Aislamiento e identificación de Aislamiento e identificación de bacteriasbacterias

A partir de una muestra de agua vamos a aislar e identificar las A partir de una muestra de agua vamos a aislar e identificar las bacterias que contienen mediante una serie de pasos:bacterias que contienen mediante una serie de pasos:

1.1. AislamientoAislamiento2.2. Descripción microscópica y microscópica.Descripción microscópica y microscópica.3.3. Pruebas bioquímicas.Pruebas bioquímicas. Interpretando los resultados podemos llegar hasta la bacteria en Interpretando los resultados podemos llegar hasta la bacteria en

cuestión.cuestión.

Aislamiento en un medio selectivo Aislamiento en un medio selectivo diferencialdiferencial

Medio diferencial: CLEDMedio diferencial: CLED1.1. Contiene lactosa.Contiene lactosa.2.2. Indicador de pH Indicador de pH 3.3. No tiene salesNo tiene sales4.4. Posee cistina.Posee cistina.

Aislamiento por estría Aislamiento por estría múltiple en superficie.múltiple en superficie.

1.1. Incubamos 37º, 24 h.Incubamos 37º, 24 h.2.2. Descripción microscópica Descripción microscópica

de las bacterias en el de las bacterias en el medio Cled.medio Cled.

Descripción macroscópica en el Descripción macroscópica en el medio Cledmedio Cled

Observamos tres colonias:Observamos tres colonias:1.1. Colonia 1Colonia 1: Son blancas, con forma : Son blancas, con forma

regular cuyo borde parece regular cuyo borde parece entero. Superficie mate-lisa, entero. Superficie mate-lisa, planas y de consistencia untuosa. planas y de consistencia untuosa. Se ha producido su aislamiento y Se ha producido su aislamiento y tienen tendencia a la confluencia. tienen tendencia a la confluencia.

2.2. Colonia 2:Colonia 2: Son amarillas y mas Son amarillas y mas pequeñas que las de la colonia 1, pequeñas que las de la colonia 1, poseen forma regular y el borde poseen forma regular y el borde ondulado. Su superficie es ondulado. Su superficie es brillante y lisa, son planas y brillante y lisa, son planas y blandas. Se han aislado y tienen blandas. Se han aislado y tienen tendencia a la confluencia tendencia a la confluencia aunque menor que en la colonia aunque menor que en la colonia 1.1.

3.3. Colonia 3:Colonia 3: Son transparentes y Son transparentes y muy pequeñas con aspecto muy pequeñas con aspecto regular y borde entero. Su regular y borde entero. Su superficie es plana, brillante y superficie es plana, brillante y lisa. Poseen poca tendencia a la lisa. Poseen poca tendencia a la confluencia. (Tuvimos que confluencia. (Tuvimos que recuperarla)recuperarla)

Observaciones del medio CledObservaciones del medio Cled

Es un medio diferencial Es un medio diferencial Medio de aislamiento y Medio de aislamiento y diferenciación al que le se ha añadido indicadores de diferenciación al que le se ha añadido indicadores de actividad bioquímica. actividad bioquímica.

Posee lactosa y como indicador de pH azul de bromotimol Posee lactosa y como indicador de pH azul de bromotimol El medio vira a amarillo cuando se produce la El medio vira a amarillo cuando se produce la fermentación láctica al disminuir el pH.fermentación láctica al disminuir el pH.

1.1. Se puede apreciar el cambio de pH en el medio debido a Se puede apreciar el cambio de pH en el medio debido a las colonias amarillas.las colonias amarillas.

No tiene sales No tiene sales Por lo que algunas especies móviles Por lo que algunas especies móviles como el género como el género ProteusProteus no invaden la placa ya que las no invaden la placa ya que las necesitan.necesitan.

Tiene cistina Tiene cistina Aminoácido necesario para coliformes. Aminoácido necesario para coliformes.

Aislamiento por estría múltiple en Aislamiento por estría múltiple en un medio general de un cultivo un medio general de un cultivo

puro puro Para poder identificar Para poder identificar

las distintas colonias las distintas colonias se realiza una siembra se realiza una siembra en agar de cada una en agar de cada una de ellas mediante de ellas mediante aislamiento por estría aislamiento por estría múltiple.múltiple.

Se incuban a 37º Se incuban a 37º durante 24 horas.durante 24 horas.

Se realiza un estudio Se realiza un estudio macroscópico de cada macroscópico de cada una de ellas.una de ellas.

Se realiza un estudio Se realiza un estudio microscópico microscópico mediante tinción de mediante tinción de Gram de cada una de Gram de cada una de ellas.ellas.

Descripción macroscópica y Descripción macroscópica y microscópica de la colonia 1microscópica de la colonia 1

Descripción Descripción macroscópica en agar:macroscópica en agar:

1.1. Las colonias poseen gran Las colonias poseen gran tamaño con tendencia a tamaño con tendencia a la confluencia. Tienen la confluencia. Tienen una forma regular con el una forma regular con el borde ondulado. Su borde ondulado. Su superficie es blanca, superficie es blanca, plana y lisa. plana y lisa.

