Coloración WrightColoración Wright

Coloración WrightColoración Wright

El frotis sanguíneo una vez seco, se El frotis sanguíneo una vez seco, se somete a un proceso de fijación y somete a un proceso de fijación y posteriormente a una tinción mediante un posteriormente a una tinción mediante un colorante adecuado. colorante adecuado.

En la mayoría de laboratorios, los En la mayoría de laboratorios, los colorantes más empleados para la tinción colorantes más empleados para la tinción hematológica se basan en el de hematológica se basan en el de Romanowsky ya que puede obtenerse Romanowsky ya que puede obtenerse mayor información a partir del examen de mayor información a partir del examen de un frotis de sangre periférica bien teñido.un frotis de sangre periférica bien teñido.

Coloración WrightColoración Wright Una tinción de Romanowsky consiste en azul de Una tinción de Romanowsky consiste en azul de

metileno y sus productos de oxidación, así como metileno y sus productos de oxidación, así como eosina Y. eosina Y.

La acción combinada de estos colorantes produce el La acción combinada de estos colorantes produce el efecto de Romanowsky y da una coloración efecto de Romanowsky y da una coloración purpúrica a los núcleos de los leucocitos y a los purpúrica a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrófilos y de color rosado a los gránulos neutrófilos y de color rosado a los eritrocitos. eritrocitos.

Los componentes principales causantes de este Los componentes principales causantes de este efecto son el azul B (un producto de oxidación del efecto son el azul B (un producto de oxidación del azul de metileno) y la eosina Y. azul de metileno) y la eosina Y.

La amplia variación en los colores y sombras La amplia variación en los colores y sombras observadas con la tinción de Romanowsky permiten observadas con la tinción de Romanowsky permiten distinciones sutiles de las características celulares.distinciones sutiles de las características celulares.

Coloración WrightColoración Wright Fundamento Fundamento

La naturaleza ácida o básica de las La naturaleza ácida o básica de las estructuras celulares determina su avidez estructuras celulares determina su avidez por los componentes del colorante por los componentes del colorante policromático de Wright; es así como los policromático de Wright; es así como los ácidos nucleicos se tiñen con azul B que es el ácidos nucleicos se tiñen con azul B que es el básico y la hemoglobina con la eosina Y que básico y la hemoglobina con la eosina Y que es ácida. es ácida.

Otras estructuras se tiñen por una Otras estructuras se tiñen por una combinación de ambos y se denominan combinación de ambos y se denominan neutrófilas. neutrófilas.

Coloración WrightColoración Wright Procedimiento Procedimiento

Materiales Materiales Extendidos de sangre en lámina o Extendidos de sangre en lámina o laminilla. laminilla. Colorante de Wright. Colorante de Wright. Buffer de fosfatos (pH 6.4). Buffer de fosfatos (pH 6.4). Cubetas para tinción. Cubetas para tinción. Agua corriente. Agua corriente. 

Coloración WrightColoración Wright Fundamento Fundamento Método Método

Es variable y debe estandarizarse en cada laboratorio. Es variable y debe estandarizarse en cada laboratorio. Un modelo es el siguiente:Un modelo es el siguiente:

Teñir las extensiones de sangre una vez se hayan Teñir las extensiones de sangre una vez se hayan secado al aire libre. Si se desea dejar por más de una secado al aire libre. Si se desea dejar por más de una hora sin colorear es necesario fijarlas con metanol hora sin colorear es necesario fijarlas con metanol absoluto. (15 segundos aproximadamente).absoluto. (15 segundos aproximadamente).

Colocar los extendidos en un plano horizontal y con la Colocar los extendidos en un plano horizontal y con la extensión de sangre hacia arriba y en las cubetas extensión de sangre hacia arriba y en las cubetas respectivas. respectivas.

Cubrir toda la superficie de la preparación con Wright. Cubrir toda la superficie de la preparación con Wright. Esperar 2 -3 minutos (el tiempo óptimo es Esperar 2 -3 minutos (el tiempo óptimo es determinado por ensayo y error). determinado por ensayo y error).

Coloración WrightColoración WrightProcedimientoProcedimiento

Agregar un volumen igual de solución Agregar un volumen igual de solución amortiguadora (pH 6.4) o en su defecto agua de amortiguadora (pH 6.4) o en su defecto agua de grifo con resultados igualmente buenos. grifo con resultados igualmente buenos.

La cantidad de agua o buffer debe ser suficiente La cantidad de agua o buffer debe ser suficiente para cubrir la lámina completamente, pero no en para cubrir la lámina completamente, pero no en exceso que caiga a la cubeta. (2.5 ml para láminas y exceso que caiga a la cubeta. (2.5 ml para láminas y 0.5 ml para laminillas aproximadamente). 0.5 ml para laminillas aproximadamente).

Soplar suavemente el extendido para mezclar hasta Soplar suavemente el extendido para mezclar hasta obtener una película uniforme de apariencia obtener una película uniforme de apariencia metálica - verdosa. Esperar 7 minutos. metálica - verdosa. Esperar 7 minutos.

