiencia cardiaca o el

bloqueo -adrenrgico, tambin afecta y disminuye la rapidez de

biotransformacin heptica (Benet y Sheiner, 1996). El metabolismo de

frmacos con una razn alta de extraccin por parte del hgado (donde los

valores de depuracin heptica y del flujo sanguneo de este rgano son

prcticamente equivalentes) est limitado por el aporte sanguneo a dicha

glndula (Rowland y Tozer, 1989). En estos casos, la disminucin del flujo de

sangre por el hgado hace que se reduzcan la biotransformacin y

eliminacin del frmaco original, y en consecuencia, prolonga su efecto

(Greenblatt, 1992). Esta accin no se presenta en frmacos que se extraen


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en forma deficiente por el hgado, debido a la alta unin a protenas

plasmticas de stos, por lo que la depuracin sistmica depender de su

fraccin libre y de la depuracin intrnseca. Cuando los cambios en flujo

sanguneo heptico no tienen efecto sobre la depuracin heptica de los

frmacos, se consideran frmacos no dependientes del flujo.

La relacin entre los conceptos de coeficiente de extraccin, flujo

sanguneo heptico y depuracin heptica, considerando el modelo de

perfusin, se establece al considerar al hgado como el rgano depurador,

donde el frmaco penetra a una concentracin arterial de Ca y su

concentracin venosa al salir es menor que Cv (Figura 3).

El flujo sanguneo a travs del rgano es Q (mL/min), durante un

minuto en estado estable involucra:Cantidad de frmaco que penetra al rgano = Q * Ca

Cantidad de frmaco que sale del rgano = Q * Cv

Cantidad de frmaco extrado por el rgano = Q * ( Ca Cv)

La fraccin del medicamento que el rgano extrae de la sangre es

(Ca Cv)/Ca, y se le conoce como el coeficiente de extraccin (E), el cual

denota la eficacia del proceso de eliminacin de un frmaco queda

establecido como:

E = (Ca Cv)/Ca.

Cuando su valor se aproxima a 1, significa que el rgano depura con

rapidez y eficacia la mayor parte del frmaco; en cambio, si el coeficiente de

extraccin es pequeo, cercano a 0, indica que el proceso de eliminacin por

el rgano resulta lento e ineficaz. Al multiplicar el flujo sanguneo (Q) por la

fraccin (E) de frmaco extrado por el rgano, se obtendr el volumen de

sangre que ste usa para eliminar el medicamento por unidad de tiempo.

Esto ltimo constituye lo que se conoce como la depuracin del rgano.

Cl H= Q * E


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La depuracin heptica es casi igual al flujo sanguneo, si un frmaco es

extrado en forma eficaz (E = 1), y por tanto la depuracin heptica tambin

puede definirse como: Cl H = Q * ( Ca Cv) / Ca (Rowland y Tozer, 1989).

Figura 1.3. Modelo de depuracin de frmacos en rganos. Aplicado al hgado: Q =flujo sanguneo heptico total; Ca = concentracin de frmaco en sangre

mezclada de vena porta y arteria heptica; Cv = nivel de medicamento

venoso heptico (Adaptado de: Rowland y Tozer, 1989).

1.1.1.4. Eliminacin.

La eliminacin ocurre por excrecin y biotransformacin. Algunos

frmacos son excretados por va biliar. Otros, particularmente sustancias

voltiles, son excretados por los pulmones. Para muchos frmacos, sinembargo la excrecin ocurre predominantemente por los riones (Rowland y

Tozer, 1989).

Los rganos de excrecin, excluidos los pulmones, eliminan con

mayor eficiencia compuestos polares que sustancias de gran liposolubilidad.

Los riones son los rganos ms importantes para la eliminacin de los

frmacos y sus metabolitos. Las sustancias excretadas en heces son

principalmente frmacos que no se absorbieron por la va oral o metabolitosexcretados en la bilis, que no se reasorbieron en la va gastrointestinal.

La excrecin renal es la va ms importante de excrecin de frmacos,

siendo ste un fenmeno complejo que involucra uno o ms de los siguientes

procesos: filtracin glomerular, secrecin tubular activa y reabsorcin pasiva

Dependiendo de cual de stos procesos sea el dominante, la depuracin

Q CvCa

rganodepurador


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renal de un frmaco puede ser un componente importante o despreciable

para su eliminacin (Gibaldi, 1991). La filtracin glomerular est influida

directamente por el flujo sanguneo renal. El flujo renal en el humano adulto

es en promedio de 700-800 mL/min, de esta cantidad 120-130 mL/min se

filtran a travs del glomrulo (Gibaldi, 1991). Una reduccin del flujo renal se

refleja por tanto en una disminucin de la cantidad de filtrado glomerular

alterndose los procesos de secrecin y reabsorcin, circunstancias bajo las

cuales se hace necesario un ajuste de la dosis de frmacos, principalmente

de aquellos que presentan una ventana teraputica estrecha y que se

eliminan principalmente por rin (Bonate y Weir, 1998)

La excrecin de frmacos y sus metabolitos por la bilis sigue en

importancia a la excrecin urinaria. La fraccin eliminada por la bilis enrelacin con la eliminacin total es muy variable de un frmaco a otro, ya que

algunos se eliminan en gran parte por esta va mientras que otros no la

utilizan en absoluto. El proceso de excrecin biliar se relaciona

estrechamente con el proceso de biotransformacin, ya que la eficacia del

hgado como rgano de excrecin de conjugados de glucornido se ve

limitada enormemente por la hidrlisis enzimtica que stos experimentan

despus de que la bilis se mezcla con el contenido del yeyuno-leon, y que el

frmaco original se reabsorbe en el intestino. De esta manera, dichos

compuestos pueden someterse a un ciclaje biliar extenso, para ser

excretados finalmente por los riones (Benet y Sheiner, 1996).

1.2. Lesin Traumtica de Mdula Espinal.

1.2.1. Incidencia de la lesin traumtica de mdula espinal.

La sociedad debe prestar atencin a la poblacin en condiciones de

desventaja y, particularmente, a aquella que padece de discapacidad fsica o

metal. Poblacin con un problema de salud a largo plazo, que les impide

realizar con plenitud algunas actividades que llevaran a cabo en condiciones

normales. En Mxico, en el ao 2000, vivan 1.8 millones de personas con


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discapacidad, donde el 52.4 % son hombres y 47.4 % mujeres. La

discapacidad ms frecuente en esta poblacin en el pas es la discapacidad

motriz, cubriendo sta el 45.3 % del total (INEGI, 2000) y donde podemos

encontrar la poblacin con lesin traumtica de mdula espinal (LTME).

