PRÁCTICA 3A. AMINOÁCIDOS Y PÉPTIDOS. REACCIÓN DE PSEUDO SANGER/ IDENTIFICACIÓN

DE AMINOÁCIDOS.

Presentan:Cruz Rodríguez Meyli JoannaGarrido Santos Monserrat Yesenia 15. Marzo.2018

OBJETIVOS:

• Ejemplificar la reacción tipo Sanger para la identificación del amino terminal de una cadena péptidica.

• Sintetizar derivados de 2,4-dinitrofenil-a.a• Identificar Cualitativamente diversos aminoácidos. • Identificar y observar la presencia de aminoácidos en rastros de huellas

dactilares.

Los Proteínas desempeñan múltiples funciones como son:

• Formación de proteínas complejas (hemoglobina)• Transmisión del impulso nervioso • Regulación del crecimiento• Participan en vías de transmisión de señales• Biosíntesis de porfirina, purinas, pirimidinas y urea• Señalización hormonal • Encargadas del transporte, estructura, defensa, contráctiles, receptores,

trasferencia.

ESTRUCTURA PRIMARIA.

Es la descripción de todos los enlaces covalentes que unen los residuos de aminoácidos en una cadena polipeptídica, es decir, el orden en que están acomodados.

ESTRUCTURA SECUNDARIA.Cualquier segmento de una cadena polipeptídica y describe el arreglo espacial local de los átomos de la cadena principal sin tomar en cuenta la conformación de su cadena lateral o su interrelación con otros segmentos es estabilizada con puentes de hidrógeno.

ESTRUCTURA TERCIARIA.

Es el arreglo tridimensional de todos los átomos de una proteína. Los aminoácidos polares se sitúan en el exterior y los polares se internalizan. Tienen forma globular o fibrosa, estabilizados por puentes disulfuro, Van der Waals.

ESTRUCTURA CUATERNARIA.

Es la disposición espacial de las distintas cadenas polipeptídicas de una proteína multimérica, formando una unidad funcional, se estabiliza por puentes Hidrógeno e interacciones hidrofóbicas.

Lehninger ( 2014).

Estructura. Característica principal.

Primaria Orden en que están acomodados los aminoácidos.

Secundaria Arreglo espacial de la cadena principal estabilizada con puentes de hidrógeno como α-hélice y hojas plegadas.

Terciaria Arreglo tridimensional de todas los átomos de una proteína, tienen forma globular o fibrosa.

Cuaternaria Unión de dos o más proteínas para formar una unidad funcional.

Tabla 1. Comparación de estructuras proteícas.

Aminoácidos

Con grupo R No polar

Alifático: Gli, Ala, Pro, Val,Leu,Met, Ile

Aromático: Phe, Tir, Trp

Con grupo R polar

Carga:Positiva: Lis, Arg,HisNegativa: Asp, Glu

Sin carga: Ser, Thr, Cis, Asn, Gln

CLASIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS.

Aminoácidos con los que se lleva a cabo ésta práctica:

Fenilalanina: Glicina:

REACCIÓN DE SANGER.

En 1945 Frederick Sanger un bioquímico inglés propuso una reacción de gran sencillez y de una relevancia incalculable para la época, una sobria reacción de SNAr: empleando 2,4- dinitroflurobenceno y haciéndolo reaccionar con algún péptido (nucleófilo) en cuestión seguido de una hidrólisis ácida suave; de esta manera en 1953 pudo determinar la secuencia de los 51 a.a. que constituyen la insulina por lo cual fue galardonado con el premio Nobel de Química en 1958.

2,4,6-Trinitroclorobenceno

REACCIÓN CON 2,4-DINITROCLOROBENCENO.

● La reacción tipo Sanger consiste en emplear un reactivo muy parecido al DNFB, como lo es el DNClB ya que el mecanismo es el mismo.

● Se forma un intermediario de reacción (intermediario de Meisenheimer):

RESULTADOS. Reacción con Ninhidrina.

Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentre entre 4 y 8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso. Éste producto colorido (llamado púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia.

La coloración producida por la reacción con ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido.

• Identificar Cualitativamente diversos aminoácidos.

Aminoácido Color

L-fenilalanina Morado claro

L-prolina Amarilla

Glicina Azul fuerte

L-alanina Incoloro

Tabla 2. Reacción de ninhidrina con aminoácidos.

Imagen 1. Reacción de ninhidrina con aminoácidos. Reactivo de Ruhemann

• Identificar y observar la presencia de aminoácidos en rastros de huellas dactilares.

Al revelar las muestras dactilares con ninhidrina tenemos para ambos casos la presencia de restos delaminoácido fenilalanina.

Ésta técnica se utiliza en análisis forense ya que en lasmanos tenemos restos de aminoácidos, que al reaccionar con ninhidrina dan prueba positiva para huella dactilar.

Imagen 2. Revelado de huellas dactilares con ninhidrina.

CONCLUSIONES .

Por medio de una reacción de SNAr se pueden sintetizar derivados de 2,4-dinitrofenil-a.a, para ello es necesario elegir correctamente el tamaño del aminoácido, debe ser alifático y no tan complejo, con ellos se garantiza un mejor rendimiento. Además es posible identificar la presencia de restos de aminoácidos al reaccionar con ninhidrina y observando la coloración púrpura característica de aminoácidos que en su estructura presenten una amina primaria y amarilla aquellos que cuenten con una amina secundaría formando parte de su estructura.

GRACIAS POR SU ATENCIÓN, SUERTE EN EL EXÁMEN!

Fuentes de información:

https://www.uam.es/departamentos/ciencias/qorg/docencia_red/qo/l13/snar.html

Lehninger ( 2014).