UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA UNIDAD XOCHIMILCO

DIVISIN DE CIENCIAS BIOLGICAS Y DE LA

SALUD MDULO:

EVALUACIN DE MATERIAS PRIMAS PARA LA

PRODUCCIN DE MEDICAMENTOS INVESTIGACIN:

VALIDACIN DEL CIDO ASCRBICO POR EL

MTODO REDOX AUTORES: ANTUNEZ SALGADO ROSALID CORNEJO GARCA BRENDA GUERRERO BARRERA ANGELICA DANAE PADILLA FLORES INGRID RUZ SERRANO ORLANDO GUSTAVO SANTIAGO SANTANDER GEMIMA JOANA

DOCENTES: DRA. MARCELA HURTADO Y DE LA PEA M. en C. MARA MERCEDES PALAO RINCON

GRUPO: TRIMESTRE: 15-I

MXICO D. F. MARZO DE 2015

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NDICE

Contenido

INTRODUCCIN .................................................................................................... 3

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .................................................................... 4

OBJETIVOS ............................................................................................................ 5

MARCO TERICO ................................................................................................. 6

MTODOS ANALTICOS ....................................................................................................................... 6 Definicin.................................................................................................................. 6

Validacin de mtodo analtico ............................................................................... 6

Clasificacin de los mtodos analticos ................................................................. 6

Parmetros de desempeo ..................................................................................... 7

Determinaciones, metodologa y criterios de aceptacin ..................................... 8

Especificaciones establecidas del principio activo de un frmaco ...................... 9 MTODOS DE ANLISIS .................................................................................................................... 12

Espectroscopia ultravioleta-visible (UV-Vis) ........................................................ 12

Valoracin acido-base del cido ascrbico ......................................................... 16

Mtodo de Tillmans ................................................................................................ 18

Mtodo colorimtrico de Roe ................................................................................ 18

Valoracin directa 2,6-diclofenol indol ................................................................. 18 CIDO ASCRBICO .................................................................................................................... 19

Definicin................................................................................................................ 19

Antecedentes ......................................................................................................... 19

Caractersticas generales ...................................................................................... 19

Espectros de RMN ................................................................................................. 20

Fisiologa ................................................................................................................ 22

Formas de presentacin y su relacin con la actividad vitamina C: .................. 22

Deficiencia .............................................................................................................. 23

Uso teraputico ...................................................................................................... 23

Toxicidad ................................................................................................................ 23

Solubilidad .............................................................................................................. 23

Biodisponibilidad del cido ascrbico en los alimentos .................................... 23

Mecanismo de accin ............................................................................................ 25

Interacciones .......................................................................................................... 26

Dosis recomendada ............................................................................................... 26

Contraindicaciones ................................................................................................ 28

Reacciones adversas ............................................................................................. 29

ANEXOS ............................................................................................................... 30

GLOSARIO ........................................................................................................... 31

BIBLIOGRAFA .................................................................................................... 33

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INTRODUCCIN

Un mtodo analtico es la descripcin de la secuencia de actividades, recursos materiales y parmetros que se deben cumplir, para llevar a cabo el anlisis de un componente especifico (analito) de una muestra. La validacin es el proceso por el cual se demuestra, por estudio de laboratorio, que la capacidad del mtodo satisface los requisitos para la aplicacin analtica deseada, esta actividad se justifica por los siguientes aspectos:

Moral y tica

Aseguramiento de calidad

Economa

regulatoria

La validacin de los mtodos analticos se fundamenta en la determinacin de diversos parmetros, que se aplican de acuerdo con la categora a la que pertenezcan (et. al. 1991). Los parmetros de validacin que se deben considerar varan segn los requisitos legales exigidos por distintas organizaciones (et. al. 1991). Para este mtodo debe evaluarse la linealidad, la exactitud (repetitividad) y precisin, (reproducibilidad).

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PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Para el desarrollo qumico-farmacutico de un nuevo medicamento es necesaria la utilizacin de un mtodo analtico que nos permita cuantificar el producto mayoritario en forma de materia prima o como ingrediente activo de una formulacin. Para asegurar la confiabilidad, los mtodos analticos se someten a un proceso de validacin. Estos mtodos se fundamentan en la determinacin de diversos parmetros que se aplican de acuerdo a la categora a la que pertenezcan. La validacin es un requisito muy importante que est establecido por rganos regulatorios y por comisiones de Farmacopeas (et. al. 1991). En estos mtodos la exactitud y la precisin son criterios imprescindibles debido a que estos estn asociados a mrgenes de error que no se pueden evitar, por ello es necesario realizar la validacin de las materias primas bajo normas establecidas por la farmacopea. La finalidad del presente trabajo de investigacin es realizar la validacin del cido ascrbico por el mtodo REDOX (Iodomtrico) y as establecer ciertos parmetros en relacin a la confiabilidad del mtodo y la tcnica empleada en la farmacopea.

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OBJETIVOS

OBJETIVO GENRAL:

Validar el cido ascrbico mediante el mtodo analtico REDOX

OBJETIVO ESPECIFICO:

Aplicar los diferentes aspectos tericos y metodolgicos del anlisis cualitativo y

cuantitativo, para determinar la calidad del cido ascrbico, el cual es utilizado

para la elaboracin de productos farmacuticos.

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MARCO TERICO

Mtodos analticos

Definicin Un mtodo analtico es aquel mtodo de investigacin que consiste en la desmembracin de un todo, descomponindolo en sus partes o elementos para observar las causas, la naturaleza y los efectos. Los mtodos analticos se realizan para asegurar la confiabilidad de los productos qumicos-farmacuticos.

Validacin de mtodo analtico La validacin es una especificacin que se sobreentiende cuando se est

desarrollando cualquier procedimiento farmacutico, ya sea de anlisis o de

produccin. En la cual existen parmetros bsicos a asegurar la calibracin de los

equipos y el mantenimiento del proceso (Castillo et. al, 1997). En general se

refiere al Proceso por el cual se demuestra, con estudios de laboratorio, la

capacidad del mtodo y la satisfaccin de requisitos para la aplicacin analtica

deseada. (CNQFBs, 2015) El concepto de validacin, en concordancia con la fabricacin de medicamentos, surgi cuando la FDA (Food and Drug Administration) revis las normas relativas al control de la fabricacin de los productos farmacuticos. Estas normas son conocidas como las GMP2 (Good Manufacturing Practices) o cGMP3 (current Good Manufacturing Practices). En 1978, la palabra validacin apareci por vez primera en algunas secciones de las GMP. Sin embargo, en el captulo de definiciones, el trmino no apareca. Ms tarde en un documento interno de la FDA se defina validacin de forma sencilla: un proceso de fabricacin validado es uno que ha sido comprobado que hace lo se propona o intentaba hacer. (Garca, 2001).

