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EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Flebotomía

N° SOP: I

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OBJETIVO

El alumno llevara a cabo la extracción de sangre venosa y la apropiada recolección de la muestra.

JUSTIFICACIÓN

El lugar de adecuado de elección para obtención de sangre a analizar es la región venosa ante cubital (venas basílica o mediana cefálica), ya que este nivel existe una piel fina y móvil, y las venas son de grueso calibre y relativamente 3 superficiales. La manera de obtención pude ser jeringa o camiseta (vacutainer) teniendo características estándar de diámetro interno las agujas (0,500 mm calibre 19 y 0.790 calibre 21). La cantidad de sangre recogida con este sistema dependerá de la capacidad del medio de recolección (jeringa/camiseta).

El sistema de recolección de tubo al vacio es de los más empleados hoy en día ya que permite recoger la sangre desde la vena o la jeringa en el tubo, evitando todo contacto de la misma con el operador, el volumen de la sangre extraída mediante este sistema depende del tamaño del tubo y de la intensidad de vacío, lo que permite, además, conseguir siempre una porción correcta entre la cantidad de sangre extraída y el anticoagulante.

METODOLOGÍA

Preparación del paciente:

1. Correcta identificación del paciente (nombre y dos apellidos)

2. Hacer constar siempre la edad 3. Condiciones de la extracción

(reposo y ayunas) 4. Preguntar vicios (fumador/alcohol) 5. Posición (sentado)

MATERIALES Ligadura • Recipiente RPBI (algodón/

humedecido con alcohol

etílico 40%) REACTIVOS • Jeringa o camiseta

vacutainer

(agujas vacutainer) • Tubos al vacio

Anticoagulante EDTA (tubos lila)

Anticoagulante citrato de sodio Gradillas

Elaboró: Shirley Karely García

Alcocer

Revisó: Jorge Alberto Romero

Aguilando

Aprobó: Jorge Alberto Romero

Aguilando

EXPERIENCIA

DE APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Flebotomía

N° SOP: I

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*Nota: el reactivo depende en este caso del examen que se realizara al paciente…

PROCEDIMIENTO

1. Identificación correcta del paciente, nombre, edad… en caso contrario marque la hoja de petición con el numero del paciente, el código de barra.

2. Posición del paciente correctamente sentado (o tendido ) y el brazo a punzar colocado en superficie de forma recta

3. Verificar que el material a utilizar este al alcance y en optimas condiciones 4

4. Preparar la jeringa/camiseta, seleccionar el/los tubos necesarios para los análisis del paciente

5. Colocar torniquete, seleccionar una vena mientras que el paciente apriete su puño con fuerza *nota no dejar el torniquete por mas de 5 segundos..retirarlo esperar un momento y volver a colocarlo.

6. Hacer una desinfección del lugar a punzar (vena seleccionada9 de forma circular o ascendente.

7. Se realiza la punción de forma que el bisel de la aguja quede hacia arriba, insertando a un ángulo aproximado de 30-45° en la parte inferior de la vena.

8. Traspasando el lumen de la vena, si la punción fue correcta el segmento de la jeringa posterior se produce a la extracción.

9. Se retira el torniquete, se extrae la cantidad de tubos necesarios, no se extrae la aguja/vacutainer solo se insertan los tubos. O en defecto se retira la aguja. Se distribuye con movimiento suave los tubos con aditivos para su correcta mezcla, sin ser bruscos para evitar la hemólisis.

10. Se coloca una torunda sin exceso de alcohol sobre el lugar de punción, retirando la aguja del mismo.


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11. Se dobla el brazo del paciente, dando la indicación de mantener alzado por un periodo de 3-5 min.

12. Desechar la aguja usada en contener de R.P.B.I Y eliminación de residuos de seguridad.

OBSERVACIÓN

• Se tiene que colocar en una posición adecuadamente correcta al paciente. • No proceder a la extracción si el paciente presenta piel lesionada o irritada.

Saber la correcta ubicación de la vena antes de punzar • Si no se está seguro del lugar a punzar, no realizar la técnica.

RESULTADO: Extracción de sangre venosa de forma adecuada, a la primera punción y en tubo idóneo tapa lila con anticoagulante EDTA

EXPERIENCIA DE APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Frotis sanguíneos

N° SOP: II

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OBJETIVO

Conocer las propiedades de las diferentes tinciones usadas para realizar el frotis sanguíneo.

JUSTIFICACIÓN 5

Se define como frote, frotis o extendido, a la preparación microscópica delgada y transparente, extendida entre dos cristales (porta o cubreobjetos), obtenida de un líquido orgánico espeso o tejido semilíquido o pastoso (sangre, aspirados, secreciones, exudados, etc.) El frote periférico se utiliza para el estudio de las características citológicas de las células de la sangre, lo cual permite valorar el funcionamiento general de la médula ósea a través de sus componentes celulares, lo cual implica la evaluación de las líneas eritrocíticas, leucocitaria y megacariocítica, determinando anormalidades en forma, tamaño, color e inclusiones citoplasmáticas, dando una medida cuantitativa y cualitativa de los elementos que lo conforman.

METODOLOGÍA La preparación y tinción de un extendido de sangre periférica o de médula ósea es una técnica fundamental en hematología,


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ya que la información obtenida puede conllevar a: 1) El diagnóstico correcto de una enfermedad; 2) Orientar al clínico para brindar la terapéutica adecuada y 3) Monitorear el proceso de recuperación del paciente.

Un buen frotis sanguíneo debe tener la presencia de cabeza, cuerpo y cola de manera distinguible.

