DESCALCIFICACIN

TECNOLOGIA MEDICA U.V.

QuQuQuQu descalcificamos?

Tejido seo

Muestras dentales

Tejidos calcificados Tejidos calcificados

Qu es la descalcificacin? Consiste bsicamente en la remocin de sales

de calcio desde tejidos ricos en estos componentes y que son los causantes de la dureza y resistencia de stos, lo que impide dureza y resistencia de stos, lo que impide ser procesados como cualquier otro tejido para corte histolgico.

Hidroxiapatita

Es el principal componente mineral de los tejidos calcificados.

Remocin mediante uso de cidos fuertes tales como c ntrico o frmicotales como c ntrico o frmico

Agentes quelantes ( EDTA )

Mtodo electroltico

Cuidados

Hidrlisis de cidos nucleicos

Prdida de actividad enzimtica

Disminucin de la inmunoreactividad

Descalcificacin incompleta Descalcificacin incompleta

Fijacin prolongada

Fin del proceso

Recomendaciones

Fijacin ms larga

Lavado prolongado ( 24 hrs. Min ) Lavado prolongado ( 24 hrs. Min )

Cambio diario de la solucin

Control permanente del proceso.

arteriola

Calcificaciones patolgicas

Sarcoma de Ewing

El PAS-diastasa para glucgeno es necesario en los tumores de celular redondas,para distinguir el sarcoma de Ewing (PAS positivos) del neuroblastoma y del linfoma (en general, PAS negativos).

La impregnacin argntica para las fibras reticulares til para distinguir el sarcoma de Ewing del linfoma,

tipo especializado de tejido tipo especializado de tejido tipo especializado de tejido tipo especializado de tejido conectivo conectivo conectivo conectivo

Tejido seoTejido seoMara Eugenia FrancoMara Eugenia FrancoMara Eugenia FrancoMara Eugenia Franco

conectivo conectivo conectivo conectivo Compuesto por: Compuesto por: Compuesto por: Compuesto por:

Matriz orgnicaMatriz orgnicaMatriz orgnicaMatriz orgnicaMatriz orgnicaMatriz orgnicaMatriz orgnicaMatriz orgnica (35%)(35%)(35%)(35%)Matriz inorgnicaMatriz inorgnicaMatriz inorgnicaMatriz inorgnicaMatriz inorgnicaMatriz inorgnicaMatriz inorgnicaMatriz inorgnica (65%)(65%)(65%)(65%)

Matriz orgnicaMatriz orgnicaMatriz orgnicaMatriz orgnicaMatriz orgnicaMatriz orgnicaMatriz orgnicaMatriz orgnica (35%) (35%) (35%) (35%)

Fibras de colgeno tipo I(90%) Fibras de colgeno tipo I(90%) Fibras de colgeno tipo I(90%) Fibras de colgeno tipo I(90%) Matriz extracelular Matriz extracelular Matriz extracelular Matriz extracelular de naturalezade naturalezade naturalezade naturaleza Matriz extracelular Matriz extracelular Matriz extracelular Matriz extracelular de naturalezade naturalezade naturalezade naturalezaglicoproteicaglicoproteicaglicoproteicaglicoproteica que proporcionan que proporcionan que proporcionan que proporcionan flexibilidad y resistencia al tejidoflexibilidad y resistencia al tejidoflexibilidad y resistencia al tejidoflexibilidad y resistencia al tejido

Pequea fraccin de la matriz orgnica del hueso: Pequea fraccin de la matriz orgnica del hueso: Pequea fraccin de la matriz orgnica del hueso: Pequea fraccin de la matriz orgnica del hueso: glicosaminoglicanosglicosaminoglicanosglicosaminoglicanosglicosaminoglicanos: : : :

condroitncondroitncondroitncondroitn----sulfato + sulfato + sulfato + sulfato + queratnsulfatoqueratnsulfatoqueratnsulfatoqueratnsulfato + cido + cido + cido + cido hialurnicohialurnicohialurnicohialurnico. . . . proteoglicanos de pequeo tamao proteoglicanos de pequeo tamao proteoglicanos de pequeo tamao proteoglicanos de pequeo tamao protenas protenas protenas protenas (no colgenas) (no colgenas) (no colgenas) (no colgenas) exclusivas del hueso: exclusivas del hueso: exclusivas del hueso: exclusivas del hueso:

MECMECMECMECMECMECMECMEC

OsteocalcinaOsteocalcinaOsteocalcinaOsteocalcina (2% de la matriz orgnica) (2% de la matriz orgnica) (2% de la matriz orgnica) (2% de la matriz orgnica) OsteopontinaOsteopontinaOsteopontinaOsteopontinaSialoprotenaSialoprotenaSialoprotenaSialoprotena sea sea sea sea (BSP).(BSP).(BSP).(BSP). comportamiento comportamiento comportamiento comportamiento tintorialtintorialtintorialtintorial acidfiloacidfiloacidfiloacidfilo....PAS + y dbil PAS + y dbil PAS + y dbil PAS + y dbil metacromasiametacromasiametacromasiametacromasia

Principal elemento calcio, en forma de sales como el fosfato de calcio o hidroxiapatita.