Coloración WrightColoración WrightProcedimientoProcedimiento

Remover el colorante con agua corriente manteniendo Remover el colorante con agua corriente manteniendo los extendidos en posición horizontal. El lavado debe los extendidos en posición horizontal. El lavado debe ser rápido (5 - 30 segundos) para evitar precipitación ser rápido (5 - 30 segundos) para evitar precipitación del colorante sobre la superficie del extendido. del colorante sobre la superficie del extendido.

Dejar secar al aire. Dejar secar al aire.

Quitar con una gasa humedecida en alcohol, el Quitar con una gasa humedecida en alcohol, el colorante que queda adherido al dorso de la lamina o colorante que queda adherido al dorso de la lamina o laminilla, teniendo cuidado de que el alcohol no tenga laminilla, teniendo cuidado de que el alcohol no tenga contacto con la superficie coloreadacontacto con la superficie coloreada

Los extendidos en laminilla se pueden montar para uso Los extendidos en laminilla se pueden montar para uso temporal colocándolos con la película de sangre hacia temporal colocándolos con la película de sangre hacia abajo y sobre una lámina en la que se ha depositado abajo y sobre una lámina en la que se ha depositado una gota de aceite de inmersión..una gota de aceite de inmersión..

Coloración WrightColoración Wright Control de calidad PreanaliticoControl de calidad Preanalitico

Control de calidad Control de calidad La tinción de Wright bien preparada y cronometrada La tinción de Wright bien preparada y cronometrada funcionará correctamente si la extensión fue realizada funcionará correctamente si la extensión fue realizada en forma correcta ya que extensiones gruesas no en forma correcta ya que extensiones gruesas no permiten juzgar la calidad de la tinción. permiten juzgar la calidad de la tinción.

El criterio más confiable sobre la calidad de la tinción El criterio más confiable sobre la calidad de la tinción es la forma en que se tiñen los monocitos. La tinción es es la forma en que se tiñen los monocitos. La tinción es comprobada en una extensión fina preparada con comprobada en una extensión fina preparada con sangre de lactante, habitualmente rica en monocitos. sangre de lactante, habitualmente rica en monocitos.

El núcleo debe tener una estructura vesicular fina, y en El núcleo debe tener una estructura vesicular fina, y en el citoplasma han de verse los característicos gránulos el citoplasma han de verse los característicos gránulos rosados muy finosrosados muy finos..

Coloración WrightColoración Wright Control de calidad PreanaliticoControl de calidad Preanalitico

Una tinción satisfactoria debe dar los siguientes resultados:Una tinción satisfactoria debe dar los siguientes resultados:

Glóbulos Rojos: rojo amarillento.Glóbulos Rojos: rojo amarillento.

Neutrófilos: cromatina púrpura oscuro, citoplasma rosa Neutrófilos: cromatina púrpura oscuro, citoplasma rosa pálido y gránulos lila. pálido y gránulos lila.

Eosinófilos: cromatina púrpura oscuro, citoplasma azul pálido Eosinófilos: cromatina púrpura oscuro, citoplasma azul pálido y gránulos rojo brillante. y gránulos rojo brillante.

Basófilos: cromatina púrpura oscuro, gránulos azul oscuro. Basófilos: cromatina púrpura oscuro, gránulos azul oscuro.

Linfocitos: cromatina púrpura oscuro, citoplasma azul cielo. Linfocitos: cromatina púrpura oscuro, citoplasma azul cielo.

Monocitos: cromatina púrpura medio, citoplasma azul Monocitos: cromatina púrpura medio, citoplasma azul grisáceo y gránulos lila Plaquetas: centrómero violeta o grisáceo y gránulos lila Plaquetas: centrómero violeta o púrpura, hialómero azul claro púrpura, hialómero azul claro

Coloración WrightColoración Wright Causas de error en la tinción del frotis Causas de error en la tinción del frotis

sanguíneo. sanguíneo.

Una extensión excesivamente azul (basófila).Una extensión excesivamente azul (basófila).Extensión gruesa.Extensión gruesa.Lavado insuficiente. Lavado insuficiente. Tiempo tinción excesivamente prolongado. Tiempo tinción excesivamente prolongado. Empleo de colorante excesivamente alcalinoEmpleo de colorante excesivamente alcalino

Una coloración excesivamente rosada (acidófila).Una coloración excesivamente rosada (acidófila).Extensión delgada.Extensión delgada.Exceso de buffer. Exceso de buffer. Empleo de colorante excesivamente ácido.Empleo de colorante excesivamente ácido.

Coloración WrightColoración Wright Finalmente :Finalmente :

Presencia de precipitados.Presencia de precipitados. Puede evitarse mediante filtración del colorante Puede evitarse mediante filtración del colorante antes de su empleo.antes de su empleo.

Apreciación de artefactos morfológicos Apreciación de artefactos morfológicos debido al anticoagulante.debido al anticoagulante. Cuando el frotis se realiza con sangre Cuando el frotis se realiza con sangre recolectada con EDTA, es muy importante no recolectada con EDTA, es muy importante no esperar más de 2 horas de la extracción, ya que esperar más de 2 horas de la extracción, ya que pueden aparecer alteraciones morfológicas pueden aparecer alteraciones morfológicas imprevisibles de las células sanguíneasimprevisibles de las células sanguíneas