MATERIALES REACTIVOS

• 2 portaobjetos limpios • Sangre con EDTA

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Frotis Sanguíneos

N° SOP:II

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PROCEDIMIENTO

1. Recoger una pequeña gota de sangre y depositarla a 1cm del extremo de

un portaobjetos totalmente limpio. 6

2. Extender mediante otro portaobjetos de la manera siguiente: poner el portaobjetos en contacto con la gota, que en principio se alargará en una línea en la zona de contacto de los dos portas. Hacer deslizar el portaobjetos sobre el porta soporte en dirección opuesta a la de la gota de sangre; ésta, por tensión superficial, se extiende formando una lámina muy delgada. De esta manera, la gota es atraída por el portaobjetos esmerilado y no empujada.

3. Dejar secar al aire.

OBSERVACIÓN Se realizaron diferentes frotis correctos y otros inaceptables, por lo cual fue necesario realizar varias veces el procedimiento de la práctica. Después de haber elaborado los frotis se procedió a la tinción para llevar a cabo el diferencial de los leucocitos.


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RESULTADO Extendido de manera adecuada se observa las 3 partes de un frotis óptimo, se realizaron 15 frotis óptimos en tiempo diferido

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP Microscopio

N° SOP: III

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OBJETIVO

Que el alumno conozca y aprenda a dar un correcto mantenimiento a los microscopios.

JUSTIFICACIÓN

Un microscopio óptico es un microscopio 7

basado en lentes ópticos. También se le conoce como microscopio de luz, (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de campo claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek.. La Microscopía es el conjunto de técnicas y métodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeñez están fuera del rango de resolución del ojo normal.

Si bien el microscopio es el elemento central de la microscopía, el uso del mismo se requiere para producir las imágenes adecuadas, de todo un conjunto de métodos y técnicas afines pero extrínsecas al aparato. Algunas de ellas son, técnicas de preparación y manejo de los objetos de


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estudio, técnicas de salida, procesamiento, interpretación y registro de imágenes, etc.


• Microscopio • Gasas • Hisopos • Alcohol

PROCEDIMIENTO

1. Desmontar los oculares para su aseo con torunda de algodón y alcohol, limpiar los lentes dentro de los mismos.

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP Microscopio

N° SOP: III

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2. Con una pieza de tela para lentes limpiar los objetivos, después de

destornillar la camiseta del objetivo para limpiar por dentro 3. Con ayuda de un hisopo limpiar el interior de los lentes del objetivo 4. Quitar los tornillos de tuerca del condensador para limpiar con tela,

acomodar las partes y colocarlas perfectamente.

5. Armar nuevamente todas las partes que hayan sido desinstaladas. 8

6. Para mejores resultados es necesario apartar de los microscopios que ya no son aptos.

OBSERVACIÓN

• Los microscopios se encontraban muy sucios • Se encontraron microscopios sin función • Se reacomodaron 5 condensadores

RESULTADO

Se realizó correctamente el mantenimiento de los microscopios


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Teniendo un número elevado de microscopios con correcto funcionamiento, y

obteniendo la adecuada manera de limpiar y acomodar las partes desmontables

del microscopio obteniendo así mejor observación de las muestras.

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Velocidad de sedimentación globular

N° SOP: IV

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OBJETIVO

Detectar la presencia de inflamación debida a causas como infecciones, tumores o enfermedades autoinmunes.

Monitorizar trastornos específicos como arteritis de la temporal, vasculitis sistémicas, poli mialgia reumática o artritis reumatoide.

9 El valor de la técnica no es muy sensible y además poco específica, por sí sola tiene poco valor y se debe asociar a otros estudios para poder orientar un diagnóstico.

JUSTIFICACIÓN

La velocidad de sedimentación globular VSG es la precipitación de los eritrocitos (glóbulos rojos) en un tiempo determinado, que se relaciona directamente con la tendencia de los glóbulos rojos hacia la formación de acúmulos (pilas de monedas) así como a la concentración plasmática de proteínas (globulinas y fibrinógeno). La capacidad y la velocidad de formar estos acúmulos depende de la atracción de la superficie de los glóbulos rojos.

La VSG es una prueba analítica análoga a las conocidas como reactante de fase aguda, como lo es la proteína C reactiva o PCR (no confundir con la reacción en cadena de la polimerasa, Polymerase Chain Reaction). Esto significa que es un


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marcador inespecífico, no relacionado con ninguna enfermedad en concreto, cuya elevación puede implicar procesos inflamatorios, infecciosos o neoplásicos. Por otra parte, sus valores son ampliamente variables por causa de factores múltiples aún mal establecidos (por ejemplo, se sabe que aumenta con la edad), por lo que su interpretación debe realizarse en el contexto de la clínica y del resto de pruebas analíticas. Existen tablas de valores normales máximos por edad y sexo (por ejemplo, 10 mm por hora en varones jóvenes).

La VSG se utiliza como dato de rutina en el despistaje inicial (examen médico preventivo) de enfermedades, como seguimiento de múltiples enfermedades crónicas, y excepcionalmente como criterio de diagnóstico (por ejemplo en la arteritis de células gigantes). Algunos procesos también pueden presentar disminución de la VSG.

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP


N° SOP: IV

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METODOLOGÍA

Para la prueba la sangre no debe coagularse, motivo por el cual se adiciona a la sangre extraída una sustancia anticoagulante. La sangre 10 homogeneizada se carga en una pipeta. Se acomoda la pipeta en un soporte y a determinado tiempo preestablecido (60 minutos si está la pipeta a 90 grados de la mesa donde se apoya el soporte, o menos tiempo cuanto menor sea el ángulo entre la mesa y la pipeta; hay soportes especiales que permiten inclinaciones controladas para obtener ángulos diferentes a 90 grados) se procede a leer cuántos milímetros han sedimentado (decantado) los hematíes.