Clasificacin de los mtodos analticos Los mtodos se clasifican bajo los siguientes criterios:

En funcin de su estado regulatorio

a) Mtodos farmacopeicos

b) Mtodos no farmacopeicos

En funcin de su aplicacin (NOM-059-SSA1 y NOM-073-SSA1)

a) Mtodos para producto a granel

b) Mtodos para producto terminado

c) Mtodos para muestra primaria

d) Mtodos indicadores de estabilidad

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En funcin de la naturaleza analtica

a) Mtodos fsico-qumicos (cuando la respuesta es de carcter fsico

(absorcin de luz, emisin de luz, voltaje, etc.) o qumico (consumo

de iones- OH, consumo de acomplejante, et.))

b) Mtodos biolgicos (cuando la respuesta es de carcter biolgico

(crecimiento de microorganismos, proteccin, muerte, etc.))

En funcin de su propsito analtico

a) Mtodo para cuantificar el analito (contenido o potencia)

b) Mtodos para establecer la presencia del analito a un limite

c) Mtodo para identificar el analito

Esta clasificacin se utiliza para establecer los parmetros de desempeo a estudiar en la validacin de mtodo analtico. Cualquier mtodo analtico puede estar constituido por tcnicas de separacin, extraccin, etc., y por tcnicas de medicin (espectrofotometra, volumetra, colorimetra, potenciometra, etc.,) que permiten medir la respuesta del analito en la muestra. (A esta tcnica se le denomina tcnica de medicin.) (CNQFBs,2015).

En funcin de la naturaleza del sistema de medicin

a) Mtodos en los cuales el instrumento de medicin de la respuesta

analtica, permite medir una sea de ruido (cromatgrafo de lquidos

y de gases, espectrofotmetros, etc.)

b) Mtodos en los cuales el instrumento de medicin no permite medir

una seal de ruido (buretas, medidor de halos, potencimetros, etc.)

(CNQFBs,2015).

Parmetros de desempeo

Tabla 1.- Parmetros de desempeo a estudiar (en funcin de la aplicacin de un mtodo) (CNQFBs,2015).

Prueba de impurezas

Parmetro de desempeo Contenido/potencia/valoracin

Contenido/valoracin

Limite identificacin

Precisin /adecuabilidad del sistema

Si Si Si *

Linealidad del sistema Si Si no No

Exactitud y repetibilidad Si Si No No

Linealidad del mtodo Si Si No No

Precisin del mtodo o precisin intermedia

Si Si No No

*Puede ser requerido dependiendo de la naturaleza del mtodo.

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Determinaciones, metodologa y criterios de aceptacin Precisin del sistema: Metodologa: preparar por lo menos un sextuplicado de soluciones a a concentracin del analito que represente la concentracin de la solucin de referencia utilizada o en ciertos casos, la concentracin represente el 100% de la muestra procesada para su medicin; preparadas por dilucin o por pesadas independientes. Medir la respuesta analtica bajo las mismas condiciones. Calcular s y CV de la respuesta analtica (CNQFBs,2015). Criterios de la aceptacin: CV 1.5% para mtodos fsicos-qumicos, CV 3% para mtodos biolgicos, valores superiores u otro criterio de aceptacin deben ser justificados (CNQFBs,2015). Linealidad del problema: Metodologa: prepara por lo menos por triplicado 5 niveles de concentracin de la solucin de referencia ya sea por disolucin o por pesadas independientes la concentracin central debe ser igual a la que se prepara la solucin de referencia en el mtodo o la que represente al 100% en la muestra preparada para su medicin. Medir la respuesta analitica bajo las mismas condiciones de medicin, reportar la relacin concentracin vs respuesta analita. Calcular b1, b0, r

2, IC (1). El intervalo est en funcin del propsito del metodo y se expresa como % de la concentracin de la solucin de referencia o en funcin del contenido del analito en la muestra. Para contenido/potencia/valoracin se sugiere un mnimo de 20% Para contenido/valoracin de impurezas desde un nivel apropiado hasta un 20% por arriba de la especificacin. Para mtodos indicadores de estabilidad desde un nivel apropiado hasta un 120%. Es crtico que el intervalo no excluya valores de concentracin que potencialmente puedan dar lugar al contenido del analito en la muestra. Criterios de aceptacin: r2 0.98, IC (1), no debe incluir el cero (CNQFBs,2015). Exactitud y Repetibilidad del mtodo: Metodologa:

a) Conociendo los componentes de la muestra se preparar el placebo

analtico. A la cantidad de placebo analito equivalente a una muestra

analtica por sextuplicado, se adicionara la cantidad de analito

correspondiente al 100% de este en la muestra. Seleccionar dos niveles

superior e inferior de la cantidad por sextuplicado, se adicionara la cantidad

de analito correspondiente al 100% de este en la muestra. El mismo

analista analizara los placebos adicionados utilizando de referencia la

sustancia empleada en la adicin al placebo analtico en las mismas

condiciones. Determinar la cantidad recuperada del analito.

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b) Si no se conocen los componentes de la muestra, con el mtodo se

determina el contenido del analito y se preparan 6 muestras adicionadas

del analito hasta completar el 100% de ste en la muestra. Las muestras

adicionadas se analizan usando como referencia la sustancia empleada en

la adicin de la muestra.

Determinar la cantidad recuperada del analito: La adicin del analito debe ser en las primeras etapas del mtodo. Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo analtico, al obtener el cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada expresada en porcentaje. Calcular , S, CV e IC() del porcentaje de recobro. Criterios de aceptacin: IC () debe incluir el 100% o que el promedio aritmtico del % de recobro se incluya en el intervalo:

98-102% mtodo cromatogrfico

98-102% mtodo volumtrico

97-103% mtodo qumico o espectrofotomtrico

95-105% mtodo microbiolgico

CV del porcentaje de recobro:

No mayor de 2% en mtodo cromatogrfico

No mayor de 2% en mtodo volumtrico

No mayor de 3% en mtodo qumico o espectrofotomtrico

No mayor de 5% en mtodo microbiolgico

No mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la especificacin del

analito en la muestra (CNQFBs,2015).

El mtodo no oficial deber tener una precisin igual a mejor que el mtodo oficial, o que su precisin sea aceptable para la aplicacin analtica. Inicialmente se debe establecer el mtodo de referencia y el mtodo a comparar. Metodologa.-Tanto con el mtodo de referencia como el mtodo a comparar, dos analistas en dos das deben analizar por triplicado muestras independientes (pesadas o alcuotas) de un lote homogneo de producto, cuyo nivel de analito est incluido dentro de la especificacin. Reportar el contenido/potencia/valoracin del analito de todas las muestras en % para ambos mtodos. Criterios de aceptacin: El intervalo de confianza unilateral inferior, para la razn de varianzas del mtodo a comparar respecto del mtodo de referencia, no debe exceder el valor de 1 (cualquier otro criterio de aceptacin deber justificarse).