Pardini en 1988, seala que en la Ciudad de Mxico, la causa ms frecuente

de LTME., es por cadas (58%) seguida por accidentes automovilsticos

(17.9%) y por armas de fuego (14.3%).

La lesin en mdula espinal es un evento devastador que tiene

trascendencia funcional y efectos psicolgicos sobre la persona que la

padece e influye en diversas formas no solamente en el paciente, tambin en

los familiares y la sociedad. En muchos pases, la lesin traumtica de

mdula espinal ocurre en un promedio anual de 20 a 40 personas por milln(Kraus et al., 1975, Papadopoulos 1992, Singu et al., 1995).

Aproximadamente la mitad de pacientes con lesin medular son hombres

jvenes que pudieran estar en los primeros aos de su vida productiva. Los

costos iniciales de hospitalizacin son altos y subsecuentemente el cuidado

mdico es costoso tambin. Por ejemplo, el impacto del estimado econmico

de pacientes con lesin traumtica de mdula espinal en Estados Unidos,

excede de 4 billones de dlares por ao (Stripling, 1990, Bracken, 1991), por

lo que el desarrollo e investigacin de tratamientos especficos para

pacientes con este trauma podr brindar grandes beneficios, que aunado a la

asistencia mdica ptima y cuidadosa rehabilitacin tales pacientes pueden

recobrar la sensacin de control sobre sus vidas y maximizar su

independencia y calidad de vida. El dao sobre la mdula espinal afecta los

sistemas orgnicos por arriba y abajo del nivel del dao donde, los

procedimientos mdicos y rehabilitarorios varan de acuerdo a ste. La lesin

traumtica de mdula espinal produce alteraciones motoras y sensitivas,

incontinencia intestinal y vesical, as como complicaciones tales como

lceras y alteraciones urinarias, dependiendo del tipo y nivel de lesin. (Yu,

1998, Andreson, 1992 y Segal,1995).


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1.2.2. Aspectos fisiopatolgicos del trauma medular

Existe 4 tipos generales de lesin medular: 1) maceracin de la

mdula, en la cual la morfologa de la mdula es severamente deformada; 2)

la laceracin de la mdula (por arma de fuego o punzo cortante); 3) dao por

contusin, el cual induce una hematomielia que puede desarrollar

siringomielia y 4) dao slido de la mdula,en el cual no hay un foco central

de necrosis como en el dao por contusin (Bunge et al.,1993; Bunge et al.,

1997). De los cuatro tipos de lesin, el dao por contusin se presenta del

25 al 40% de los casos, siendo este tipo de lesin el comnmente usado

para la investigacin de lesin medular experimental en diseos con

animales (Basso, 1996).

Los efectos de una LTME dependen del tipo y nivel de lesin, de

forma general la LTME puede dividirse como completa e incompleta (parcial

o total). Una LTME completa significa que no hay funciones por debajo del

nivel de lesin, (no hay sensaciones ni movimiento), ambos lados del cuerpo

son igualmente afectados, en tanto una lesin incompleta refiere que alguna

funcionalidad por debajo del nivel de la lesin puede existir. Una persona con

una lesin incompleta puede ser capaz de mover un miembro de su cuerpo

ms que otro, puede ser capaz de sentir parte de su cuerpo y moverlo, opuede tener ms funcionalidad en una parte del cuerpo que en otra. El nivel

de lesin es determinado como el punto ms bajo, donde existe una

disminucin o ausencia de sensacin (nivel sensitivo) y movimiento (nivel

motor). Entre ms alta sea la lesin de la mdula espinal en la columna

vertebral, o ms cerca est del cerebro, mayor es la prdida de la funcin

(sensacin y movimiento). Dependiendo del nivel afectado se puede producir

una parapleja (afeccin de los miembros inferiores) localizndose la lesin

en el rea torcica, lumbar o sacra o una tetrapleja (prdida de las

funciones en miembros inferiores y superiores), cuando la lesin se localiza

en el rea cervical (Yu, 1998, Andreson, 1992 y Segal,1995).

Las fases que se presentan posterior a una LTME exhiben diferentes

alteraciones sistmicas y metablicas. Aparentemente, alteraciones iniciales


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pueden ser relacionadas a la prdida de la actividad refleja espinal por

debajo e inmediatamente arriba del nivel de lesin en el estado conocido

como choque medular (Atkinson y Atkinson, 1996), la disfuncin puede ser

asociada con cambios plsticos en la mdula espinal y otros tejidos (Guizar-

Sahagn et al., 1998). Al producirse una LTME, el dao no solo esta

confinado al sitio de lesin original, existe un perodo de latencia entre el

momento del traumatismo y el desarrollo de la mxima lesin

(aproximadamente de 3 das) lo que permite diferenciar los eventos de la

lesin llamados primarios y secundarios.

La lesin primaria puede definirse como la alteracin inmediata de la

mdula espinal que resulta del trauma o manipulacin mecnica inicial y

vara de acuerdo al tipo e intensidad del mismo, la lesin secundaria, que sepresenta despus de una LTME, se produce subsecuentemente como

consecuencia de los mltiples eventos auto-destructivos que se presentan,

que contribuyen a una mayor destruccin y pueden llevar de una lesin

originalmente incompleta a una lesin completa (Anderson, 1992; Tator y

Fehlings 1991 y Kliot y Lustgarten, 1990). Dichos eventos auto-destructivos

se deben a la induccin de mecanismos tales como la desregulacin inica

que se presenta en la lesin medular, donde la disminucin de tensin de

oxgeno y trifosfato de adenosina (ATP) da lugar a una rpida inactivacin

enzimtica de la membrana, produciendo una alteracin en la homeostasis

inica. Los iones sodio y calcio se incrementan a nivel intracelular mientras

que los iones potasio y magnesio disminuyen (Banik y Alhaney, 1985), esta

alteracin en el gradiente inico da lugar a la prdida de transmisin de los

impulsos nerviosos que finalmente da lugar a formacin de edema y necrosis

de tejidos (Anderson, 1992).