La sedimentación globular se realiza en tres etapas:

• Hemaglutinación: es la tendencia de los hematíes a formar agregados en forma de "pilas de monedas". Estos sedimentan de


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forma muy lenta por lo que van a determinar la velocidad de todo el proceso

• Sedimentación: desplazamiento de los hematíes hacia el fondo de la pipeta a velocidad constante.

• Acumulo o depósito en el fondo.

El principio físico de esta prueba se basa en la Ley de Stokes, considerando los hematíes como esferas suspendidas en un medio infinito.


• Gradilla para eritrosedimentacion con Sangre anticoagulada con indicador de nivel EDTA de menos de 2hras Tubos de wintrobe limpios y secos de haber sido extraída.

• Pipeta pasteur larga o canula de wintrobe • Cronometro


Hematología

SOP


N° SOP : IV

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PROCEDIMIENTO

1. Una vez teniendo la muestra, se llena el tubo de wintrobe hasta 10-0 con ayuda de la pipeta pasteur, teniendo en cuenta de que no se formen burbujas. En caso de formarse burbujas eliminar mediante agitación vigorosa. 11

2. Colocar inmediatamente el tubo de wintrobe en la gradilla de eritrosedimentacion.

3. Iniciar el conteo con el cronometro 4. Tomar la lectura exactamente a los 60 minutos. Mida la velocidad como la

longitud de la columna de plasma

OBSERVACIÓN

En la realización de esta práctica tuvimos problemas con la pipeta, debido a que no eran lo suficientemente largas y formaban burbujas en el tubo.

No se contaba con la gradilla para eritrosedimentacion, por lo que se pusieron las muestras en línea formando un angulo de aproximadamente 90°, haciendo respaldo con la pared y sosteniéndolas sobre una mesa fija con ayuda de cinta adhesiva


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RESULTADO

Obteniendo 35 ml/hrs

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP Microhematócrito N° SOP: V

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OBJETIVO

Medir el porcentaje de células trasportadas de oxigeno con respecto al volumen total de sangre.

JUSTIFICACIÓN

El hematocrito mide el porcentaje del volumen de la sangre total que es ocupado por los eritrocitos, es uno de los métodos de mayor valor estadístico, sencillo y 12 exacto. Al igual que la hemoglobina y la cuenta de eritrocitos, el Ht es uno de los parámetros importantes para determinar los índices eritrocíticos (VGM, CMH, CMHC).

METODOLOGÍA

El Microhematócrito tambien llamado método del tubo capilar, proporciona un paquete mejor que el método de Wintrobe, con valores de 2-3% más bajos. Requiere el uso de una centrifuga para microhematócrito especial que se mueve con una cabeza llevando hasta 24 tubos capilares y capaz de dar 12,000rpm.

El tubo en forma de cilindro corto y delgado, se llena fácilmente por capilaridad de la muestra de sangre no coagulada, y cuando está lleno se sella calentándolo con una llama, El tubo se coloca en una de las ranuras de la cabeza de la centrifuga con el extremo sellado hacia fuera. Se pueden usar tubos comunes y corrientes cuando se usa sangre que tiene un anticoagulante y tubos heparinizados. MATERIALES EQUIPO

• Tubo capilar heparinizado. Centrifuga. • Mechero de bounce. • Tubo de vidrio.


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PROCEDIMIENTO

1. Se toma la muestra. 2. Se introduce el tubo capilar haparinizado dentro de la muestra. Se realiza

una breve inclinación del tubo hasta que este se llene a 2/3 partes, es decir que la muestra llene el tubo hasta la línea negra delgada.

3. Una vez lleno el tubo capilar, este se coloca en la flama del mechero de bounce a fin de que se selle. Se debe tomar por el extremo más distante de la sangre con objeto de no hemolizarla, efectuando un movimiento de rotación.

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Microhematócrito

N° SOP: V

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4 Ya sellado el tubo capilar, se procede a colocarlo en un tubo de vidrio el cual posteriormente se lleva a la centrifuga, donde se centrifugara durante seis minutos a 3200revoluciones.

OBSERVACIÓN 13

Tras la centrifugación, se observa que la muestra queda dividida en dos fracciones; el plasma por un lado y la fracción celular por el otro. En base a esto se puede calcular el hematocrito.


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RESULTADO: 39.32%

Total= 8.9 cm = 100%

Sedimento= 3.5 mm

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Conteo de Eritrocitos

N° SOP: VI

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OBJETIVO

Determinar el número de eritrocitos mediante una dilución con líquido de Hayem.

JUSTIFICACIÓN

Conocer la cantidad de eritrocitos para determinar si los valores obtenidos se 14

encuentran fuera o dentro del rango normal.

METODOLOGÍA

Para el recuento de eritrocitos, la sangre se diluye con una solución isotónica, conservando íntegros a los eritrocitos, impidiendo a su vez, que se hinchen o se contraigan, pero también esta solución destruye a los leucocitos. Luego, esta dilución se coloca en una cámara de Neubauer con la ayuda de una pipeta de Thoma y se cuentan cada uno de los eritrocitos al microscopio con el objetivo de 40X, para calcular el número de eritrocitos por mm³. El recuento de eritrocitos es un examen de sangre que determina el número de glóbulos rojos (gr) que tiene una persona. la cantidad de oxígeno recibida por los tejidos corporales depende de cuántos glóbulos rojos tenga la persona y de qué tan bien éstos estén funcionando.

MATERIALES

• Tubos de ensayo de 13 x 100 mm


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• Pipeta Thoma para glóbulos rojos • Boquillas • Gasas • Gradilla • Microscopio • Cámara de Neubauer • Muestra sanguínea

REACTIVOS • Solución salina • Liquido de hayem

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Conteo de eritrocitos.