Tinción de Gram:Tinción de Gram:

1.1. Bacilos Gram + (forma de Bacilos Gram + (forma de bacilo, color azul)bacilo, color azul)

Descripción macroscópica y Descripción macroscópica y microscópica de la colonia 2microscópica de la colonia 2

Descripción macroscópica Descripción macroscópica en agar:en agar:

1.1. Son más pequeñas que las Son más pequeñas que las de la colonia 1, tienen forma de la colonia 1, tienen forma irregular con los bordes irregular con los bordes fimbriado. Su superficie es fimbriado. Su superficie es brillante y rugosa, son brillante y rugosa, son planas y blancas. Tienen planas y blancas. Tienen una consistencia mucosa. una consistencia mucosa. Poseen tendencia a la Poseen tendencia a la confluencia.confluencia.

Tincón de Gram:Tincón de Gram:1.1. Bacilos Gram -. (son rosas Bacilos Gram -. (son rosas

aunque la tinción no se aunque la tinción no se observa bien creemos que observa bien creemos que es debido al colorante es debido al colorante utilizado que estaba diluido)utilizado que estaba diluido)

Descripción macroscópica y Descripción macroscópica y microscópica de la colonia 3microscópica de la colonia 3

Descripción Descripción macroscópica en agar:macroscópica en agar:

1.1. Son colonias pequeñas, Son colonias pequeñas, transparentes con un transparentes con un punto en el centro punto en el centro amarillo, con forma amarillo, con forma irregular y borde irregular y borde ondulado. Su superficie ondulado. Su superficie es mate y rugosa y están es mate y rugosa y están elevadas. Poseen una elevadas. Poseen una consistencia untuosa y no consistencia untuosa y no tienen tendencia a la tienen tendencia a la confluencia.confluencia.

Tinción de Gram:Tinción de Gram:1.1. Son bacilos Gram -.Son bacilos Gram -.

Rutas a seguir en la colonia 1Rutas a seguir en la colonia 1

Al ser bacilos Gram + les Al ser bacilos Gram + les realizamos la tinción de realizamos la tinción de esporas y nos da como esporas y nos da como resultado +. resultado +.

Se trata del Gén. Se trata del Gén. BacillusBacillus

Rutas a seguir en la colonia 2Rutas a seguir en la colonia 2

Al ser bacilos Gram – Al ser bacilos Gram – realizamos la prueba de la realizamos la prueba de la OxidasaOxidasa que resulta ser que resulta ser negativa por lo que negativa por lo que realizamos la siembra en realizamos la siembra en medio Kligler.medio Kligler.

Siembra en Kligler de la colonia 2.Siembra en Kligler de la colonia 2.

En el medio Kligler se En el medio Kligler se observa:observa:

1.1. La fermentación de la La fermentación de la glucosa.glucosa.

2.2. La fermentación de la La fermentación de la lactosa.lactosa.

3.3. Producción de gasProducción de gas4.4. Producción de SHProducción de SH22

Se realiza mediante una Se realiza mediante una siembra en picadura y estría siembra en picadura y estría con el hilo de siembra en el con el hilo de siembra en el medio Kligler.medio Kligler.

Glucosa: el medio tiene una Glucosa: el medio tiene una proporción 0,1% de glucosa.proporción 0,1% de glucosa.

1.1. Glucosa + Glucosa + Viraje del medio a Viraje del medio a amarillo en el pico de flauta.amarillo en el pico de flauta.

2.2. Glucosa - Glucosa - Tubo entero con Tubo entero con color rojo.color rojo.

Lactosa: el medio tiene Lactosa: el medio tiene concentración alta.concentración alta.

1.1. Lactosa + Lactosa + Todo el tubo Todo el tubo amarillo.amarillo.

2.2. Lactosa - Lactosa - Tubo rojo. Tubo rojo. Gas: si produce se producen Gas: si produce se producen

burbujas, agrietamiento o burbujas, agrietamiento o elevación.elevación.

Producción de SHProducción de SH22: Si lo : Si lo produce se ve color negro en el produce se ve color negro en el fondo del tubo debido a fondo del tubo debido a precipitado de sales.precipitado de sales.

Resultados del KliglerResultados del Kligler

Es te es el resultado que nos Es te es el resultado que nos tendría que haber dado: tendría que haber dado:

1.1. Inclinado ácido (lactosa +)Inclinado ácido (lactosa +)

2.2. Fondo ácido (glucosa +)Fondo ácido (glucosa +)

3.3. Producción de gas +Producción de gas +

4.4. SHSH22 negativa.negativa. Tras varios intentos de Tras varios intentos de

realizar el kligler, no se realizar el kligler, no se produce los resultados produce los resultados esperados en diferentes esperados en diferentes medios de cultivo por lo que medios de cultivo por lo que creemos que la muestra no creemos que la muestra no esta bien, ya que con otra esta bien, ya que con otra muestra si da los resultados muestra si da los resultados adecuados. adecuados.