El exceso de calcio extracelular conduce a daos en la funcin

mitocondrial, activacin de proteasas, fosfolipasas y lipoperoxidacin, que

inciden sobre las membranas y los neurofilamentos causando trastornos que

frecuentemente llevan a la muerte neuronal (Banik y Alhaney, 1985 y

Anderson, 1992). La excitotoxicidad (intensa excitacin de las neuronas


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viables por receptores N-metil-D-aspartato) inducida por aminocidos tales

como el glutamato, el aspartato y el cido quinolnico es otra de las

alteraciones fisiolgicas secundarias derivadas de la LTME, el glutamato y el

aspartato en condiciones normales son aminocidos que se encuentran

almacenados en las neuronas para funcionar como neurotrasmisores, pero

como consecuencia de la destruccin inicial de neuronas despus de un

trauma, se liberan en grandes cantidades al espacio extracelular como

resultado de la lesin directa de la membrana celular que los contiene,

pudindose relacionar stas concentraciones con la intensidad de la lesin

segn refieren Faden y Simon (1988).

La inestabilidad hemodinmica presente despus de una LTME es

atribuida a las alteraciones en el flujo sanguneo, entre los mecanismosdescritos se encuentran la isquemia, (mecanismo ligado estrechamente con

la excitotoxicidad y la lipoperoxidacin), donde la accin directa del

traumatismo sobre los vasos sanguneos causa la hipotensin arterial

sistmica ocasionada por una disminucin de la actividad simptica y

predominio de la actividad parasimptica y la vasoconstriccin como

consecuencia de la activacin de la cascada del cido araquidnico,

produccin de radicales libres a nivel vascular e incremento de la

concentracin de calcio en las fibras musculares de vasos (Kilot y Lustgarten,

1990). En lesiones con intensidad suficiente para producir parapleja

permanente hay isquemia en la sustancia gris y blanca, que se extienden a

distancia proximal y distal del sitio de lesin, mientras que en lesiones de

menor intensidad, seguidas de recuperacin espontnea, solo se detecta la

isquemia en la sustancia gris.

No obstante otros mecanismos donde sustancias tales como

endotelinas, oxido ntrico u otras sustancias vasoactivas pueden estar

involucrados en los cambios hemodinmicos presentes en una LTME

(Guizar-Sahagn, et al., 2004).


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1.2.3. Alteraciones metablicas y sistmicas secundarias a la Lesin

Traumtica de la Mdula Espinal.

Aparte de la prdida de movimientos voluntarios y sensibilidad, la

LTME produce importantes alteraciones sistmicas y metablicas que

pueden estar involucradas no solamente en la amenaza de prdida de la

vida, tambin en el retraso de la rehabilitacin y en una inadecuada terapia

farmacolgica. Algunas alteraciones metablicas, estn relacionada a la

composicin corporal y al balance de lquidos y electrlitos, dichas

alteraciones han sido asociadas con la parlisis motora y la subsiguiente

atrofia muscular; sin embargo, la mayora de las alteraciones sistmicas y

metablicas son asociadas con disturbios en funciones reguladas por el

sistema nervioso autnomo (Guizar-Sahagn et al.,1998).Las alteraciones difieren entre la etapa aguda y crnica de la lesin,

aparentemente las alteraciones tempranas puede ser relacionadas con una

prdida en la actividad refleja de la mdula abajo e inmediatamente por

arriba del nivel del dao, esta etapa es conocida como choque espinal. En

estados tardos, la disfuncin puede estar asociada con cambios plsticos en

la mdula espinal y otros tejidos. El cambio metablico asociado con la

parlisis motora y la subsiguiente atrofia muscular esta relacionado con las

alteraciones en la composicin corporal y el balance electroltico (Cuadro

1.1). Rpidamente despus de un dao, exististe una prdida de peso

progresiva, con obligatorio balance negativo de nitrgeno, el cual no es

favorecido an cuando se administre una alimentacin rica en contenido

proteico y calrico (Guizar-Sahagn et al.,1998 y Cardus et al., 1984).

Las principales consecuencias sistmicas y metablicas resumidas en

el cuadro 1.2, asociadas a la interrupcin de los centros autnomos

espinales a partir del control central y que ocurren en muchos casos como

una consecuencia de lesiones severas arriba del flujo simptico a T6 y

raramente en aquellas lesiones por debajo de T10, incluyen: disfuncin

cardiovascular, gastrointestinal, renal, endocrina y del sistema inmune

(Guizar-Sahagn et al.,1998; DeVivo et al., 1993).


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Sistema alterado

Etapa temprana de lesin(durante el choque

espinal)

Etapa tarda de lesin(Estado crnico)

Composicin corporal

Progresiva prdida de peso

corporal, con obligatorio

balance negativo de

nitrgeno

Encorvamiento corporal e

incremento de la grasa

corporal

Balance de lquidos y

electrlitos

Incremento relativo del

lquido extracelular a

volumen de lquido

intracelular

Hiponatremia

Cuadro1.1. Principales cambios metablicos asociados con parlisis motora y atrofia

muscular despus de una lesin traumtica de mdula espinal (Adaptado de:

Guizar-Sahagn et al., 1998).

Dentro de las alteraciones cardiovasculares inmediatas sobresale la

bradicardia y la hipotensin, las cuales son atribuidas a un desbalance

autnomo agudo debido a la predominancia de la actividad parasimptica y a

la prdida del tono simptico. En estados tempranos de la lesin, persiste

generalmente la bradicardia, asociada con una inestabilidad de presin

sangunea caracterizada por la hipotensin postural e hipertensin episdica,la cual es conocido como disreflexia autnoma o hiperreflexia autnoma, un

sndrome que es iniciado por la estimulacin nociva por debajo del nivel del

dao. Esto resulta en una descarga simptica masiva de la mdula aislada,

manifestada por una hipertensin severa que pone en riesgo la vida del

paciente (Guizar-Sahagn et al.,1998, Karisson et al.,1998).

Pacientes con LTME en niveles altos, son generalmente hipotensos, la

baja presin sangunea que desarrollan durante la disreflexia autnoma,

representa cambios de presin de una magnitud que pueden producir

accidentes cardiovasculares y la muerte (Segal, 1995 y Guizar-Sahagn et

al.,1998).