N° SOP:VI

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PROCEDIMIENTO

1. Se llena de sangre la pipeta hasta la señal 0.5. 2. Limpiar cuidadosamente con una gasa la punta de de la pipeta. 3. Completar con líquido Hayem hasta marca de 101. 4. Se tapan los extremos de la pipeta y se agita suavemente por 3 minutos

para facilitar la mezcla en la ampolla de dilución de la pipeta. 5. Eliminar las 3 primeras gotas de la pipeta y colocar una gota en la cámara

15 de Neubauer. 6. Dejar en reposo 2 o 3 minutos la cámara de Neubauer con el fin de que los

eritrocitos sedimenten. 7. Localizar la cuadricula de la cámara de Neubauer con el objetivo (10X) y

enseguida enfocar con objetivo de (40X). 8. El recuento se realizara en los cuadros más pequeños de la cámara,

contando los hematíes localizados en los 4 cuadros de los extremos y en el del centro, haciendo un total de 5 cuadros.

9. Realizar los cálculos para determinar la cantidad de eritrocitos resultantes.

OBSERVACIÓN

• Se deben evitar burbujas ya que introducirían errores en la medición. • No se debe agitar con demasiada energía, para evitar que se rompan las

células.


Alcocer


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RESULTADOS: Calculo: Nx200x10x400

153x200x10x40

= 80


Hematología

SOP

Tinción rápida hemotinción

N° SOP: VII

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OBJETIVO:

Realizar una tinción de las células blancas presentes en un frotis de sangre mediante la técnica de tinción hemocolorante rápido.

JUSTIFICACIÓN:

El Hemocolorante Rápido Hycel es un equipo de soluciones colorantes para la 16 tinción

rápida manual de frotis sanguíneos ,proporcionando resultados similares a la tinción de Wright y Giemsa.

METODOLOGÍA:

El equipo consta de una solución fijadora y dos soluciones colorantes amortiguadas, cuyos componentes dan por resultado una tinción clásica del tipo Romanowsky que permite diferenciarlas células sanguíneas en tan solo 15 segundos. Este equipo también puede ser utilizado para teñir células que por su morfología y composición fisicoquímica,

1450000 =

80


Alcocer


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CUADRANTE 1 2 3 4 5

ERITROCITOS 68 13 31 41 0

necesitan 2colorantes de contraste para poder identificar las diferentes estructuras celulares y así reconocer procesos patológicos .Los colorantes vienen en frascos que permiten la inmersión directa de los portaobjetos Materiales Reactivos

• Microscopio azul de metileno • Portaobjetos fosina • Solución fijadora

EXPERIENCIA

DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Tinción rápida hemotinción

N° SOP: VII

Pág.: _2_ de _2_

PROCEDIMIENTO:

1. Preparar un frotis sanguíneo y dejar secar al aire. 2. Sumergir el frotis en azul de metileno por 5 segundos. 3. De nuevo sumergir en fosina por 5 segundos. 4. Sumergir en solución fijadora por 5 segundos.

5. Colocar una gota de aceite de inmersión 17

6. Observar al microscopio

OBSERVACIÓN

Se observaron células del frotis, se pudo notar que este tipo de tinción como su nombre lo indica es mucho más fácil y rápido.

RESULTADO

• Neutrófilos segmentados • Linfocitos • Plaquetas • eritrocitos


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EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Conteo diferencial

N° SOP: VIII

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OBJETIVO

Realizar el Conteo Diferencial de Leucocitos utilizando la tinción de Hemocolorante Rápido, identificando los diferentes tipos de glóbulos blancos en sangre periférica. 18

JUSTIFICACIÓN

La fórmula leucocitaria nos da información sobre el porcentaje de leucocitos de cada tipo, en base a su morfología y características tintoriales. A partir de estos valores y de la cuenta total de glóbulos blancos obtenidos en micro litros, podremos calcular los valores absolutos de cada línea celular en sangre periférica, y así compararlos con los valores normales de cada una de ellas.

METODOLOGÍA

Hacer la cuenta diferencial de las variedades de glóbulos blancos es de gran importancia en la CH, normalmente, en sangre periférica pueden encontrarse los siguientes tipos de leucocitos: neutrófilos o polimorfonucleares (incluye las formas con núcleo segmentado, las de núcleo “en banda” y los metamielocitos), eosinófilos, basófilos linfocitos y monocitos.


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El recuento diferencial evalúa la distribución y la morfología de loa glóbulos blancos, y de este modo, aporta información másespecífica respecto al sistema inmunitario de los pacientes con el simple recuento de tales células. En este estudio de laboratorio clasifica 100 o más leucocitos en un frote de sangre teñido. La ventaja que tiene esta preparación de sangre extendida y coloreada, es importante para el diagnóstico clínico ya que se observan los diferentes tipos de leucocitos, con los que se establece el conteo diferencial, también nos puede informar sobre la presencia de anormalidades morfológicas en ellos que puede ser de considerable pronostico y significación diagnostica.

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Conteo diferencial

N° SOP: VIII

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• Jeringa y aguja o sistema vacutainer Tinción Hemocolorante Rápido

• Portaobjetos Aceite de inmersión

• Algodón con alcohol

19

• Ligadura PROCEDIMIENTO

1. Se realiza la extracción de sangre con la técnica adecuada. 2. Posteriormente, se realiza un extendido de sangre periférica (frotis

sanguíneo). Este no debe de ser muy grueso, de lo contrario, el conteo no se realizará correctamente.

3. Una vez que se ha dejado secar el frotis sanguíneo, se procede a realizar la tinción con los Hemocolorantes rápidos.

4. Cada frasco contiene 100ml de reactivo, se va sumergir el frotis dentro de cada uno de los reactivos durante cinco segundos siguiendo el orden: • Se añade el buffer o solución fijadora. • Sumergir el portaobjetos en el Hemocolorante UNO (solución de Eosina

Amarillenta o colorante rojo) durante 5 segundos. • Lavar con agua corriente y sacudir para eliminar el excedente. • Sumergir por 5 seg. En el Hemocolorante DOS (solución de Azur-Azul

de metileno o colorante azul). • Lavar con agua corriente y dejar secar.