Estas sales, se observan al microscopio de luz

como finos depsitos cristalinos.(sin teir)

Matriz inorgnica (65% del peso seco)(65% del peso seco)(65% del peso seco)(65% del peso seco)

como finos depsitos cristalinos.(sin teir)

Los cristales de hidroxiapatita miden 3 nm de espesor y hasta 60 nm de largo, se depositan entre la matriz orgnica.

Clulas del hueso Clulas del hueso Clulas del hueso Clulas del hueso OsteoblastosOsteoblastosOsteoblastosOsteoblastos:responsables:responsables:responsables:responsables de de de de la formacin de tejido seo nuevola formacin de tejido seo nuevola formacin de tejido seo nuevola formacin de tejido seo nuevo OOOOsteocitossteocitossteocitossteocitos:osteoblastos :osteoblastos :osteoblastos :osteoblastos maduros y maduros y maduros y maduros y desarrollan una actividad menordesarrollan una actividad menordesarrollan una actividad menordesarrollan una actividad menordesarrollan una actividad menordesarrollan una actividad menordesarrollan una actividad menordesarrollan una actividad menorOsteoclastosOsteoclastosOsteoclastosOsteoclastos: encargados : encargados : encargados : encargados de reabsorber de reabsorber de reabsorber de reabsorber o eliminar la o eliminar la o eliminar la o eliminar la materiaseamateriaseamateriaseamateriasea....

Cualquier fijador, condicionado al estudio que se vaya a realizar

Tiempo de fijado, 48 hrs. como mnimo

Lavar los tejidos antes de

FijacinFijacinFijacinFijacin

Lavar los tejidos antes de colocarlos en el descalcificador

Muestras voluminosas se seccionan antes de fijar (se puede usar sierra)

Piezas dentarias, se seccionan los pices y /o se realizan orificios laterales

TECNICAS DE DESCALCIFICACIONTECNICAS DE DESCALCIFICACION

Mtodos qumicos

Mtodos fsicos: electrolticosMtodos fsicos: electrolticosultrasonido

Uso del microondas

Agentes cidos

Orgnicos

Inorgnicos

Frmico

Ntrico

Clorhdrico

Actico

Ctrico

DescalcificadoresDescalcificadores

Agentesquelantes

EDTA

Sulfrico

Inorgnicos Ntrico

Ana Morse

DescalificadoresQumicos cidos

Actan como un exceso de H+ alterando el equilibrio inico de la

hidroxiapatita:

Ca10(PO4)6(OH)2 medio cido 10Ca+2+6PO4

3++ H2O

La extraccin contnua de los iones Ca, fosfato e hidroxilo

evita que la hidroxiapatita alcance el equilibrio,

producindose su disolucin.

Descalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesDescalcificacin por agentes quelantesUn agente quelante es un componente orgnico Un agente quelante es un componente orgnico Un agente quelante es un componente orgnico Un agente quelante es un componente orgnico

que es capaz de unirse a iones metlicos formando que es capaz de unirse a iones metlicos formando que es capaz de unirse a iones metlicos formando que es capaz de unirse a iones metlicos formando as un as un as un as un quelato quelato quelato quelato

Los Los Los Los quelatos quelatos quelatos quelatos son componentes muy estables y no se son componentes muy estables y no se son componentes muy estables y no se son componentes muy estables y no se descomponen fcilmente para liberar el ion metlico descomponen fcilmente para liberar el ion metlico descomponen fcilmente para liberar el ion metlico descomponen fcilmente para liberar el ion metlico

cido etilendiamintetracticoSAL DISODICA

[CH 2N(CH2COOH) CH2COONa]2

EDTAEDTAEDTAEDTA

Accin : quelacin de la hidroxiapatita a pH 7.4Primeras 12 horas extraccin de casi el 50% del calcio.