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Sistema alterado

Alteraciones tempranas

durante la fase de choque

espinal

Alteraciones tardas

durante estado crnico

Cardiovascular BradicardiaHipotensin

BradicardiaHipotensin posturalDisreflexia autnoma

Gastrointestinal Baja motilidad gastrointestinal

Prolongado trnsito GIDificultad de evacuacin

Esofagitis y gastritis

Renal

Disminucin de Flujoplasmtico renal

Decremento de la depuracinrenal

Falla renal con patologasconcomitantes

Metablico yEndcrino

Niveles plasmticos bajos deHormona paratiroidea

Hormona TiroideaAlbmina y Vit. D

Niveles plasmticos altos de:Fsforo

ProlactinaHormona Antidiurtica Enzimas

hepticas

Niveles plasmticos bajos deHormona tiroidea

Noradrenalina

Desordenes en elmetabolismo de carbohidratos

y lpidos

InmuneInmunodepresin

Disminucin de clulas TAlteraciones en la funcin

fagocitaria

Niveles plasmticos altos deICAM, IL-6, IL2R

Cuadro 1.2 . Principales consecuencias de la desconexin de los centrosautnomos espinales despus de una LTME. (Adapatado de: Guzar-Sahagn et al., 1998).

La disfuncin del tracto gastrointestinal es uno de los mayores daos

que resultan de la LMTE. Durante el choque espinal, las principal alteracin

se relaciona a la baja motilidad, en estados crnicos cerca del 30% de

pacientes tienen problemas gastrointestinales significativos tales como unprolongado trnsito intestinal y lento vaciamiento gstrico que reducen su

calidad de vida, al estar presentes sntomas tales como molestias

abdominales, distensin abdominal, constipacin y dificultad para evacuar.

Presentndose tambin con gran incidencia sntomas derivados de la


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esofagitis y gastritis (aceda, dolor esofgico y disfagia intermitente). (Segal,

1995, Nino-Murcia y Friedland,1992 y Guizar-Sahagn et al.,1998).

En estados agudos de LTME se presentan pequeos cambios en la

funcin renal, la prevaleca de una inadecuada funcin renal catalogada de

moderada a severa se presenta en slo el 10 % de los pacientes y

frecuentemente esta asociada con patologas concomitantes entre las cuales

se incluyen el reflujo vesicouretral, clculos renales y pielonefritis recurrente

(Guizar-Sahagn et al.,1998).

1.2.4. Cambios Farmacocinticos atribuidos a una Lesin Traumtica de

Mdula Espinal.

1.2.4.1. En estudios Clnicos.

El uso seguro y efectivo de los medicamentos en personas con LTME

es predispuesto frecuentemente por criterios o estrategias teraputicas

derivadas de datos dispersos y fragmentarios o experiencias clnicas

limitadas, de forma tal que, pacientes con LTME y con un proceso de

enfermedad que puede ser modificado farmacolgicamente, presenta un

desafo teraputico formidable, que no ha sido delineado adecuadamente ni

visto sistemticamente (Segal y Brunnemann, 1989; Gilman et al., 1993;

Braddom y Rocco, 1991; Segal y Pathak, 2001).

Los cambios innumerables en la fisiologa humana causada por la

LTME involucran casi todos los sistemas de rganos y la interrupcin del

sistema nervioso autnomo que se expresan como alteraciones

hemodinmicas y arritmias cardacas pueden influir en la disposicin de

frmacos, particularmente en lesiones torcicas altas y cervicales. Segal

(1993) y Hall (1992), han descrito variaciones en la composicin corporal,

cambios en compartimentos de fluidos corporales y alteraciones en

concentraciones de electrolitos, tanto en durante la fase crnica y aguda del

dao, el compromiso ventilatorio y el fracaso respiratorio son complicaciones

frecuentes de una LTME (Segal, 1993), ambos cambios obstructivos y


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restrictivos en la funcin pulmonar ocurren simultneamente con el trauma

agudo de la mdula espinal y reflejan alteraciones sbitas en la anatoma del

trax y desmodulacin del sistema nervioso autnomo.

Estas y otras alteraciones causadas por la LTME se han asociado con

cambios clnicamente significativos en la farmacocintica y la

farmacodinamia de frmacos, que pueden exponer a los pacientes a fallas

teraputicas e incluso a efectos txicos, sin embargo, los mecanismos que

expliquen las alteraciones en la absorcin, distribucin, metabolismo y

excrecin de los medicamentos en pacientes con una LTME en forma clara

no se conocen (Segal, 1995 y 1993).

Halstead y colaboradores (1985), reconocieron la necesidad de

estudiar la fisiopatologa del la LTME sobre las variables que influyen en laeficiencia de la absorcin gastrointestinal, encontrando que la absorcin

gastrointestinal del acetaminofn fue impedida significativamente en

pacientes con LTME implicndose la fisiopatologa de la lesin en la mdula

espinal como la presunta etiologa al cambio en los parmetros de absorcin

intestinal del acetaminofn, otros estudios reportados con teofilina (Segal et

al., 1985a y1986a), baclofn y dantroleno (Segal et al., 1987) infieren

situaciones similares. Estas observaciones son sumamente sugestivas de

una asociacin causal entre el deterioro en vaciamiento gstrico

caracterstico de una LTME y los cambios de importancia clnica potencial de

la eficacia de los frmacos administrados oralmente cuando la eficiencia de

absorcin depende de la motilidad gstrica y vaciamiento gstrico.

No obstante, que la administracin intramuscular en pacientes con

LTME ha sido considerada tan segura como una administracin intravenosa

donde se tiene una biodisponibilidad completa, esta aseveracin no ha sido

adecuadamente respaldada en pacientes con LTME (Segal et al., 1986b). La

administracin intramuscular de frmacos, considerada generalmente como

una va segura, efectiva y simple de administracin, puede no serlo, debido a

que la absorcin del frmaco administrado por esta va puede ser errtica o

incompleta en sujetos asociados con alteraciones fisiolgicas y variacin de


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flujo sanguneo muscular en el sitio de administracin (Deutsch et al., 1991),

alteraciones que son comunes en pacientes con LTME. En 1985 Segal y

colaboradores, reportan el caso de la gentamicina, la cual despus de su

administracin intramuscular en pacientes con LTME, su biodisponibilidad

fue caracterizada por concentraciones plasmticas ms bajas y un ndice de

absorcin ms lento que despus de la administracin intramuscular de la

misma en pacientes con un msculo inervado normalmente, debido a una

disminucin de flujo sanguneo que se presenta y que es caracterstico de un

msculo paralizado, dado que la velocidad a la cual un frmaco alcanza la

circulacin sistmica en este tipo de administracin es dependiente del flujo

sanguneo muscular (Segal 1995, Segal et al., 1986a). En pacientes con

LTME en estado crnico, la disposicin de la amikacina present un aumentodel volumen de distribucin el cual parece seguir un patrn similar al

observado con la gentamicina, donde la etiologa atribuible a este evento

puede ser el incremento del volumen de flujo extravascular secundario a la

erosin de la masa muscular con disfuncin del tono muscular y subsecuente

edema, condiciones que son comunes en pacientes con LTME) (Segal et al.,

1988b).