5. Se añade una gota de aceite de inmersión sobre el extremo más delgado del frotis.


Alcocer


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6. Se observa al microscopio. Se facilita su identificación tomando en cuenta que los núcleos son púrpura oazules, el citoplasma azul pálido, algunas granulaciones son rojas como eosinófilos, azulesen los basófilos, las plaquetas son azul púrpura y los eritrocitos rosas.

OBSERVACIÓN

La mejor manera de desplazar el portaobjetos y poder ejecutar un buen conteo es en forma de zigzag, con lo que se evita contar dos veces el mismo campo.

El número mínimo de leucocitos contados en el recuento diferencial es 100, los cuales deben ser el total de la suma de los dos lados de la extensión.

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Conteo diferencial

N° SOP: VIII

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RESULTADO

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Equipo de colorantes para tinción policromatica manual, rápida de frotis sanguíneo. Incluye: Eosina Amarillenta en amortiguador de fosfatos, Azur-Azul de metileno en amortiguador de fosfatos y

Solución fijadora.


Alcocer


Aguilando


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TIPO CELULAR N° DE CÉLULAS

Meta mielocitos 0

Bandas 1

Segmentados 68

Linfocitos 25

Monocitos 2

Eosinófilos 2

Basófilos 0

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Conteo de reticulocitos

N° SOP: IX

Pág.: _1_ de _2_

OBJETIVO:

Realizar la determinación de reticulocitos como medio para valorar la

hematopoyesis en un paciente JUSTIFICACIÓN:

El recuento de reticulocitos ha sido por muchos años 21

la prueba más sencilla de la cual dispone el laboratorio clínico para valorar la actividad eritropoyética. El continuo aumento en los transplantes de médula ósea, como procedimiento de tratamiento de numerosas neoplasias y el uso extensivo de agentes citotóxicos (quimioterapia y radioterapia) en estos trastornos, han aumento el uso del recuento de reticulocitos para valorar la capacidad de respuesta medular frente a estas estrategias terapéuticas.

METODOLOGÍA:

Se realiza el recuento de reticulocitos en 10 campos, en los cuales, haya aproximadamente 100 hematíes/campo.

Seguidamente calculamos la proporción de reticulocitos en dichos campos.


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% Reticulocitos = nº de reticulocitos observados X 100

nº de hematíes contados


• Microscopio Azul de cresil brillante • Tubo de ensayo Colorante wright • Portaobjetos • Pipetas pasteur con bulbo • Gradilla • Pipetas serológicas


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EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Conteo de reticulocitos

N° SOP: IX

Pág.: _2_ de _2_

PROCEDIMIENTO

1. Pipetear en un tubo de ensaye 500ml de sangre y 500ul de Azul de cresil brillante

2. Agitar la mezcla colorante sangre e incubar 15min a baño maría a una temperatura de 37°

3. Hacer una extensión en un portaobjetos, utilizando una gota de la mezcla 22

4. Dejar secar 5. Teñir con colorante de Wright 6. Colocar una gota de aceite de inmersión 7. Observar en el microscopio

OBSERVACIÓN

Se observaron reticulocitos en alguno de los 10 campos observados 1er 2do 3er 4to 5to 6to 7mo 8vo 9no 10mo campo campo campo

campo campo campo campo campo campo campo

Ret.

Eri.

3 0 0 0 0 0 1 0 0 1

112 148 141 120 137 176 132 115 131 95

RESULTADO

Reticulocitos: 5 = 0.38 % 1307 Eritrocitos: 1307


Alcocer


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5 X 100

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Conteo de glóbulos blancos

N° SOP: X

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OBJETIVO:

Aprender a realizar y aplicar la metodología para un recuento de Leucocitos

por milímetro cúbico de sangre e interpretar el resultado.

JUSTIFICACIÓN: 23

Los glóbulos blancos o leucocitos ayudan a combatir infecciones en el cuerpo. El conteo

de glóbulos blancos (WBC) es el número total de glóbulos blancos. Un WBC alto significa

que el cuerpo está combatiendo una infección. Un WBC muy bajo puede ser provocado

por problemas en la médula ósea. Esta condición se llama citopenia o leucopenia y

significa que el cuerpo tiene comprometida su capacidad para combatir infecciones.

METODOLOGÍA:

para el conteo de leucocitos, se usan

métodos sistemáticos que son más

rápidos y precisos, y los métodos

manuales. Todo método manual de

recuento celular incluye las siguientes

partes: dilución de la sangre, muestreo

de la sangre diluida en un volumen,

recuento de células en ese volumen. Para el recuento de leucos se cuentan los 4

cuadrados de las esquinas, que corresponden a los campos 1, 3,7 y 9.


Alcocer


Aguilando


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EXPERIENCIA

DE APRENDIZAJE

Hematología

SOP


N° SOP:X

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MATERIALES:

Probeta de 50ml,micropipetas de diferentes medidas, un frasco gotero, cámara de

Neubauer, microscopio, Pipeta de Thoma para glóbulos blancos, equipo para

venopuncion (Tubo lila), boquilla blanca, tubos de ensayo, gasas

24 REACTIVOS:

liquido de Turk, muestra sanguínea.

PROCEDIMIENTO:

1. Para el líquido de Turk; se coloca 47.5ml de agua destilada en una probeta.

2. Se le agregan 2.5ml de ácido acético, además dos gotas de azul de

metileno y se homogeniza.