EDTA

Se debe usar Se debe usar Se debe usar Se debe usar recipiente de plstico recipiente de plstico recipiente de plstico recipiente de plstico

Evita formacin de burbujas de CO2. La diferencia con los descalcificadores cidos es que los

VENTAJAS de EDTA

descalcificadores cidos es que los iones H+ no juegan un rol en la reaccin qumicaAsegura la integridad de las estructuras intracelulares.

Ana MorseAna MorseAna MorseAna MorseEs el mejor mtodo para usar en Es el mejor mtodo para usar en Es el mejor mtodo para usar en Es el mejor mtodo para usar en

rutina, rutina, rutina, rutina, (con excepciones)(con excepciones)(con excepciones)(con excepciones)Se prepara mezclando cido Se prepara mezclando cido Se prepara mezclando cido Se prepara mezclando cido

Frmico al 45% y Citrato de Na al Frmico al 45% y Citrato de Na al Frmico al 45% y Citrato de Na al Frmico al 45% y Citrato de Na al 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el

momento de usarmomento de usarmomento de usarmomento de usarEl cido frmico disuelve el calcio El cido frmico disuelve el calcio El cido frmico disuelve el calcio El cido frmico disuelve el calcio

liberndolo y el Citrato acta como liberndolo y el Citrato acta como liberndolo y el Citrato acta como liberndolo y el Citrato acta como quelantequelantequelantequelante capturndolo capturndolo capturndolo capturndolo

Uso del microondas:Uso del microondas:Uso del microondas:Uso del microondas:Acelera el proceso de desmineralizacinAcelera el proceso de desmineralizacinAcelera el proceso de desmineralizacinAcelera el proceso de desmineralizacindisminuyendo el tiempo en 3 o 4 veces disminuyendo el tiempo en 3 o 4 veces disminuyendo el tiempo en 3 o 4 veces disminuyendo el tiempo en 3 o 4 veces La temperatura debe fijarse en 37 a 42 CLa temperatura debe fijarse en 37 a 42 CLa temperatura debe fijarse en 37 a 42 CLa temperatura debe fijarse en 37 a 42 C Se recomienda el uso de microondas de Se recomienda el uso de microondas de Se recomienda el uso de microondas de Se recomienda el uso de microondas de laboratorio.laboratorio.laboratorio.laboratorio.laboratorio.laboratorio.laboratorio.laboratorio.Precaucin con los vapores Precaucin con los vapores txicos que se liberan al txicos que se liberan al calentar el descalcificadorcalentar el descalcificador

Se basa en el uso de sonicador

que emite ondas de sonido las que destruyen las estructuras como fosfato de calcio, fosfato de magnesio y

Descalcificacin por ultrasonidoDescalcificacin por ultrasonido

de calcio, fosfato de magnesio y carbonato de calcio

Descalcificador electroltico

Descalcificador electroltico

Utiliza corriente elctrica la que acelera el proceso de descalcificacin de las soluciones cidas, ya que los iones de calcio y otros minerales al ser removidos por la solucin descalcificadora, son desplazados hacia los polos de la celda elctrica utilizada.

++++ --------

Para comprobar el trmino de la descalcificacin

Mecnicamente probando su dureza con los dedos, usar una aguja , bistur o cualquier elemento cortante

Pruebas radiogrficas. Pruebas radiogrficas.

Prueba qumica:Prueba qumica:Prueba qumica:Prueba qumica:Se basa en que el Se basa en que el Se basa en que el Se basa en que el oxalato de Ca oxalato de Ca oxalato de Ca oxalato de Ca es insoluble en es insoluble en es insoluble en es insoluble en HHHH2222O y soluciones acuosas alcalinas O y soluciones acuosas alcalinas O y soluciones acuosas alcalinas O y soluciones acuosas alcalinas