Especificaciones establecidas del principio activo de un frmaco La materia prima para elaborar la forma farmacutica tiene que tener un grado de

pureza la cual tiene el riesgo de contaminarse estando en granel introducidas en la

materia prima, intermedio o frmaco durante la produccin, muestreo, empaque,

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reempaque, almacenamiento o transporte, teniendo que los contaminantes son las

impurezas indeseables de naturaleza qumica o microbiolgica, o materia extraa,

se realizan las siguientes pruebas (DOF 2013, NOM-001-SSA1-93 y NOM-059-

SSA1):

Identidad; Confirmacin de la presencia del frmaco, como tal o incluido

en un medicamento, por sus

Calidad; la aptitud de un frmaco o medicamento para su uso previsto.

Potencia; actividad teraputica del producto farmacutico tal como es

indicada por pruebas apropiadas de laboratorio o por datos clnicos

controlados y desarrollados en forma adecuada.

Purezas; Grado en el que una entidad qumica o biolgica est presente en una

substancia.

Documentacin: Las actividades de la validacin de un mtodo analtico deben

ser sustentadas por los siguientes documentos:

a) Protocolo, cuyo contenido es:

1. Titulo

2. Propsito u Objetivo

3. Responsabilidades

4. Plan de prueba describiendo los parmetros de desempeo

que permitan verificar la aplicacin analtica deseada

5. Criterios de aceptacin para cada parmetro

6. Formato de registro de resultados

b) Reporte, cuyo contenido es: 7. Ttulo

8. Resultados

9. Anlisis de resultados

10. Confrontacin contra los criterios de aceptacin

11. Conclusin

Es crtico documentar los registros analticos; dicha documentacin deber estar ordenada y disponible, en responsabilidad del rea de calidad (CNQFBs,2015). Los ensayos o mediciones realizadas sern con el fin de poder realizar las siguientes pruebas de parmetros de validacin:

Selectividad

Linealidad

Sensibilidad

Limites

Exactitud

Precisin

Robustez

Aplicabilidad

El analista o responsable de la validacin deber realizar los clculos matemticos con los resultados obtenidos de cada prueba, comparativos y/o estadsticos correspondientes a cada ensayo para lo cual podr utilizar para ese fin un software estadstico, calculadora o una planilla de clculo.

ESTRATEGIA METODOLGICA

Mtodos de anlisis

La validacin de un mtodo analtico es un paso fundamental para asegurar que los resultados entregados por dicho mtodo son confiables. Cuando se realiza la validacin de un mtodo por parte del laboratorio, lo que se busca es determinar con fundamento estadstico que el mtodo es adecuado para los fines previstos. Los productos qumicos-farmacuticos se someten a un proceso de validacin. (Castillo et. al, 1997). Algunos mtodos utilizados en la validacin del cido ascrbico son los siguientes:

Espectroscopia ultravioleta-visible (UV-Vis) El uso de la espectroscopa Ultravioleta-Visible (UV-Vis), para la determinacin del cido Ascrbico, es ampliamente utilizado en investigaciones con alimentos, pues este cido presenta transiciones electrnicas fuertes en la regin UV, facilitando su identificacin y cuantificacin por esta tcnica. (M. Gutirrez et. al. 2007).

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Figura 1. Reactivos mtodo validacin cido ascrbico, Espectroscopia ultravioleta-visible (UV-Vis), (INEN 0384,1979).

REACTIVOS

Solucin de hidracina. Disolver 2 g de 2,4 dinitrofenilhidracina en 100 cm3 de solucin 9 N de cidosulfrico.

Carbn activado. Exento de hierro y secado a 110C durante 12 h.

Solucin de cidos metafosfrico y actico. Debe contener 5% (m/v) de cido metafosfrico y 10% (m/v) de cido actico.

Solucin al 85% de cido sulfrico.

Solucin al 10% da tiorea. Disolver 10 g de tiorea en alcohol tnico de 50GL y llevar a 100 cm3 con el alcohol indicado.

Solucin patrn de cido dehidro-ascrbico. Disolver 25 mg de cido ascrbico en 25 cm3 de solucin al 5% (m/v) de cido metafosfrico. Aadir dos gotas de agua de bromo, agitar hasta coloracin amarilla y transferir a un tubo grande de ensayo. Airear agitando suavemente, hasta decoloracin.

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Figura 1.1 Calibracin mtodo validacin cido ascrbico, Espectroscopia ultravioleta-visible (UV-Vis), (INEN 0384,1979).

CURVA DE CALIBRACIN

Preparar, en los vasos de precipitacin de 50 cm3, soluciones que contengan los mg de cido dehidro-ascrbico, diluyendo la solucin patrn mediante adicin de la solucin de cidos metafosfrico y actico.

Aadir en cada recipiente una gota de solucin al 10% de tiorea y 1 cm3 de la solucin de hidracina.

Colocar los vasos de precipitacin en el bao de agua a 37 1C durante tres horas; luego, colocarlos en bao de agua fra y hielo, adicionando en cada uno 5 cm3 de solucin al 85% de cido sulfrico.

Determinar la absorbancia de las soluciones usando el espectrofotmetro. Se sugiere trabajar a 540 nm.

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Figura 1.2 Procedimiento mtodo validacin cido ascrbico, Espectroscopia ultravioleta-visible (UV-Vis), (INEN 0384,1979).

PROCEDIMIENTO

Homogeneizar convenientemente la muestra. Pesar, con aproximacin al 0,1 mg, 10 g de muestra y colocar en un matraz volumtrico de 100 cm3.

Aadir 70 cm3 de solucin de cidos metafosfrico y actico; agitar varias veces y diluir a volumen.

Filtrar y recibir el lquido filtrado en un matraz volumtrico de 100 cm3. Transferir 50 cm3 del filtrado a un matraz Erlenmeyer de 125 cm3. Agregar 1 g de carbn activado, agitar y filtrar. Repetir esta operacin hasta que el filtrado aparezca completamente decolorado.

Transferir porciones de 5 cm3 del filtrado a dos tubos de ensayo grandes y adicionar en cada uno de ellos una gota de solucin al 10% de tiorea. En el tubo A se realiza el ensayo de referencia y en el tubo B se efecta la reaccin de coloracin.

Aadir en el tubo B 1 cm3 de solucin de hidracina y colocarlo en el bao de agua a 37 1C durante tres horas.

Luego, colocar los dos tubos en un bao de agua fra y hielo y aadir en ambos 5 cm3 de solucin al 85% de cido sulfrico, efectuando esta adicin en un tiempo no menor de un minuto.

Agitar vigorosamente los dos tubos mientras permanecen en el bao por un tiempo de 30 min.

Calibrar el espectrofotmetro en absorbancia cero con agua destilada, a la longitud de onda utilizada en 5.5.