Alteraciones farmacocinticas de frmacos administrados por va

intravenosa tambin han sido reportados como es el caso del lorazepan

(frmaco con actividad ansioltica, anticonvulsinante e hipntico-sedativo

utilizado frecuentemente en pacientes con LTME), donde pacientes con

LTME presentaron una eliminacin disminuida, la cual fue atribuida a una

alteracin en el metabolismo heptico o a una alteracin enteroheptica

exagerada y errtica (Segal et al.,1991).

1.2.4.2. En estudios con modelos experimentales.

Los cambios farmacocinticos atribuidas a una LTME en clnica

tambin se han reportado en estudios empleando modelos experimentales,

Ibarra y colaboradores (1996), concluyen que la biodisponibilidad de la

Ciclosporina-A esta incrementada cuando se administra por va parenteral,


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pero es reducida cuando se da por va oral, probablemente debido a la

disminucin del flujo sanguneo heptico con la subsiguiente depuracin del

frmaco y una disminucin del vaciamiento gstrico, reportndose tambin

la reduccin en la biodisponibilidad oral del acetaminofn (Garca-Lpez et

al., 1995,1997) y aspirina (Fuentes-Lara et al., 1999). La reduccin en la

biodisponibilidad oral de frmacos aparentemente es ms evidente durante la

fase aguda de la LTME (Garca-Lpez et al., 1997, Ibarra et al., 1996) y

depende del nivel de lesin. (Garca-Lpez et al., 1999). Documentndose

adems que la vida de eliminacin de frmacos tales como la ciclosporina

(Ibarra et al.,1996), acetaminofn (Garca-Lpez et al.,1999) y diclofenaco

(Garca-Lpez y Salas, 1999) puede ser prolongada en la etapa aguda de la

LTME.

1.3. Importancia y descripcin de modelos experimentales de lesin

medular.

El extenso panorama de la fisiologa alterada por una LTME, hace

que las relaciones entre el efecto y la concentracin de un frmaco despus

de su administracin no sean explicadas fcilmente como en los modelos

que se observan en humanos con una mdula espinal intacta, aunado a que

la disposicin de resultados en clnica que se han realizado, son referidos

nicamente en pacientes con una LTME en la fase crnica (Halstead et al.,

1985; Segal y Brunnemann, 1989) y con una alta variabilidad interindividual,

presentndose diferencias en cuanto al nivel neurolgico de lesin, tipo y

duracin de la lesin. Los aspectos anteriores resaltan la importancia de

contar con modelos experimentales estandarizados y reproducibles de lesin

de mdula espinal en los cuales el estimulo traumtico pueda ser

cuantificable y correlacionado con el nivel de lesin, la intensidad y la

duracin de la LTME, de forma tal que se puedan realizar de forma

especfica y sistemtica estudios que ayuden a explicar los mecanismos

asociados a las alteraciones farmacocinticas que se presentan en una


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LTME y se contribuya a mejorar la farmacoterapia de esta subpoblacin de

pacientes.

En la mayora de las lesiones de mdula espinal en humanos, los

mecanismos primarios de la lesin son por compresin aguda o laceracin

de la mdula espinal debido al desplazamiento del hueso o disco dentro de la

mdula espinal durante la dislocacin-fractura de la espina (Tator y Fehlings,

1991). Algunos modelos experimentales han sido desarrollados para simular

el trauma por compresin aguda en la mdula (Tator, 1993), el primero de

stos fue la tcnica de contusin por cada de un objeto propuesta por Allen

en 1911, subsecuentemente otros modelos experimentales han sido tambin

propuestos para inducir la parapleja bajo condiciones controladas en

animales de laboratorio con el objetivo de reproducir condiciones de lesionestraumticas de mdula espinal humanas y lograr algunas mejoras

teraputicas. Existen tres modelos experimentales para inducir una LTME,

modelo por contusin, modelo de seccin por corte y modelo de lesin

laceracin (Das, 1989).

Modelo por contusin: esta tcnica cuyo objetivo es inducir la

contusin sobre una lesin traumtica del tipo compresin en forma

cuantitativa, es ampliamente usada y ha sido modificada en algunos casos

(Das, 1989; Tator y Fehlings, 1991), en este modelo el animal despus de

ser anestesiado, se expone quirrgicamente la mdula espinal al nivel

deseado, y se deja caer directamente sobre la mdula espinal a una altura

determinada un cilindro de peso conocido, con esta tcnica la fuerza del

impacto sobre la mdula espinal puede ser determinada y por tanto, la

intensidad y grado de la lesin puede ser cuantificado. La tcnica tiene la

ventaja de poder valorar el umbral del impacto para producir parapleja, y

puede ser establecido cuantitativamente, adems de mantener las meninges

integras, lo que ayuda a prevenir la penetracin de prdida de tejido

conectivo y lquido intersticial. La variabilidad de la naturaleza y la simetra

del impacto (dado que pueden presentarse lateralizacin izquierda o


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derecha) son dos de las limitaciones que se mencionan para esta tcnica

(Das, 1989).

Modelo de seccin por corte: las lesiones realizadas con un modelo de

seccin por corte pueden variar considerablemente en un plano transversal

resultando en hemisecciones, tales como secciones parciales unilaterales,

bilaterales o secciones completas bilaterales de la mdula espinal. Bajo

estas condiciones experimentales solamente la lesin bilateral completa

resulta en una parapleja. En esta tcnica la mdula espinal del animal es

expuesta quirrgicamente y bajo un microscopio quirrgico o de diseccin la

mdula es seccionada por una navaja quirrgica. Esta tcnica de lesin

ofrece la ventaja de visualizar la lesin directamente durante la ciruga, por lo

tanto puede definirse con relativa precisin anatmica, adems que ofrece lafacilidad de hacer transecciones de la mdula espinal variando el tipo y grado

de stas, tal como, la hemiseccin o seccin de un cuarto de la mdula

espinal con alto grado de precisin, pero las condiciones de la lesin que

promueven la penetracin de tejido conectivo y la infiltracin de sangre con

fluido intersticial dentro del sitio de la lesin a lo largo as como tambin la

condicin hemorrgica que pudiera presentarse al momento de la lesin se

presentan como desventajas para esta tcnica (Das 1989).