CaCaCaCa2222+++++ + + + CCCC2222OOOO44442222---- + + + + HHHH2222O O O O CaCCaCCaCCaC2222OOOO4444. H. H. H. H2222OOOO

Se Se Se Se toman 5 ml de toman 5 ml de toman 5 ml de toman 5 ml de descalcificadordescalcificadordescalcificadordescalcificador usado (3 a 12 hrs. de uso) y usado (3 a 12 hrs. de uso) y usado (3 a 12 hrs. de uso) y usado (3 a 12 hrs. de uso) y Se Se Se Se toman 5 ml de toman 5 ml de toman 5 ml de toman 5 ml de descalcificadordescalcificadordescalcificadordescalcificador usado (3 a 12 hrs. de uso) y usado (3 a 12 hrs. de uso) y usado (3 a 12 hrs. de uso) y usado (3 a 12 hrs. de uso) y se agrega hidrxido de amonio (Nse agrega hidrxido de amonio (Nse agrega hidrxido de amonio (Nse agrega hidrxido de amonio (N4444OH) concentrado, mezclar.OH) concentrado, mezclar.OH) concentrado, mezclar.OH) concentrado, mezclar.Agregar 5 ml de Oxalato de Amonio (NHAgregar 5 ml de Oxalato de Amonio (NHAgregar 5 ml de Oxalato de Amonio (NHAgregar 5 ml de Oxalato de Amonio (NH4444))))2222CCCC2222OOOO4 4 4 4 x Hx Hx Hx H2222O O O O acuoso a saturacin , agitar y esperar 15 a 30. acuoso a saturacin , agitar y esperar 15 a 30. acuoso a saturacin , agitar y esperar 15 a 30. acuoso a saturacin , agitar y esperar 15 a 30. Si hay opacidad la descalcificacin est incompleta , si es Si hay opacidad la descalcificacin est incompleta , si es Si hay opacidad la descalcificacin est incompleta , si es Si hay opacidad la descalcificacin est incompleta , si es transparente el proceso de descalcificacin ha terminadotransparente el proceso de descalcificacin ha terminadotransparente el proceso de descalcificacin ha terminadotransparente el proceso de descalcificacin ha terminado

Esta tcnica sirve tambin para EDTA

Despus de descalcificar con cidos, se recomienda pasar los cortes por Sulfato

de Sodio al 5% para neutralizar.En todos los casos se recomienda lavar

profusamente en agua antes de comenzar la inclusincomenzar la inclusin

IMPORTANTE:

Cuando la muestra incluye tejido seo y tejido tumoral blando, es preciso separar un fragmento de tejido blandoy tratarlo sin descalcificacin.

H-E H-E

VAN GIESON

MASSON

VIMENTINAVIMENTINAVIMENTINAVIMENTINA

ALFAALFAALFAALFA---- ACTINAACTINAACTINAACTINA

DESCALCIFICACION con ANA MORSEDESCALCIFICACION con ANA MORSEDESCALCIFICACION con ANA MORSEDESCALCIFICACION con ANA MORSE

VIMENTINAVIMENTINAVIMENTINAVIMENTINA

DESCALCIFICACION con ACIDO NITRICODESCALCIFICACION con ACIDO NITRICODESCALCIFICACION con ACIDO NITRICODESCALCIFICACION con ACIDO NITRICO

SSSS----100100100100

mellas

microcalcificaciones

Para los tejidos que se cortan sin decalcificar se usa como medio de

inclusin: Acrlico Resina Resina

Mtodo de inclusin para corte con navajaMtodo de inclusin para corte con navaja(T.M. Pa (T.M. Pa Castelli U. Catlica)Castelli U. Catlica)

Mtodo de inclusin para corte con navajaMtodo de inclusin para corte con navaja(T.M. Pa (T.M. Pa Castelli U. Catlica)Castelli U. Catlica)

Navaja : acero sper duro con una cara plana (tipo D) alemana

Mtodo de inclusin: Mezcla de metilmetacrilatodesestabilizado con una mezcla de NaCl y Na OH, estabilizado con Hidroquinona desestabilizado con una mezcla de NaCl y Na OH, estabilizado con Hidroquinona

Deshidratacin en Alcohol / Acetona 50:50, 6 cambios (1 da y )

Impregnacin Metilmetacrilato+ Plastoid N (alemania) 3 cambios ( 1 da)

Polimerizar en estufa a 37 (1 da para otro) (molde frasco de plstico, el que finalmente se rompe y queda el molde)

El hueso se estudia sin descalcificar para estudiar los efectos provocados por el tratamiento con Tetraciclina

Se puede calcular la edad con el estudio de los osteones

En dientes:Caries de esmalte

En dientes: Caries de esmalte Traslucidez radicular Interaccin de materiales ETC...........