Determinar la absorbancia de las soluciones contenidas en los dos tubos. Restar el valor de la absorbancia determinado para el contenido del tubo A del valor correspondiente al tubo B, y, utilizando la curva de calibracin, establecer la concentracin de cido dehidroascrbico en la solucin de muestra.

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Tabla 2. Colores de la radiacin visible. (Frederick, et. al, 2005).

(nm) color complemento 400-465 violeta verde amarillo

465-482 azul Amarillo

482-487 azul verdoso Anaranjado

487-493 azul verde rojo anaranjado

493-498 verde azulado rojo

498-530 verde rojo prpura

530-559 verde amarillento prpura rojizo

559-571 amarillo verde prpura

571-576 amarillo verdoso violeta

576-580 amarillo azul

580-587 anaranjado amarillento azul

587-597 anaranjado azul verdoso

597-617 anaranjado rojizo azul verde

617-780 rojo azul verde

Absorcin cido ascrbico 540-570nm. (Cea, et. al.)

Valoracin acido-base del cido ascrbico Cuando se habla de una reaccin acido base se habla del tipo de cambio que ocurre cuando se mezclan una solucin acida y una solucin bsica. La titulacin acido-base es una tcnica que se usa con frecuencia en el laboratorio, el procedimiento general consiste en determinar la cantidad de cido por la adicin de una cantidad medida y equivalente de una base o viceversa. (Canales, et al, 1999). El cido ascrbico tiene una constante cida de disociacin grande y al neutralizar parcialmente un protn cido de una disolucin acuosa de cido ascrbico (AH2 con una base fuerte, estn presentes en la disolucin AH2 y AH - , formndose una disolucin reguladora AH2/AH - . Por tanto, si a una determinada cantidad de cido ascrbico en disolucin, se le aaden volmenes conocidos, para su total neutralizacin, se determina la cantidad presente de este acido. (Rodrguez, et. al, 2009). (Ver figura 2,2.1).

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Figura 2. Materiales y reactivos mtodo cido-base validacin cido ascrbico, (NMX-F-229-1972).

MATERIALES Y REACTIVOS

Agua destilada.

Solucin al 10% de cido metafosfrico. Se pesan de 60 a 70 g barras de cido metafosfrico (HPO3), se disuelven en 500 ml de agua y se filtra la solucin en papel plisado.

cido metafosfrico al 2%. Se diluye con agua 1:5 en volumen, la solucin al 10%.

Solucin acuosa de cido actico al 10%. de sal sdica del 2.6 diclorofenol indofenol.

Solucin de cido metafosfrico

Solucin de cido metafosfrico-actico. Se disuelven agitando 15 g de barras de cido metafosfrico glacial recientemente pulverizado, en 40 ml de cido actico y 200 ml de agua; se diluyen hasta cerca de 500 ml y se filtra por papel filtro plegado en un frasco con tapn esmerilado. El cido metafosfrico (HPO3) se transforma en cido fosfrico (H3PO4).

Determinacin del titulante de la solucin de la sal sdica del 2.6 diclorofenol-indofenol.

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Figura. 2.1. Mtodo cido-base valoracin de cido ascrbico, (NMX-F-229-1972).

Mtodo de Tillmans El mtodo de Tillmans se basa en valorar la vitamina C al estado de cido ascrbico, eliminando previamente el extracto de cido (tricloroacetico, oxlico o metafosfrico), con solucin de acetato de mercurio al 20 por 100 al que junto con eliminar sustancias colorantes y reductoras, lo transforma en cido dehidroascrbico. Este acido se reduce luego a ascrbico, mediante una corriente de hidrogeno sulfurado, y una vez eliminado este procede a la titulacin con el reactivo de Tillmans, cuyo ttulo ha sido determinado previamente por medio de una solucin conocida de cido ascrbico puro. (Cea, et al, 1981).

Mtodo colorimtrico de Roe Se basa en valorar el cido dehidroascrbico, previa transformacin del cido

ascrbico por medio del carbn Nori A activado. El cido resultante copula con la

2-4 dinitrofenil-hidracina, dando un precipitado de color amarillo anaranjado que es

proporcional al contenido de vitamina y que se disuelve en cido sulfrico, virando

a este color. (Cea, et. al, 1981).

Valoracin directa 2,6-diclofenol indol Dentro de los mtodos oficiales descritos para el anlisis de la vitamina C en tabletas, uno de los ms empleados es la valoracin directa con 2,6-diclorofenol indofenol por resultar simple y rpido.3 El mtodo es vlido si se conoce que en la composicin de la muestra no existen sustancias interferentes y la concentracin de cido dehidroascrbico es inapreciable, por tanto, se puede aplicar a una

VALORACION AA.

Se pesan exactamente 50 mg de cido ascrbico grado farmacutico y se pasan a un matrazaforado de 100 ml. Se disuelven con la solucin de cido metafosfrico al 2% y se afora con el mismo cido a 20C.

Se toman con pipeta 10 ml de esta solucin en el Erlenmeyer y se aaden 10 ml de cido actico al 10% ms el agua necesaria pare igualar el volumen de las diferentes determinaciones, y se titula con la solucin de sal sdica del 2,6-diclorofenol-indofenol hasta coloracin rosa persistente por 15 segundos.

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muestra recin preparada, pero no resulta de utilidad en estudios de estabilidad de la vitamina C.(Rodriguez, et. al, 2009)

CIDO ASCRBICO

Definicin El cido ascrbico o vitamina C es una estructura enol-diol en los carbonos 2 y 3, que tiene caractersticas reductoras por sus dos grupos donadores de protones. Es un compuesto muy inestable y se oxida fcilmente a cido dehidroascrbico, es hidrosoluble y termolbil, interviene en muchas reacciones metablicas importantes. La falta de la dieta de cido ascrbico en la especie humana ocasiona la enfermedad carencial denominada escorbuto LEHNINGER) (CEA, et. al. 1981)

Antecedentes La enfermedad del escorbuto fue combatida durante siglos con la introduccin de ctricos en la dieta pero la relacin entre los ctricos (ricos en vitamina C) y la enfermedad (provocada por carencia de vitamina C) no se descubri hasta el siglo XX. La vitamina C fue aislada por primera vez en 1928 por el cientfico hngaro Albert Szent-Gyorgy, que trabajaba en las oxidaciones de los nutrientes y su relacin con la produccin de energa, descubri un factor reductor en las glndulas suprarrenales en forma cristalina, que bautiz con el nombre de cido hexurnico, y determin su frmula emprica C6H8O6. En la misma poca, en 1932 King y Waugh encontraron este mismo cido en el zumo de limn, poco despus en 1933 Hirst y Hawoth determinaron la estructura y sugirieron junto con Szent-Gyrgy el cambio de nombre a cido L-ascrbico por la influencia de sus propiedades antiescorbticas. En 1937 Hawoth y Szent-Gy6rgy obtuvieron el premio Nobel de Medicina por sus trabajos sobre el cido ascrbico. Se llama con el nombre de vitamina C a todos los compuestos que poseen la actividad biolgica del cido ascrbico.