En el modelo de lesinlaceracin, se induce la lesin traumtica de la

mdula espinal por combinacin de los dos modelos presentados

anteriormente. El dao provocado a una gran porcin de la mdula espinal

se extiende por dos segmentos y entonces se hace comparable al modelo de

contusin, en este modelo, la lesin se provoca por el empleo de una tijera

de iris o navaja para separar axones y tejido neural lo que simula modelo de

seccin por corte, el objetivo del empleo de este modelo es crear una lesin

de tipo laceracin con una prdida de tejido neural en la regin, esta

extirpacin del tejido neural entre los dos cortes representa la prdida de

tejido necrotizado, esta lesin provee una clara identificacin de lesiones

primarias directas e indirectas, presentes en condiciones patolgicas

secundarias y cambios degenerativos progresivos (Das 1989).


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1.4. Fenacetina.

La fenacetina es un compuesto con propiedades analgsicas y

antipirticas semejante a los salicilatos y cuyo metabolito activo es el

acetaminofn, tiene un mecanismo de accin especialmente perifrico para

la accin analgsica, central para la antipirtica, y tisular para laantiinflamatoria, donde como otros derivados del p-aminofenol, inhibe la

sntesis de prostaglandinas, sus efectos farmacolgicos estn dados por una

combinacin con el acetaminofn (su mayor metabolito). La fenacetina es

altamente liposoluble con una limitada solubilidad acuosa y su absorcin oral

depende de factores tales como el tamao de partcula (Prescott, 1989). Los

derivados del p-aminofenol siendo bases muy dbiles, se absorben poco en

el estmago y muy rpidamente en el intestino, donde una vez despus de

ser absorbida alcanza una concentracin plasmtica mxima a la hora o dos

horas despus de la ingestin (Insel, 1996). La fenacetina se considera un

frmaco de alta extraccin, debido a que su extraccin heptica es cerca del

80%, es decir se asume que el metabolismo de este frmaco depende del

flujo heptico (Gibaldi, 1991).

La fenacetina se transforma, especialmente en el hgado a travs de

las enzimas microsomales hepticas, a acetaminofn en gran proporcin de

un 60 a un 80% (Figura 1.3) y una pequea porcin a: p-fenetidina, 2-

hidroxifenetidina, 2y3-hidroxifenacetina y N-hidroxifenacetina; metabolitos,

que junto con el acetaminofn se excretan conjugados en la orina. Menos del

0.5 % de la dosis que se administra se recupera sin cambio en la orina

(Prescott, 1989).

NH-COO-CH3

O-C2H5


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Figura 1.4. Biotransformacin de fenacetina a su mayor metabolito activo:

acetaminofn.

1.5 Validacin.

La validacin de mtodos analticos para estudios de biodisponibilidad,

bioequivalencia y farmacocintica incluye todos los procedimientos

requeridos para demostrar que un mtodo analtico para la determinacin

cuantitativa de la concentracin de la sustancia de inters o serie de

sustancias de inters en una matriz biolgica particular es confiable para laaplicacin deseada a travs de la evaluacin de parmetros analticos.

Algunas de las tcnicas bioanalticas ms comnmente empleadas son:

a) Mtodos qumicos (cromatografa de gases o lquidos de alta resolucin y

varios procedimientos con espectrofotometra de masas directa o en

R1= S1O3HR2 = C5H9O6


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combinacin con otras tcnicas).

b) Mtodos biolgicos, basados stos en procedimientos de inmunoensayos

(ejemplo: Tcnica enzimtica de inmunoensayo multiplicativa, mtodos

microbiolgicos) (Shah et al.,1992).

Muchos de los principios, procedimientos y requerimientos son comunes

para todos los tipos de mtodos analticos (Shah et al.,1992; ICH 1997, NOM

177-SSA1-1998). Los parmetros esenciales para asegurar la aceptabilidad

del mtodo analtico son establecer: la estabilidad de la sustancia de inters

en la matriz bajo las condiciones en que se llevar a cabo el estudio, la

precisin, exactitud, especificidad y el intervalo lineal de la de funcin-

respuesta en que se esta trabajando. (Shah et al., 1992).

1.5.1. Selectividad.

Es la demostracin de que el mtodo tiene la habilidad de diferenciar

al compuesto de inters de metabolitos o compuestos endgenos de la

matriz biolgica y productos de degradacin conocidos.

Se evala al probar por lo menos seis fuentes independientes de la

misma matriz biolgica verificando que no se presente interferencia alguna al

analizarse con los metabolitos con la tcnica propuesta o bien analizando

muestras de sujetos que recibieron el frmaco de inters para comprobar

que no interferirn sus metabolitos o productos endgenos en el anlisis.

1.5.2. Intervalo lineal y Funcin respuesta.

El intervalo lineal de un mtodo analtico est definido por las

concentraciones del producto o productos de inters comprendidas entre los

niveles de concentracin superior e inferior en el que ser determinado el

producto de inters. Se determina por la evaluacin de muestras patrn en

el fluido a analizar, las cuales definen la curva de calibracin, la que ser

construida tpicamente por 6 a 8 puntos de calibracin (excluyendo blancos

e incluyendo la concentracin mnima cuantificable) y definir la funcin lineal


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que indicar la relacin concentracin-respuesta, la cual puede ser obtenida

directamente o por medio de una transformacin matemtica bien definida y

su ajuste deber ser estadsticamente probado.

Criterio de aceptacin

a. Coeficiente de determinacin (r2). Mayor a 0.98 para una recta generada

empleando el mtodo de mnimos cuadrados.

1.5.3. Exactitud y Precisin.

La exactitud es la concordancia entre un valor obtenido

experimentalmente y el valor de referencia, expresada en por ciento y est

referida como la desviacin que se tiene del valor terico.La precisin se define como la cercana de los resultados

experimentales de la valoracin del producto de inters determinados

repetidamente. La precisin es establecida como la precisin dentro de un

da (precisin intra-anlisis) y precisin entre das (precisin Inter- anlisis)

las cuales son expresadas comnmente como coeficientes de variacin (CV).

La determinacin de la exactitud y precisin puede llevarse a cabo por

el anlisis de un conjunto de replicas de muestras de la sustancia de inters

de concentracin conocidas en la matriz biolgica, considerando tres

concentraciones como mnimo, contempladas dentro del rango de la curva

patrn: una cerca del lmite de cuantificacin (LC), una cerca del centro y otra

cercana al lmite superior de cuantificacin. Se recomienda realizar los

anlisis mnimo por duplicado durante tres das para establecer la precisin

inter-anlisis y mnimo por quintuplicado en un da para establecer la

precisin intra-anlisis empleando las concentraciones antes mencionadas.

