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Procedimiento de la huella genética de ADN

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Tubos para cada grupo de trabajo

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Sospechoso 1 – 5Tubos que contienen 10 µl de muestra de ADN

70 µl Mezcla de enzimas

0,24 g de Agarosa

10 µl Marcador

80 µl solución tampón

10 µl CS ADN

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1. Preparación de la restricción

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¡Atención!

• Para cada pipeteo usa una punta de pipeta nueva para evitar contaminaciones.

• Por favor, recorta todos los tubos al menos durante 30 segundos para mezclarlos.

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1. Tubos con muestras de ADN

ADN 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl

CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5

10µl

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1.1 Pipetea 10 µl de la mezcla de enzimas en cada tubo

ADN 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl

CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5

10µl

Mezcla 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl enzimas (ENZ)

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2. Digestión de restricción

Coloca los tubos en un bastidor flotante e incubarlos durante 30 min a 37 ºC en un baño de agua o en una estufa.

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3. Preparar la electroforesis

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Insertar la cestilla, las varillas de metal y el peine en la camara de electroforesis.

3.1 Preparar la cámara de electroforesis

Varillas metálicas Cestilla

Peine

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3.2 Fabricar el gel de Agarosa (0,8%)

• Introducir 0,24 g de agarosa + 30 mL TAE-tampón en un frasco Erlenmeyer de 250 mL.

• Calentar un poco el frasco Erlenmeyer en el microondas, removerlo y calentarlo otro poco.

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3.3 Verter el gel

Vierte el gel a 55 °C en la caja del gelAtención:

•Comprueba la temperatura con el dorso de la mano

•No mover el gel hasta que esté sólido.

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3.4 Preparar la cámara

• Después de que el gel se haya solidificado, quita las varillas de metal de la cámara de electroforesis

• Llena la cámara con270 ml de TAE-tampón para cubrir el gel.

• Tira el peine.Huella Genética de ADN

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4. Preparación del marcador de ADN

Pipetea 10 µl de la solución tampón (Loading Buffer) en 10 µl marcador de ADN (M).

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5. Añadir 10 µl de solución tampón (Loading

Buffer)

Pipetea 10 µl de la solución tampón en el CS y S1- S5.

10 µl10 µl

10 µl

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Pipetea 20 µl de cada muestra y 20 µl de marcador de ADN(M) en los pocillos

6. Llenar los pocillos

¡Recuerda la secuencia!

Líneas: llena de izquierda a derecha

La línea izquierda permanece libre

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6. Llenar los pocillos

Atención: las bolsas de gel no deben estar perforadas

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7. Electroforesis (a 120 V ca. 30 min)

Para la electroforesis cuando la banda azul haya migrado a 1 cm antes del final del gel.

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8. Colorear el ADN

• Transfiere el gel en el bol del colorante y cúbrelo con 60 mL de la solución de la tinción durante 2 min.

• Coloca la solución de tinción en el frasco Erlenmeyer.

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9. Analizar el gel

CS S1 S2 S3 S4 S5 M

¿Cúal de los sospechosos es el culpable?

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9. Resultado

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