Caractersticas generales El cido ascrbico, C6H8O6 son unos cristales blancos o muy ligeramente amarillentos, en estado seco es estable en el aire. En preparaciones farmacuticas y en muchos productos naturales, la vitamina se oxida por exposicin al aire y a la luz. El cido L-ascrbico (AA) es un compuesto afn a los carbohidratos con propiedades cidas y reductoras debidas al resto 2,3-enodiol es un compuesto muy polar (CEA, et. al. 1981). Posee un relativamente fuerte poder reductor, de colorante a diversas colorantes. Las soluciones acuosas se oxidan rpidamente al aire: la reaccin se exalta en medio alcalino y en presencia de indicios de metales, principalmente hierro y cobre. Debe conservarse en recipientes bien cerrados, protegidos de la luz y de la humedad. A rasgos generales, se utiliza como antioxidante para alimentos, para evitar el enrancimiento de sustancias grasas, el ennegrecimiento de frutos cortados (para uso mdico, se usa en forma de vitamina C).

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Figura 3. Estructura qumica del cido ascrbico

Tabla 3. Propiedades fsicas y qumicas del cido ascrbico

Peso molecular 176.12 g/mol

pKa 4.090.10 Temperatura ctrica 783 K

Densidad 1.694 g/cm3

Punto de ebullicin 553 C

Calor especifico de vaporizacin 0.8443 kJ/g

Punto de inflamabilidad 276 C

Punto de autoignicin 380 C

Formula molecular C6H8O6

Punto de fusin 190 - 192 C

Apariencia Solido blanco o amarillo claro

Solubilidad en agua soluble

Espectros de RMN Figura 4.- Espectro de RMN de protn

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Figura 5.- Espectro de RMN de 13C

Figura 6.- Espectro de absorcion IR

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Figura 7.- Espectro de masas

Fisiologa Las funciones de la vitamina C al parecer reflejan su capacidad redox. Por lo tanto, participa en algunas reacciones de hidroxilacin en las cuales mantiene actividad enzimtica ptima por donacin de electrones.La vitamina tambin incrementa la absorcin de hierro no hem y sirve como un mecanismo importante para inactivar radicales sumamente reactivos en las clulas de los tejidos. Asimismo, retarda la formacin de nitrosaminas en el cuerpo, que son posibles carcingenos. La evidencia acumulada vincula el cido ascrbico a muchos elementos del sistema inmunitario.

Formas de presentacin y su relacin con la actividad vitamina C: La vitamina C puede presentarse en distintas formas:

a) cido L-ascorbico: es el de ms clara actividad antiescorbtica. El aspecto

es el de cristales blancos, con sabor cido, propiedades fuertemente

reductoras, sensibles a la luz y a ciertos metales pesados y solubles en

agua.

b) cido dehidroascrbico: tambin con actividad antiescorbtica. Por

reduccin se transforma en cido ascrbico, se presenta en forma de

cristales blancos, solubles en agua.

c) E acido 2-cetp-Lgulnico: precursor del cido ascrbico. No tiene actividad

antiescorbtica, se presenta en forma de cristales blancos.

Su oxidacin, con prdida de hidrgeno, conduce al cido dihidroascrbico. En presencia de agua se produce la apertura del ciclo conduciendo a cido 2,3-dicetogulnico sin las propiedades biolgicas de la vitamina C.

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Deficiencia Humanos, monos, cobayos y murcilagos frugvoros han perdido la capacidad de sintetizar el cido ascrbico a partir de glucosa (estas especies perdieron la ltima enzima de la serie, oxidasa de L-gulonolactofla). Por tanto, la deficiencia de cido ascrbico en la dieta da lugar, en estas especies, a los sntomas de escorbuto que incluyen lesiones patolgicas de huesos, dientes, encas, piel y vasos sanguneos. Todos stos parecen deberse a despolimerizacin del tejido conectivo y es un problema.

Uso teraputico En la tuberculosis, lcera pptica y otras situaciones de estrs, por ejemplo en una ciruga, hay una necesidad creciente de cido ascrbico. Esta se puede satisfacer mediante 100 a 200 mg por da. La tirosinemia transitoria observada en algunos neonatos se puede tratar con 100 mg por da. Por lo regular, la teraputica del escorbuto comprende 1 a 2 g/da hasta que se logra la saturacin del tejido.

Toxicidad Las concentraciones normales en la dieta carecen de toxicidad. La ingestin alta (ms de 1 g/da) puede causar diarrea y en algunos individuos sensibles favorece la precipitacin de clculos de cistina o de oxalato en las vas urinarias. Con niveles de ingestin ms al-tos de ascorbato debe considerarse la posibilidad de efectos de rebote y de abstinencia. En recin nacidos de madres que durante el embarazo ingirieron gran des cantidades de ascorbato hay un peligro de escorbuto. Tambin se han publicado informes de respuesta falsa en algunas pruebas diagnsticas. En la dosis oral tratada en ratones durante 10 das a 50 mg/Kg.dia induce a una actividad immunoestimulante activando limfocitos para facilitar la produccin de DNA y RNA.

Solubilidad Agua: 333 g/l. Solvente en etanol, 30 de etanol, 50 de etanol absoluto, 100 de glicerina Toxicidad. LD50 cutnea en ratones. 2630-3120 mg/Kg LD50 intravenosa en ratones. 518 mg/Kg . Insoluble en ter, cloroformo, benceno, ter de petrleo, aceites, disolventes de grasas. Las soluciones deben esterilizarse por filtracin.

Biodisponibilidad del cido ascrbico en los alimentos La vitamina C es el trmino genrico para cido L ascrbico y su forma oxidada cido dehidroascrbico, ambos muestran actividad de vitamina C. Las dos formas pueden convertirse con facilidad una en la otra. Las principales fuentes de AA de la dieta son las frutas, hortalizas, zumos y alimentos fortificados (por ej., cereales de desayuno). Se ha observado en sujetos humanos que la biodisponibilidad del AA del brcol, gajos de naranja y zumo de naranja es equivalente a la de las tabletas minerales de la vitamina. La biodisponibilidad del AA del brcol crudo es de un 20% ms baja que la del cocido, lo que puede deberse a una incompleta masticacin y/o digestin. La diferencia relativamente escasa entre la biodisponibilidad del AA del brcol y de otras hortalizas crudas en relacin con sus formas cocidas puede tener escaso

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significado nutricional. Puede concluirse que el AA de la mayora de las frutas y hortalizas es altamente disponible para el hombre. El cido ascrbico es sintetizado por las plantas superiores y todos los animales, con excepcin de los humanos, cobaya (un ave tropical) y un roedor de la india. Al parecer los microorganismos no forman cido ascrbico pero tampoco lo necesitan para su crecimiento, por lo tanto en la naturaleza se encuentra en las frutas y verduras frescas y en algunas glndulas animales (suprarrenales, hipfisis y cuerpo lteo) (CEA, et. al. 1981). Tabla 2.- Contenido de vitamina C de distintas frutas, expresado en mg/100 g de sustancia comestible.