Criterio de aceptacin.

Para cada concentracin analizada el valor promedio deber estar

dentro del intervalo de 15 % del valor real, excepto para el valor de la

concentracin mnima cuantificable en el cual puede ser del 20% y un


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coeficiente de variacin (CV) menor al 15% y un CV menor al 20% en la

concentracin mnima cuantificable.

1.5.4. Lmite de cuantificacin.

Es la concentracin mas baja del intervalo lineal que puede ser

determinada con exactitud y precisin. Se determina analizando la

concentracin mnima a cuantificar, la cual debe de cumplir con el criterio de

tener un CV menor al 20%.

1.5.5. Lmite de deteccin.

Es la concentracin ms baja que puede ser detectada pero no

necesariamente cuantificada por el mtodo de anlisis. Normalmente seevala haciendo diluciones de la muestra y analizndola para determinar la

concentracin que produce una relacin seal-ruido de 2:1 o 3:1.

1.5.6. Estabilidad de la muestra.

Se debe asegurar la integridad de la sustancia de inters desde la

toma de la muestra hasta su anlisis final, por lo tanto, la estabilidad de la

muestra es la propiedad de una muestra preparada para su cuantificacin, de

conservar su integridad fisicoqumica y la concentracin de la sustancia de

inters, despus de almacenarse durante un tiempo determinado. Por lo

tanto la estabilidad de la sustancia de inters en la matriz biolgicas se debe

establecer comparando los resultados del anlisis inicial de tres muestras

como mnimo a la(s) temperatura(s) a la cual ser almacenada con los

obtenidos de las mismas muestras despus de permanecer por un tiempo

determinado bajo esas condiciones. Y posteriormente determinar la

influencia de los ciclos de congelamiento y deshielo (un mnimo de dos ciclos

a dos concentraciones por duplicado).

Criterio de aceptacin

La muestra es estable si la comparacin entre los grupos


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condicin/tiempo en las concentraciones determinadas en comparacin con

la concentracin inicial, no presentan diferencia significativa.


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2. JUSTIFICACIN

La lesin traumtica de mdula espinal causa severas alteraciones

sistmicas y metablicas que pueden poner en peligro la vida del paciente,

retrasan su rehabilitacin y pueden exponer a los pacientes a fallasteraputicas que influirn con la terapia farmacolgica, debido a que se

alteran funciones del sistema cardiovascular, gastrointestinal, renal,

endocrino e inmune (Guizar-Sahagn et al.,1998; Segal et al.,1995; Segal y

Brunnemann 1986).

Diversas investigaciones acerca de los cambios en la disposicin cintica

de frmacos han sido reportados en pacientes con lesin traumtica espinal

en estado crnico, donde la etiologa de estos cambios es atribuida a

alteraciones en el proceso de absorcin en el tracto gastrointestinal y/o en

flujo sanguneo provocados por los cambios innumerables en la fisiologa

humana originada por la LTME que involucran casi todos los sistemas de

rganos y la interrupcin del sistema nervioso autnomo (Gilman et al.,1996;

Segal et al.,1994; Rajendran et al.,1992; Nino-Murcia y Friedland,1991; Segal

y Brunnemann, 1989; Segal et al.,1988a; Segal et al., 1988b; Segal et al.,

1986a; Segal etal.,1986b; Fealey et al., 1984). No existiendo referencias de

estudios clnicos de cambios farmacocinticos de frmacos en el estado

agudo de una LTME por la complejidad clnica para llevar a cabo dichos

estudios.

Sin embargo se reporta que, posterior a una LTME tanto en clnica como

en modelo experimental, la presencia de una fase conocida como choque

medular se desarrolla, caracterizada por la prdida de la respuesta sensorial

y motora ante cualquier estimulo (Atkinson y Atkinson, 1996; Bach y Illis;

1993), presentndose una baja en la actividad simptica y una hipotensinarterial sistmica (Atkinson y Atkinson;1996; Schimidt y Chan 1992),

condiciones que pueden provocar tambin cambios farmacocinticos.

Garca-Lpez et al., (1995), Ibarra et al., (1996) y Fuentes-Lara et

al.,(1999) refieren que una LTME en la etapa de choque medular (obtenida

por modelo experimental) modifica el grado de absorcin y eliminacin del


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acetaminofn, ciclosporina-A y salicilatos administrados por va oral. En tanto

que posterior a una administracin intramuscular de diclofenaco en la etapa

aguda de la LTME, no reportan cambio farmacocintico significativo (Garca-

Lpez y Salas,1999).

Los reportes anteriores evidencian que no solamente la va de

administracin del frmaco y el estadio de la lesin (fase aguda o crnica),

influyen sobre los cambios farmacocinticos que se presentan, tambin el

nivel de lesin puede influir en las alteraciones cinticas de los frmacos.

Garca-Lpez y colaboradores (1999), reportaron efectos contrastantes en

la farmacocintica de una administracin oral de acetaminofn en diferentes

niveles de LTME (T8 y T1), sugiriendo que si bien existe un impedimento del

vaciamiento gstrico producido por una LTME que altera el proceso deabsorcin tal como lo refieren tambin otros autores (Halstead et al.,1985;

Segal, Gondim et al., 1999 y 2000), la eliminacin del frmaco tambin

podra estar afectada cuando la lesin se presenta a nivel alto, dado que la

depuracin del frmaco fue significativamente disminuida, este reporte

asociado al estudio donde se refiere que la depuracin de la fenacetina, se

encuentra significativamente reducida en una lesin baja durante la etapa del

choque medular experimental despus de una administracin intravenosa

(Garca-Lpez,1999b), conllevan a sugerir que pueden existir posibles

cambios en la microcirculacin heptica durante la fase de choque medular,

que estaran involucrados en modificaciones farmacocinticas importantes en

una lesin traumtica de mdula espinal, dependiendo del nivel de lesin y

va de administracin del frmaco en la etapa aguda de la lesin. Partiendo

de este supuesto, se hace relevante proponer un estudio que establezca la

posible significativa alteracin de la microcirculacin heptica en una LTME

en la etapa de choque medular en las alteraciones farmacocinticas de los

frmacos dependiendo del nivel de lesin, va de administracin y su

impacto en su biodisponibilidad, para lo cual en este proyecto se propone

estudiar la farmacocintica de la fenacetina, un analgsico no empleado en

la actualidad en la clnica, pero que sin embargo por sus caractersticas de


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depuracin limitante por el flujo sanguneo heptico, alcanzar

concentraciones sanguneas rpidamente y ser biotransformado

extensamente en el hgado a acetaminofn, lo hace factible para su uso

como un marcador de flujo sanguneo heptico, de forma tal que puedan

asociarse las alteraciones farmacocinticas de este frmaco a cambios en la

microcirculacin heptica atribuible a la presencia de una LTME despus de

una administracin oral e intravenosa en dos diferentes niveles de lesin

durante la fase de choque medular y determinando as su impacto sobre la

biodisponibilidad de frmacos de alta extraccin heptica.