3. En un tubo de ensayo se añade 2ml del líquido de Turk y 100ml de sangre,

la mezcla se homogeniza y posteriormente se llena la cámara de Neubauer.

4. Se deja reposar por 3min y se inicia el conteo con el microscopio en los

cuadrantes para blancos.

De forma manual en la pipeta de blancos se coloca 0.5ml de líquido de Turk, luego

0.5ml de sangre, por último se termina de llenar la pipeta hasta la marca (101). Se

agita durante 3min y con la mezcla se llena la cámara de Neubauer. El conteo se

realiza con ayuda del microscopio en el objetivo 10X, los valores normales de


Alcocer


Aguilando


Aguilando

referencia son de 4500 a 10,000 leucocitos y se determinan mediante la siguiente

fórmula:

Donde N representa los leucocitos totales de los cuatro cuadrantes.

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP


N° SOP:X

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OBSERVACIÓN:

El hecho de saber realizar la técnica manual nos permite ampliar nuestra

capacidad de trabajo, aun cuando no se cuente con los métodos sistemáticos.

25

RESULTADO:

Cuadrante 1 2 3 4 Globulos blancos

35 46 45 58


Alcocer


Aguilando


Aguilando

Cuadrantes para globulos blancos. Cámara de neubauer.

184 X20X10 = 9200 mm3 4

EXPERIENCIA

DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Histograma

N° SOP: XI

Pág.: _1_ de _3_

OBJETIVO

El objetivo de esta practica es analizar los diferentes tipos de histogramas, de tal manera que el médico disponga de información que le permita utilizar la prueba en toda su dimensión en el diagnóstico y el tratamiento de enfermedades de la sangre o fuera de ella, y que el laboratorio clínico tenga 26 elementos de análisis para tomar decisiones al momento de hacer la prueba o de incorporar tecnología.

JUSTIFICACIÓN

Se proporciona un método para analizar y separar las tres poblaciones mas importantes de un histograma compuesto de células sanguíneas blancas mediante la identificación de un valor modal para las concentraciones de linfocito (linf) y granulocito (gran) sobre respectivas escalas primeras previamente determinadas en el histograma. También se determinan umbrales al 60% desde tales valores máximos, se calculan las áreas linf y gran para proporcionar curvas de linf y gran. Estas curvas se deducen después del histograma resultante en una curva de población media, cuyo valor máximo se determina, y desde el cual se derivan a derecha e izquierda umbrales basados en el valor máximo de población media. Los umbrales a derecha e izquierda se aplican después al histograma, y las áreas a la izquierda, entre, y a la derecha de los umbrales, se integran, con objeto de establecer las áreas de linfocito, monocito y gran del histograma. El método proporciona discriminadores con umbrales en movimiento, que varían de conformidad con los cambios en el histograma, y compensan los cambios en


Alcocer


Aguilando


Aguilando

condiciones que afectan a la distribución del tamaño de las células sanguíneas blancas.

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Histograma

N° SOP: XI

Pág.: _2_ de _3_

METODOLOGIA Análisis basado en la distribución de las líneas celulares (células blancas) de acuerdo a su volumen y cantidad de células para determinar cualquier anomalía de acuerdo a los resultados obtenidos.

Indican en general: 27

• La distribución de las células según su tamaño • Promedio del tamaño de las células dentro de una población especifica • La presencia de subpoblaciones clínicamente significativas

MATERIALES

• Muestra sanguínea

EQUIPOS

• Counter 19 (Wiener lab)

PROCEDIMIENTO

1. Obtención de la muestra sanguínea en un tubo con anticoagulante EDTA (tapón lila)

2. Se coloca la muestra en el equipo Counter 19 (Wiener lab) para su procesamiento de análisis

3. Se elabora el histograma con los datos obtenidos


Alcocer


Aguilando


Aguilando

OBSERVACIONES Para la realización del histograma es necesario tomar en cuenta tanto el resultado en porcentaje (valores relativos) como los valores absolutos. De acuerdo a estos valores se hace el punteo para después hacer la determinación.

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Histograma

N° SOP: XI

N° SOP: XI

RESULTADOS

28


Alcocer


Aguilando


Aguilando

Lymph # 3.2 x 103/uL

Mid # 0.9 x 103/uL

Gran # 13.8 x 103/uL

Lymph % 18.4

Mid % 5.1

Gran % 76.5

EXPERIENCIA

DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Tiempo de Protrombina (TP)

N° SOP: XII

Pág.: _1_ de _2_

OBJETIVO

El alumno realizara la determinación de TP como medio para evaluar el sistema de coagulación de un paciente.

JUSTIFICACIÓN 29

La Protrombina es una glucoproteína con una cadena polipeptída sencilla y un peso molecular aproximado de 70 000, es desdoblada en dos lugares por el factor Xa y el complejo para formar la trombina.

METODOLOGÍA La tromboplastina en presencia de iones de calcio actúa sobre la Protrombina (factor II) transformándola en trombina.


Alcocer


Aguilando


Aguilando

MATERIALES

• Sangre venosa adicionada de citrato de sodio • Tubos de ensayo de 13 X 100 mm • Tubos de ensayo de 10 X 75 mm • Pipetas Pasteur con bulbo • Pipetas serológicas de 1 ml • Baño María a 37 °C • Cronómetro

REACTIVOS

Tromboplastina activada Cloruro de calcio 0.02 m Citrato de sodio


Hematología

SOP

Tiempo de Protrombina (TP)

N° SOP: XII

Pág.: _2_ de _2_

PROCEDIMIENTO 1. Colocar en un tubo de ensaye 100 microlitros del reactivo de TP.

2. Centrifugar la muestra biológica a 2000 rpm durante 5 min.

3. Colocar en el baño María la muestra biológica y el reactivo a 37 °C

30

4. Cuando la muestra biológica y el reactivo estén a 37 °C, se le agregan 200 microlitros del plasma citratado al tubo que contiene los 100 microlitros del reactivo.