Tabla 4.- Contenido de vitamina C de distintas frutas, expresado en mg/100 g de sustancia comestible

Albaricoque fresco 7

Cereza fresca 10

Ciruela fresca 6

Fresa fresca 60

Limn fresco /jugo) 50

Mandarina fresca (Citrus nobilis) 45

Manzana fresca (Malus pumija) 31

Melocotn fresco 5

Meln fresco 7

Sandia 33

Naranja 50

Pera fresca 4

Fuente: (CEA, et. al. 1981). Propiedades farmacolgicas El cido ascrbico o vitamina C, es una vitamina hidrosoluble presente en frutas y vegetales tales como los ctricos y las verduras frescas. El cido ascrbico es una antioxidante y captador de radicales libres y es considerado en este sentido ms eficaz que la vitamina E o el beta-caroteno. El cido ascrbico es esencial para mantener la integridad del organismo, en especial para la reparacin de los tejidos y la formacin de colgeno. Dado que el hombre no puede sintetizar el cido ascrbico, la carencia del mismo ocasiona una enfermedad carencial, el escorbuto. La vitamina C se usa sobre todo como suplemento nutricional. Tambin se utiliza para el tratamiento de la metahemoglobinemia idioptica y, con la desferoxamina, para tratar la intoxicacin crnica por hierro. El cido ascrbico ha sido utilizado para tratar una gran variedad de dolencias como el catarro comn, las infecciones de las encas, el acn, la depresin entre otras, aunque todas estas indicaciones no han sido suficientemente probadas. Por lo tanto, no se recomienda la vitamina C para ellas.

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Mecanismo de accin El cido ascrbico es necesario para la formacin y la reparacin del colgeno. Es oxidado, de forma reversible a cido dehidroascrbico, estando ambas formas implicadas en las reacciones de xido-reduccin. La vitamina C participa en el metabolismo de la tirosina, carbohidratos, norepinefrina, histamina, fenilalanina y hierro. Otros procesos que requieren del cido ascrbico son la sntesis de lpidos, de protenas y de carnitina; la resistencia a las infecciones; hidroxilacin de la serotonina; mantenimiento de la integridad de los vasos sanguneos y respiracin celular. La vitamina C tambin regula la distribucin y almacenamiento del hierro evitando la oxidacin del tetrahidrofolato. El cido ascrbico potencia el efecto quelante de la desferoxamina durante el tratamiento crnico con este frmaco para el trataminto de una intoxicacin por hierro. Las manifestaciones del escorbuto, que se deben sobre todo a una formacin de colgeno defectuosa, es el resultado de la deficiencia de la hidroxilacin del procolgeno y de la formacin de colgeno en ausencia de la vitamina C. El colgeno sin hidroxilar es inestable y no puede proceder a la reparacin normal de los tejidos. Esto se traduce en una fragilidad caplar con procesos hemorrgicos, retrasos en la cicatrizacin de heridas y anormalidades seas. No se conoce muy el mecanismo antioxidante del cido ascrbico. La vitamina C puede proteger de la oxidacin a las LDLs, aunque el papel que esta propiedad juega en la posible atenuacin de unos procesos arteriosclerticos es objeto de controversias. En efecto, dado que la vitamina C es hidrosoluble es difcil que pueda ser incorporada a las LDLs como ocurre con la vitamina E o el probucol, ambos muy liposolubles. Pudiera ser por la capacidad que tiene la vitamina C de regenerar la capacidad anti-oxidante de la vitamina E. Farmacocintica La vitamina C se absorbe bien en el intestino delgado gracias a un proceso de transporte activo saturable. La eficacia de la absorcin disminuye con el incremento de la ingestin. La vitamina se distribuye en casi todos los tejidos a travs del cuerpo; en el adulto la reserva es de casi 1 500 mg. El exceso de vitamina C no se almacena y los niveles en leucocitos se emplean para estimar las concentraciones en los tejidos. En valores plasmticos menores de 1.4 mg/dL (80 mmol/ L), el cido ascrbico se reabsorbe en el rin; por arriba de estos niveles se excreta el cido ascrbico. Tambin aparecen en la orina gran nmero de metabolitos. La excrecin urinaria de cido ascrbico refleja de manera estrecha la ingestin reciente en la dieta. Cuando la concentracin en plasma es entre 1 y 2 mg/dL (56.8 y 113,6 mol/L) ocurre la saturacin de tejidos; las mujeres muestran concentraciones ms altas que los varones. El hbito de fumar cigarrillos, y tambin algunos tipos de estrs, puede reducir de manera drstica a concentracin plasmtica de ascorbato. Cuando se reduce la ingestin de cido ascrbico luego de suplemento a largo plazo con 250 mg/da o ms, el rin contina excretando cido ascrbico. Esto da como resultado un fenmeno de rebote en el cual el ascorbato del plasma puede descender a concentraciones escorbticas (en especial si la ingestin previa fue de 2 g o ms por da).

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Interacciones El cido ascrbico se utiliza para mejorar las propiedades quelantes de la desferoxamina y aumentar la excrecin de hierro. La administracin concomitante de cido ascrbico y desferoxamina puede, sin embargo, aumentar la toxicidad del hierro y descompensacin cardaca, en particular en los ancianos. La evidencia sugiere que estos efectos tienen lugar cuando se administran dosis de cido ascrbico de 500 mg al da o ms. La administracin de la dosis de cido ascrbico 1-2 horas despus de la desferoxamina es suficiente, por lo general, para evitar esta reaccin En grandes dosis, el cido ascrbico puede bajar el pH urinario causando la reabsorcin tubular de muchos compuestos cidos. Por el contrario, los compuestos de carcter bsico pueden mostrar una reabsorcin reducida. En grandes dosis, el cido ascrbico puede acelerar la excrecin renal de la mexiletina. La absorcin del hierro no-heme (fundamentalmente de las plantas) por el tracto digestivo depende de que el hierro se encuentre en su estado reducido. El cido ascrbico, por sus propiedades antioxidantes mantiene el hierro como hierro ferroso y, por lo tanto aumenta la absorcin de este elemento, aumento que puede llegar a ser del 10% y que ocurre con grandes dosis de vitamina C, de 500 mg o ms. Algunos pacientes pueden beneficiarse de este efecto, recibiendo una dosis de cido ascrbico con el suplemento de hierro en forma de sales ferrosas o de complejos de hierropoliscaridos. Se ha observado que la coadministracin de cido ascrbico en dosis de 2 g reduce substancialmente las AUCs del propranolol, disminuyendo tambin su efecto bradicrdico. Como al mismo tiempo se observ una reduccin en la excrecin de los metabolitos del propranolol se ha postulado que el cido ascrbico reduce la biodisponibilidad del beta-bloqueante. Hasta que se disponga de una mayor informacin, los clnicos debe ser advertidos acerca de esta interaccin. Existen informes que describen que grandes dosis de cido ascrbico (ms de 5 g/da) pueden reducir los efectos anticoagulantes de la warfarina. No obstante, no parecen necesarias intervenciones clnicas a menos que se consuman grandes dosis de cido ascrbico.