Tejidos que se pueden estudiar Tejidos que se pueden estudiar sin descalcificar:sin descalcificar:

Cresta ilaca Cresta ilaca Piezas dentariasPiezas dentarias

12/06/2013 43

Piezas dentariasPiezas dentariasHuesos compactosHuesos compactos

ETCETC

Tricrmico de MassonH/ETambin se puede estudiar

sin tincin con polarizacin

TincionesTinciones

sin tincin con polarizacin

UtilidadesUtilidades

Pacientes con dilisis Pacientes con dilisis Depsito de aluminio Depsito de aluminio

sin decalcificar

Hueso normal sin Hueso normal sin decalcificardecalcificar

Mquina para tejidos durosMquina para tejidos duros

PROBLEMASPROBLEMAS

La zona de corte en La zona de corte en La zona de corte en La zona de corte en La zona de corte en La zona de corte en La zona de corte en La zona de corte en descalcificadordescalcificadordescalcificadordescalcificadordescalcificadordescalcificadordescalcificadordescalcificador o en o en o en o en o en o en o en o en cido cido cido cido cido cido cido cido acetilsaliclicoacetilsaliclicoacetilsaliclicoacetilsaliclicoacetilsaliclicoacetilsaliclicoacetilsaliclicoacetilsaliclico(aspirina)(aspirina)(aspirina)(aspirina)(aspirina)(aspirina)(aspirina)(aspirina)y luego se intenta el y luego se intenta el y luego se intenta el y luego se intenta el y luego se intenta el y luego se intenta el y luego se intenta el y luego se intenta el corte nuevamentecorte nuevamentecorte nuevamentecorte nuevamentecorte nuevamentecorte nuevamentecorte nuevamentecorte nuevamenteCONSEJOSCONSEJOSCONSEJOSCONSEJOSCONSEJOSCONSEJOSCONSEJOSCONSEJOS

DATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESODATOS UTILES PARA CORTAR HUESO1.1.1.1. Buena fijacin ( tiempo) con lavado posteriorBuena fijacin ( tiempo) con lavado posteriorBuena fijacin ( tiempo) con lavado posteriorBuena fijacin ( tiempo) con lavado posterior2.2.2.2. Buena descalcificacin con lavado posteriorBuena descalcificacin con lavado posteriorBuena descalcificacin con lavado posteriorBuena descalcificacin con lavado posterior3.3.3.3. Cuidar los tiempos de deshidratacin y Cuidar los tiempos de deshidratacin y Cuidar los tiempos de deshidratacin y Cuidar los tiempos de deshidratacin y aclaramientoaclaramientoaclaramientoaclaramiento, , , ,

reemplazar el primer reemplazar el primer reemplazar el primer reemplazar el primer xilolxilolxilolxilol por Acetato de por Acetato de por Acetato de por Acetato de ButiloButiloButiloButilo (esto sirve (esto sirve (esto sirve (esto sirve para todas las muestras)para todas las muestras)para todas las muestras)para todas las muestras)

4.4.4.4. Cuidar tiempo de inclusin y temperatura de la parafina Cuidar tiempo de inclusin y temperatura de la parafina Cuidar tiempo de inclusin y temperatura de la parafina Cuidar tiempo de inclusin y temperatura de la parafina 5.5.5.5. Enfriar bien los moldes en el refrigeradorEnfriar bien los moldes en el refrigeradorEnfriar bien los moldes en el refrigeradorEnfriar bien los moldes en el refrigerador5.5.5.5. Enfriar bien los moldes en el refrigeradorEnfriar bien los moldes en el refrigeradorEnfriar bien los moldes en el refrigeradorEnfriar bien los moldes en el refrigerador6.6.6.6. Cortar enfriando con hielo (hecho con amonaco al 2%) y Cortar enfriando con hielo (hecho con amonaco al 2%) y Cortar enfriando con hielo (hecho con amonaco al 2%) y Cortar enfriando con hielo (hecho con amonaco al 2%) y

estirar en el agua de a 42 C estirar en el agua de a 42 C estirar en el agua de a 42 C estirar en el agua de a 42 C 7.7.7.7. Si el hueso presenta dificultades se puede calentar con el Si el hueso presenta dificultades se puede calentar con el Si el hueso presenta dificultades se puede calentar con el Si el hueso presenta dificultades se puede calentar con el

dedo o echarle aliento.dedo o echarle aliento.dedo o echarle aliento.dedo o echarle aliento.8.8.8.8. ANIMO!! Y si an no se puede , se guarda en el ANIMO!! Y si an no se puede , se guarda en el ANIMO!! Y si an no se puede , se guarda en el ANIMO!! Y si an no se puede , se guarda en el freeserfreeserfreeserfreeser

hasta el otro da . hasta el otro da . hasta el otro da . hasta el otro da . EN FIN MAANA SER OTRO DA EN FIN MAANA SER OTRO DA EN FIN MAANA SER OTRO DA EN FIN MAANA SER OTRO DA