5. Se deja reposar y se saca aproximadamente a los 8 seg. Y se pone a

contraluz para apreciar el coagulo.


Alcocer


Aguilando


Aguilando

OBSERVACIÓN El valor promedio en coagular la muestra es de 13 seg. y se observa una especie de gelatina blanquecina.

En la obtención del resultado se puede notar que la muestra excedió el valor promedio.

. RESULTADO: 17. 53 segundos

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Tiempo parcial de tromboplastina (TPT)

N° SOP: XIII

Pág.: _1_ de _3_

OBJETIVO

Determinar el tiempo que le toma a la sangre coagularse. Establecer si existen problemas de sangrado o de coagulación.

JUSTIFICACIÓN 31

TPT: (Tiempo de tromboplastina parcial activado): Es un examen de sangre que examina el tiempo que le toma a la sangre coagularse y puede ayudar a establecer si una persona tiene problemas de sangrado o coagulación.

La coagulación de la sangre requiere plaquetas (también denominadas "trombocitos") y ciertas proteínas llamadas "factores de coagulación". Las plaquetas son células con forma de óvalo que se producen en la médula ósea. La mayoría de los factores de coagulación se generan en el hígado.


Alcocer


Aguilando


Aguilando

Cuando los vasos sanguíneos se lesionan, las plaquetas son las primeras en llegar al área de la lesión para sellar la pérdida y reducir o detener temporariamente el sangrado. Pero para que el coágulo sea firme y estable, es necesario que intervengan los factores de coagulación.

Los doce factores de coagulación del organismo se enumeran con números romanos (la tromboplastina es el factor III). Estos factores actúan juntos en una secuencia especializada, casi como las piezas de un rompecabezas. El coágulo se forma al colocarse la última pieza. Pero si falta una pieza, o ésta es defectuosa, el coágulo no puede formarse.

Si el proceso de coagulación lleva mucho tiempo, significa que existe un problema con uno de los factores de coagulación o con varios. Esto puede ser una señal de lo siguiente:

• una falta, una deficiencia o un defecto de uno o varios factores • una enfermedad hepática (ya que la mayoría de los factores de coagulación

se generan en el hígado) • tratamiento con heparina, un medicamento anticoagulante

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP


N° SOP: XIII

Pág.: _2_ de _3_

METODOLOGÍA

La sangre se extrae de una vena, usualmente de la parte interior del codo o del dorso de la mano. El sitio de punción se limpia con un antiséptico y luego se coloca una banda elástica alrededor del antebrazo con el fin de ejercer presión y restringir el flujo sanguíneo a través de la vena, lo cual hace que las venas bajo la 32 banda elástica se llenen de sangre.

Inmediatamente después se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre en un frasco hermético o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira la banda para restablecer la circulación y, una vez que se ha recogido la sangre, se retira la aguja y se cubre el sitio de punción para detener cualquier sangrado.

En los bebés o niños pequeños, el área se limpia con un antiséptico y se punza con una aguja o lanceta para luego recoger la sangre en una pipeta o tubo de ensayo, en una lámina de vidrio, sobre una tira de examen o en un recipiente pequeño. Finalmente, se puede aplicar un algodón o un vendaje en el sitio de la punción si el sangrado persiste.


Alcocer


Aguilando


Aguilando

La sangre se recoge en un tubo que contiene citrato sódico al 3.8 % (0,129 mol/L) o al 3.2 % (0,109 mol/L), que secuestra los iones calcio y detiene la coagulación. El tubo es centrifugado a 3500 rpm durante 10 minutos y el plasma obtenido se separa de inmediato para su análisis, ya que de lo contrario los factores de coagulación resultan dañados y la prueba inválida. Para activar la vía intrínseca, el plasma sanguíneo se mezcla con un fosfolípido, un activador (como silicato, celite, caolín, ácido elágico, polifenol) y calcio (para revertir el efecto anticoagulante del citrato). Entonces se mide el tiempo hasta que se forma un coágulo.

Este test se denomina "parcial" debido a la ausencia de factor tisular en la mezcla reactiva.


• Muestra sanguínea en tubos morados. Reactivo TPT • El baño maría. CaCl2 • Centrifuga. • Pipeta 1mil/10.

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP


N° SOP: XIII

Pág.: _3_ de _3_

PROCEDIMIENTO

1.-Realizar la punción sanguínea con el Vacutainer para obtener la muestra de sangre

2.- Introducir la muestra en la centrífuga a 3500 RPM por 5 minutos para obtener el plasma sanguíneo 33

3.-Separar 100 Ml (microlitros) de plasma con ayuda de la pipeta y depositar en un tubo de ensaye

4.- Colocar 100 Ml de reactivo de TPT en el mismo tubo

5.- Meter el tubo de ensaye a incubar en el baño maria durante 3 minutos

6.- Al sacarlo inmediatamente agregar 100 Ml de cloruro de calcio y medir el tiempo en que se forma el coagulo de fibrina.

OBSERVACIÓN:

El valor promedio para la formación del coagulo es de 35 segundos


Alcocer


Aguilando


Aguilando

En la obtención de los resultados se puede notar que el tiempo excedió el valor promedio. Cuando se presenta un valor muy alejado de los valores de referencia se puede repetir 2 veces más el procedimiento, si los tres resultados son muy diferentes se saca el promedio de los 3 y ese será el resultado. Con esta muestra no se formo el coagulo, lo que podemos atribuirlo a que no se realizo de manera correcta la práctica.

RESULTADO: 50.80 segundos


Hematología

SOP

Retracción de coagulo

N° SOP: XIV

Pág.: _1_ de _2_

OBJETIVO

Realizar una toma de muestra para poder determinar la retracción de coagulo

en cuanto al proceso plaquetario en un determinado tiempo.