Dosis recomendada El cido ascrbico no es sintetizable por el organismo, por lo que se debe ingerir desde los alimentos que lo proporcionan vegetales verdes, frutas ctricas y patatas El Food and Nutrition Board of the National Research Council recomienda en la dieta un suministro entre 35 a 60 mg/da. Linus Pauling, premio Nobel de Qumica en 1954 y premio Nobel de la Paz en 1962, estudi los efectos de la vitamina C como preventivo del resfriado comn y sobre los mecanismos de defensa natural del organismo frente a las enfermedades y concluy que la vitamina C forma parte en la mayora de las reacciones qumicas del organismo por lo que aconsej un suplemento mayor diario de vitamina C (por lo menos 2 g al da). Este punto de vista ha suscitado controversias en muchos cientficos ya que, aunque la vitamina C es muy importante por su carcter antioxidante, no se ha podido demostrar que

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intervenga directamente en la prevencin del catarro, de cualquier forma la vitamina C no es txica en el organismo y se elimina fcilmente.

Tabla 5.- Dosis recomendada para el tratamiento del escorbuto dosis orales o parenterales:

Dosis

Adultos 100250 mg p.os., s.c., i.m. o i.v. 1 o 2 veces al da (Se han llegado a utilizar dosis ms elevadas en el escorbuto, pero sin observarse beneficios adicionales )

Nios 100300 mg p.os., s.c., i.m. o i.v. en dosis divididas Bebs 50100 mg p.os., s.c., i.m. o i.v. en dosis divididas

Tabla 5.1.- Dosis recomendada para el tratamiento de metahemoglobinemia idioptica: dosis orales

Dosis

Adultos No se han establecido las dosis como coadyuvante en el tratamiento de la intoxicacin por hierro en le terapia con desferoxamina, dosis orales.

Nios 100300 mg p.os., s.c., i.m. o i.v. en dosis divididas

Tabla 5.2.- Dosis recomendada para la acidificacin de la orina, dosis orales o parenterales

Dosis

Adultos 412 g p.os., i.v., i.m. o s.c. en tres o cuatro dosis

Nios 500 mg p.os., i.v., i.m. o s.c. cada 6-8 horas

Para el tratamiento de forunculosis crnica recurrente en pacientes con disfuncin de neutrfilos: Dosis orales de 1 g/da de cido ascrbico durante 4 a 6 semanas han mostrado ser eficaces en el tratamiento de episodios mltiples de forunculosis en la que existe disfuncin de los neutrfilos, normalizndose estos en el plazo de un ao. El cido ascrbico no mejora la forunculosis si no hay disfuncin neutrfila.

Tabla 6.-Pacientes especiales

Dosis

Pacientes con disfuncin heptica

No existen directrices especficas para el ajuste de dosis en estos pacientes.

Pacientes con disfuncin renal

No existen directrices especficas para el ajuste de dosis en estos pacientes.

Hemodilisis intermitente No hay directrices especifcas sobre las dosis en la hemodilisis intermitente. Sin embargo, no se recomiendan dosis superiores a los 200 mg/da

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Tabla 7.- necesidades diarias de vitamina C, que se debe aportar con la dieta

Dosis

Mujeres adultas o adolescentes durante el embarazo

8085 mg/da

Mujeres adultas o adolescentes durante la lactancia

115120 mg/da

Varones adultos 90 mg/da

Mujeres adultas 75 mg/da

Adolescentes entre 14 y 18 aos 65 mg/da (hembras); 75 mg/da (varones)

Nios entre 913 aos 45 mg/da Nios entre 48 aos 25 mg/da Nios entre 13 aos 15 mg/da Bebs 4050 mg/da Para prevenir la deficiencia en vitamina C en pacientes bajo nutricin parenteral total

100 mg/da

NOTA: el ascorbato sdico contiene 5 mEq de sodio a tener en cuenta en casos de dietas hiposdica.

Contraindicaciones El cido ascrbico est clasificado en la categora C en lo que se refiere a su toxicidad durante el embarazo. Las concentraciones plasmticas en el cordn umbilical son 2 a 4 veces mayores que las presentes en la sangre materna. No se han documentado problemas bajo una ingesta normal en vitamina C, pero la administracin de grandes dosis durante el embarazo ha provocado escorbuto en el neonato. En efecto, el uso prolongado de dosis altas ocasiona un aumento del metabolismo de la vitamina C, pudindose originar escorbuto cuando la ingesta diaria vuelve a la normalidad. La vitamina C se excreta en la leche materna en concentraciones 2 a 3 veces mayores que las presentes en la sangre de la madre. No se han documentado problemas durante la lactancia bajo una ingesta de vitamina C normal. Sin embargo, dosis elevadas repetidas pueden ocasionar un aumento del metabolismo del cido ascrbico que originen escorbuto cuando la ingesta sea normalizada. Dosis crnicas en exceso de vitamina C aumentan la probabilidad de formacin de clculos renales de oxalato en pacientes con historia de nefrolitiasis, hiperoxaluria u oxalosis. Dosis grandes orales o i.v. de cido ascrbico pueden ocasionar anemia hemoltica en pacientes con deficiencia en G6PD (glucosa-6-fosfato deshidrogenasa). Grandes dosis de cido ascrbico pueden interferir con las determinaciones de glucosa en sangre cuando se utiliza el mtodo de la glucosa-oxidasa. Los pacientes diabticos que reciban vitamina C deben ser advertidos acerca de la posibilidad de falsos positivos.

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Como el cido ascrbico puede aumentar el riesgo de una toxicidad por hierro en pacientes con hemocromatosis, estos pacientes debern limitar su ingesta de vitamina a no ms de 500 mg/da En algunos casos, muy raros, se ha asociado la ingesta de grandes dosis de cido ascrbico on arritmias fatales en pacientes con sobrecargas de hierro. Los pacientes con anemias (anemia sideroblstica, talasemia, etc) pueden mostrar una reduccin de la absorcin de hierro durante un tratamiento con grandes dosis de cido ascrbico, pudiendo aparecer crisis en casos de anemia falciforme.