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3. HIPTESIS

Las alteraciones en tracto gastrointestinal y flujo sanguneo heptico

presentes en una lesin traumtica de mdula espinal en la etapa conocida

como choque medular, provocarn cambios farmacocinticos en los

procesos de absorcin y depuracin que se reflejarn en la biodisponibilidad

de la fenacetina impactando de forma diferente dependiendo del nivel de la

lesin y va de administracin del frmaco.


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4. OBJETIVOS

4.1. Objetivo General

Determinar las alteraciones farmacocinticas y de biodisponibilidad de la

fenacetina, que se presentan en una lesin traumtica de mdula espinal en

la etapa de choque medular experimental.

4.1.1. Objetivos particulares.

2.1.1.1. Implementar y validar un mtodo analtico por cromatografa

lquida de alta resolucin para la cuantificacin simultnea de

fenacetina y acetaminofn en sangre de rata.

2.1.1.2. Determinar el efecto del nivel de la lesin medular (T1 y T8)

experimental sobre la farmacocintica de la fenacetina en una

administracin intravenosa y oral.

2.1.1.3. Evaluar el efecto de los cambios farmacocinticos de la

fenacetina sobre la biodisponibilidad de sta en una lesin

traumtica de mdula espinal en la fase de choque medular

experimental.

2.1.1.4. Determinar la influencia de una lesin traumtica de mdula

espinal en la fase de choque medular experimental en la

cintica del principal metabolito (acetaminofn) de la fenacetina.


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5. MATERIALES Y MTODOS

La metodologa a emplear en este estudio se presenta en forma

resumida en el siguiente diagrama de flujo, donde primeramente se llev a

cabo la validacin del mtodo analtico para la determinacin de fenacetina y

acetaminofn de forma simultnea por un mtodo analtico de cromatografa

lquida de alta resolucin y posteriormente se realiz la determinacin del

efecto de la lesin traumtica de mdula espinal en la fase de choque

medular (niveles T1 y T8) empleando un modelo experimental, sobre la

farmacocintica de la fenacetina administrada por va oral e intravenosa y la

de su principal metabolito (acetaminofn).

Validacin del mtodo

Selectividad

Estabilidad de la muestra

Intervalo lineal y Funcin-Respuesta

Exactitud y Precisin

Lmite de cuantificacin

Lmite de deteccin


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Influencia de LTME sobre la farmacocintica de la fenacetina

Administracin Oral Administracin Intravenosa

Tratamiento

Control

Tratamiento

A

Tratamiento

B

Tratamiento

Control

Tratamiento

A

Tratamiento

B

Laminectomia

Control

Lesin

Nivel T1

Lesin

Nivel T8

Laminectomia

Control

Lesin

Nivel T1

Lesin

Nivel T8

Administracin de Fenacetina a todos los tratamientos de una dosis nica del

frmaco

Toma de 100 l de sangre a 0,2.5,5,10,20,30,45,60,90,120,150 y 180 min.

Despus de la administracin del frmaco.

Anlisis de las muestras

Clculo de parmetros farmacocinticos

Anlisis estadstico.


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5.1 Metodologa Analtica por Cromatografa Lquida de Alta Resolucin

para lacuantificacin de Fenacetina y Acetaminofn en sangre de

rata

5.1.1. Condiciones cromatogrficas.

Como fase estacionaria se empleo una columna de 15 cm de longitud

por 3.9 mm de dimetro empacada con grupos octadesil unidos a partculas

de silica 5 m de tamao partcula (columna Waters Symetry fase inversa

C18), usndose como fase mvil una mezcla de Fosfato de amonio 0.005M-

Acetonitrilo 70:30 (v/v) a un pH 7.5, (ajuste del pH con hidrxido de sodio 0.4

M), y llevndose la determinacin a una longitud de onda de 254 nm a unavelocidad de flujo de 1.2 mL/min en un cromatgrafo Waters.

5.1.2 Procedimiento general para el anlisis de muestras para la validacin.

1. En tubos cnicos de polietileno de alta densidad se adicionaron 100 L

de sangre total y 100 L la concentracin correspondiente de fenacetina,

acetaminofn y estndar interno, 2-acetamidofenol (concentracin 100

g/mL).

2. Se agit mecnicamente por 30 segundos y se agregaron 20 L de

NaOH 0.05 M. Para nuevamente agitar por 30 segundos.

3. A cada tubo se le adicion 1 mL de acetato de etilo y se agitaron

inmediatamente por 3 minutos en un agitador mecnico.

4. Los tubos fueron centrifugados por cinco minutos a 6000 rpm y la fase

orgnica fue separada en tubos de vidrio cnicos

5. La fase orgnica se evaporo bajo atmsfera de nitrgeno a 60 C.

6. El contenido de cada tubo fue suspendido en 50 L de fase mvil.

7. 20 l de la solucin anterior fue inyectado, al sistema cromatogrfico bajo

las condiciones sealadas anteriormente.


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5.1.3 Muestras blanco para la validacin.

En tubos cnicos de polietileno de alta densidad se adicionaron 100

L de la muestra de sangre total, 100 L del estndar interno, 2-

acetamidofenol (concentracin 100 g/mL) y fueron analizadas siguiendo los

pasos 2 al 7 del procedimiento descrito en el punto 5.1.2.

5.1.4. Muestras de tratamientos.

En tubos cnicos de polietileno de alta densidad se adicionaron 100

L de la muestra de sangre total colectadas durante los tratamientos

experimentales, se les agrego 100 L del estndar interno, 2-acetamidofenol

(concentracin 100 g/mL) y fueron analizadas siguiendo los pasos 2 al 7 del

procedimiento antes descrito.

5.2 Validacin del mtodo analtico.

5.2.1. Selectividad.

Se aplic el mtodo analtico previamente descrito a seis fuentes

independientes de la mism

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