JUSTIFICACIÓN 34

Esta prueba constituye la medición burda que se utiliza para confirmar algún

problema plaquetario, como trombocitopenia. Únicamente se deja coagular la

sangre en un tubo de ensaye sin anticoagulante yse coloca en un baño María a 37

C para observar hasta que se efectué la retracción del coágulo.


Alcocer


Aguilando


Aguilando

METODOLOGÍA

Esta técnica se basa en el hecho de que

la sangre total que coagula normalmente

se retare de las paredes de su

recipiente, con lo que se separa el suero

transparente y el coágulo. Las plaquetas

son muy importantes en el mecanismo

de la retracción del coágulo, así que esta

reacción se altera cuando las plaquetas disminuyen o funcionan de manera

anormal.

Además, esta reacción también depende del contenido de fibrinógeno del plasma,

de la relación entre el volumen plasmático y eritrocitos y de la actividad de un

principio acelerador de la retracción del coágulo


Hematología

SOP

Retracción de coagulo

N° SOP: XIV

Pág.: _2_ de _2_

MATERIALES

• Tubo con tapa roja • Camiseta para vacutainer • Vacutainer 35 • Liga • Baño maría • Cronometro • Centrifuga

PROCEDIMIENTO

1. Se realiza la toma de muestra con tubo de tapa roja.


Alcocer


Aguilando


Aguilando

2. Se llevó a la centrifuga y se llevó con la finalidad de separar el contenido

eritrocitario del suero a 3500 rpm x 5 min.

3. Colocar el cronometro para esperar y observar el tiempo de que se

introduce la muestra al baño maría.

4. Luego se saca y se mete a baño maría estando a una temperatura de 37°C

y esperar la formación de retracción de coagulo.

OBSERVACIÓN

El tiempo en que se coagulo el suero de la sangre tomo un color como blanco opaco pero es debido por la red de fibrina formada, y su consistencia se puso más firne.

RESULTADO: 8 minutos, 37 segundos.

EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Conteo de plaquetas

N° SOP: XV

Pág.: _1_ de _3_

OBJETIVO:

El alumno realizara el montaje y conteo plaquetario.

JUSTIFICACIÓN:

Las plaquetas circulan en el organismo como discos citoplasmáticos en una 36

concentración de 250,000/mm3, tienen una vida promedio de 9.5 días. Poseen dos

funciones importantes: estas toman parte importante en el mecanismo de la coagulación,

son esenciales en la retracción del coagulo y se encargan de mantener la integridad de

las paredes de los vasos sanguíneos,

METODOLOGÍA:

En el recuento directo de las plaquetas mediante la

cámara de Neubauer, se mezcla la sangre en la pipeta

de Thoma con un diluyente que cause la hemólisis de

los eritrocitos. Se llena la cámara de Neubauer con


Alcocer


Aguilando


Aguilando

dicha mezcla y se recuentan las plaquetas en la cuadrícula central, de preferencia

con microscopio de contraste de fases y con el objetivo de 40X.

MATERIALES:

• Tubos de ensaye de 13x 100mm Pipeta de Thomas para globulos rojos.

• Caja de Petri.

• Gasa,

• Gradilla.

• Cámara de Neubauer, EXPERIENCIA DE

APRENDIZAJE

Hematología

SOP

Conteo de plaquetas

N° SOP: XV

Pág.: _2_ de _3_

REACTIVOS;

Colorante de azul de cresil brillante

Anticoagulante EDTA.

Nota: esta determinación debe hacerse en forma rápida para evitar que las 37

plaquetas se aglomeren.

PROCEDIMIENTO:

1. Se realiza la asepsia en la región en la que se realizara la punción.

2. Se obtiene la muestra, se deposita en un tubo (sangre venosa), cargar la

pipeta (sangre capilar).

3. Enjuagar la pipeta con el líquido diluyente hasta la marca de 1.

4. Llenar con la muestra de sangre hasta la marca 1.1.

5. Diluir con el líquido hasta la marca 101 (dilución 1:100).

6. Mezclar el diluyente y la sangre por agitación durante 3 a 5 minutos.

7. Descartar las primeras gotas- 8. Cargar la cámara cuenta glóbulos,

9. Dejar reposar durante 15 minutos en una caja de Petri con papel filtro

humedecido.


Alcocer


Aguilando


Aguilando

10.La cuenta se hace con el objetivo de 40 y con ocular de 10x.

11.En la cámara de plaquetas aparecen como cuerpos retractiles ovales o

alongados con un tamaño de 1 a 5 micras.

12.Debe trabajarse con una buena iluminación en el microscopio para evitar

confundir las plaquetas con basuras, levaduras o colorante precipitado.

13.Contar todo el cuadro central (para eritrocitos) que tiene una superficie de

1mm cuadrado.


Hematología

SOP

Conteo de plaquetas

N° SOP:XV

Pág.: _3_ de _3_

OBSERVACIÓN:

El líquido diluyente de las plaquetas está compuesto por:

• Citrato de sodio 3.80 g 38

• Formol al 40% 0.20ml

• Azul de cresil brillante 0.10g

• Agua destilada c.b.p. 100.00ml

Mantener en refrigeración, filtrar antes de usar.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADO:

N° de plaquetas= N° de células x 10 x100.

N° de plaquetas= N° de células contadas x 1000.

RESULTADO:

N° de plaquetas= 404 x 10x 100= 404,000/mm³


Alcocer


Aguilando


Aguilando

Cuadrante 1 2 3 4 5

N° de plaquetas

128 86 114 42 34

VALORES DE REFERENCIA:

150,000- 450,000/mm


Alcocer


Aguilando


Aguilando

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