Reacciones adversas Despus de grandes dosis de cido ascrbico pueden producirse piedras renales de oxalato, urato o cistina por obstruccin de los tbulos renales, con dolor de espalda o vertebral. En el 5% de los pacientes que toman grandes dosis de vitamina C se desarrolla oxaluria. Los sujetos con mayores riesgos son los que tienen insuficiencia renal, historia de nefrolitiasis o se encuentran bajo hemodilisis. El cido ascrbico es, por regla general, no txico. Las reacciones adversas que se han comunicado incluyen sofocos, jaquecas, naseas y vmitos y calambres abdominales. La diarrea es el resultado de dosis superiores a 1 g/da. Despus de su administracin intravenosa pueden observarse vrtigo, mareos o debilidad. Se ha observado anemia hemolitica debida a hemolisis en algunos pacientes con deficiencia en glucosa 6-fosfato deshidrogenasa (G6PD) despus de grandes dosis por va oral o intravenosa de cido ascrbico. En casos muy raros, se ha producido anemia falciforme debido a una disminucin del pH sanguneo.

EL CONSUMO EXCESIVO DE CHICLES CONTENIENDO CIDO ASCRBICO PUEDE OCASIONAR CARIES DENTALES DEBIDO A QUE EL CIDO ASCRBICO ATACA AL ESMALTE.

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ANEXOS

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GLOSARIO

Analita: componente especifico de una muestra a medir. Calibracin: conjunto de operaciones que determinan la relacin entre los valores indicados por un instrumento de medicin y los valores conocidos correspondiente a un patrn de referencia. Error aleatorio: Es aquel error inevitable que se produce por eventos nicos imposibles de controlar durante el proceso de medicin. Se contrapone al concepto de error sistemtico. Las fuentes de los errores aleatorios son difciles de identificar o sus efectos no pueden corregirse del todo. Son numerosos y pequeos. Este error ocurre o est dado por el azar. Ejemplo: Errores de apreciacin, tales como el paralaje, que depende del observador y su capacidad en cuanto al lmite separador del ojo. Error Sistemtico: Es aquel que se produce de igual modo en todas las mediciones que se realizan de una magnitud. El error sistemtico: est condicionado por algn factor distinto al azar. Ejemplo: el error de las masas patrn del laboratorio se transfiere sistemticamente al momento de calibrar la balanza. El VIM, lo define como componente del error de medicin que al reiterar las mediciones se mantiene constante o bien varia de manera predecible. Especificidad: capacidad de un mtodo analtico para obtener una respuesta debida nicamente al analito de inters. Exactitud: concordancia entre un valor obtenido empleando el mtodo y el valor de referencia. Incertidumbre: de una medicin es el parmetro asociado al resultado, es decir, caracteriza la dispersin de los valores que razonablemente pueden ser atribuidos al mesurando. Linealidad: habilidad para asegurar que los resultados obtenidos directamente o por transformacin matemtica, son proporcionales a la concentracin del analito. Mtodo analtico: descripcin de la secuencia de actividades, materiales y parmetros que se deben cumplir para llevar a cabo el anlisis de un componente especifico de la muestra. Metodologa de prueba: procedimiento para determinar si un producto o materia prima cumple con las especificaciones establecidas. Muestra analtica: porcin de material a evaluar de acuerdo al mtodo analtico. Muestra: porcin del material a evaluar. Parmetros de desempeo: parmetro especifico a estudiar en un protocolo de validacin. Precisin intermedia: precisin de un mtodo analtico, expresada como la concordancia relativa obtenida entre determinaciones independientes realizadas en un mismo laboratorio, por diferentes analistas, en distintos das. Precisin: grado de concordancia entre resultados analticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homognea. Repetibilidad: precisin de un mtodo analtico, expresada como la concordancia entre determinaciones independientes realizadas por un solo analista, usando los mismos instrumentos y mtodos.

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Reproducibilidad: precisin de un mtodo analtico, expresada como la concordancia entre determinaciones independientes realizadas por diferentes laboratorios. Revalidacin: comprobacin de que el mtodo analtico mantiene su desempeo cuando existen cambios en la composicin del producto, en el mtodo analtico. Robustez: es una medida de la capacidad de un procedimiento analtico de no ser afectado por variaciones pequeas pero deliberadas de los parmetros del mtodo; proporciona una indicacin de la fiabilidad del procedimiento en un uso normal. En este sentido el objetivo de la prueba de robustez es optimizar el mtodo analtico desarrollado o implementado por el laboratorio, y describir bajo qu condiciones analticas (incluidas sus tolerancias), y a travs de este se pueden resultados confiables. Selectividad: es el grado en que un mtodo puede cuantificar o cualificar al analito en presencia de interferentes. Estos interferentes normal o frecuentemente se encuentran en la matriz de inters. Sensibilidad: es el cociente entre el cambio en la indicacin de un sistema de medicin y el cambio correspondiente en el valor de la cantidad objeto de la medicin. Validacin de mtodo analtico: proceso por el cual se demuestra, por estudios de laboratorio, que la capacidad del mtodo satisface los requisitos para la aplicacin analtica deseada, o tambin puede entenderse como verificacin de determinados parmetros de un mtodo en la que los requisitos especificados para estos, demuestran que el mtodo es idneo para un uso previsto (VIM, 2007).

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BIBLIOGRAFA Calpena AC, Escribano E, Fernndez C. Validacin de los mtodos analticos.

Farm Clin 1991 (9):749-58

Castillo Aguilar Beatriz, Gonzlez Hernndez Rolando. Protocolo de validacin de

mtodos analticos para la cuantificacin de frmacos, Rev Cubana Farm 1997;30

(1), Cuba. 1997.

CEA Diez Pedro, Palacios Remondo Jess. Vitamina C (cidosascrbicos y

dehidroascrbico), Azucares y proteinasen zumo natural de uvas de variedades

autctonas dela Rioja. 1981.

Colegio Nacional de Qumicos farmacuticos Biolgicos de Mxico A.C. Gua de

validacin de mtodos analticos. Mxico.

Estudio de Validacin de Mtodos Analticos (Una gua prctica para laboratorios

Qumicos). Swedish National Food Administration. 2007, [Citado 16 MAR 2015].

Gutirrez Tania M., Hoyos I. Olga y Pez I. Martha. ASCORBIC ACID

DETERMINATION IN GOOSEBERRY (Physalis peruviana L.), FOR HIGH-

PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC), 2007.

Nmx-f-229-1972. Mtodo de prueba para la determinacin de vitamina C" en

leche. Normas mexicanas. Direccin general de normas. Mxico.

NTE INEN 0384.Conservas vegetales, determinacin de cido ascrbico. 1979.

SERRA, Horacio Marcelo y CAFARO, Thamara Anala. cido ascrbico: desde la

qumica hasta su crucial funcin protectiva en ojo. Acta bioqumica clnica

Latinoamrica, vol.41, n.4 pp. 525-532. 2007.

Validacin de Mtodos de anlisis qumicos Procedimiento NMKL No. 4. Versin

Espaol 1 (1996), [Citado 16 MAR 2015].

VIM, International Vocabulary for Basic and General Terms in Metrology: 2007.