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TECNICA DE SANGRADO EN ANIMAtES DE EXPERIMENTACION
PREPARACION DEllUGAR
Es importante mantener una antisepsia completa a 10 largo del muestreo, de
forma que todo pelo 0resto de piel superticial de encima de la vena" sea retirado, EI
metoda paraeliminar el pelo dependera de ta loca:lizad6n de la vena y de la especie
animal. EI pelo se puede eliminar a tirones, con tijeras curvas .0 can esquiladora.
Retirar el pelo a tirones puede realizarse ia;cilmente en los gatos y conejos sin causar
sufrimiento al animal. Las cremas depilatorias quimicas pueden aplicarse en zonasdificiles pero gener:almente no se recomiendan ya que pueden provocar reacciones en
la piel y contaminar las muestras .. Algunos animalestales como los gatos,. pueden
incomodarsecon el ruido produeido por las esquiiadoras electricas, Hay que tener en
cuenta tambiem, que las pieles de algunos animal'as, par ejemplo la de los conejos, son
finas y sensibles. No es recomendable afeitar con cuchiUa, jabon y agua ya que causa
mas dana a fa piel que el esquilar.
Las excepdiones dependeran de la experiencia del operador, de la soltura ala
hora de esquilar y elefecto que pueda causar en los ammales y de Ia calidad de :Ia
muestra requerida.. La zona rasurada 0 de ta que se ha retirado el pelo a tirones
debera ser limpiada con agua templada, a la que se Ie puede anadir un detergente adesinfectaote como la cetrimida. Estos agentes deberan ser posteriormente retirados
con agua para. evitar la contaminaci6n de la muestra. Et alcohol (etanol 70% en agua)
desenqrasaraefectivamente la piel de aquellasespecies en las cualeslasecrecion de
glcfmdulas sebaceas sea pronunciada (par ,ejemploenlas ovejas),.pero puede
contaminar una muestra de sangre 5 1 no se ie deja evaporar. Escasiimposible
producir una superfi.cie esteriJ y una Umpieza excesiva trastornaria el ecosistema
bacteriano natural de, defensa de, la piet La preparacion puede tener emonces et
efecto posterior de causar irritacion, deshidratacian de la prel e incomadidad del
animal. Para disminuir toda molestiaasociada a la puncion venosa, algunos cientfficos
han investigado recientemenieel 'Uscde cremas de anestesia local apJicadas sobre la
piel unos 30-60 minutos antes de tamar la muestra. Parecen ser beneficiosas en la
reduccian de las molestias en especies como conejos, perros y gatos pero no son tan
efectivas en ratas.
TOMA DE MUESTRA:
Habitualmente en losanimales grandes I:apuncion venosa se rea1lizasujetando
fisicamente al animal: y no es necesaria anestesia. A los animal'es pequenos se les.ea
a menudo un anestesjco de aeeien corta para manipularl.es con comodidad. Sin
embargo, se debe recordar que tales a.gentes pueden afectar los parametros29
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hematoloqicos y bioquimicos. A algunos animales tales como los perros y algunos
primates, se les puede entrenar para que presenten una extremidad para toma de
muestra sin recunir a ta anestesia 0 suiectorr flsica, Es importante realizar una
rnanipulacion suave pero firme, as! como tarnbien es importante el tiernpo empleado
en extraer la muestra. Ambos parametres pueden afectar alestres del animal y par
consiguientela calidad de la muestra y la exactitud de la investig.adon. Se podrla
considerar la posibilidad de ofrecer una recompensa despues de cada sangrado,
seguR las especies. EI animal debe estar suavemente sujeto por un manipulador
experimentado que, siempre que sea posible, debera ser conocido par los animales.
No hay tampoco que sobre valorar el papel clave desempenado por la persona que
sujeta al animal yevidencia lavena. La vena debe localizarse claramente (si se tienen
dudas, es mejor no hacerlo y buscar ayuda) y la puncion Uevada a cabo decididamente
mejor que con vacilaciones. Puede que el animal muestre signos de incomodidad
(jcomo nosotros!) par ejemplo, puede chillar, pero se Ie debe tranquilizar, tratandole
con suavidad y habltmdole. Puede que se necesite alguna presion proxima allugar de
oclusion del retorno venoso con el fin de obtener suficiente volumen de sangre. La
gata de sangre formada puede retirarse con un tubo capilar 0 con una micropipeta conpunta de plastico.
Despues de haber saeado la sangre, se debe mantener una presion suave pero
firme sobre ellugar durante unos 30 segundos, 1 0 que detendra rapidamente cuatquier
sangrado. Tarnbien hay varios preparados hernostancos de alginato de calcia, fibritlas
de colaqeno y esponja gelatinosa que pueden servir de ayuda si persists el sangrado.
EFECTOS ADVERSOSDE LA . TOMA DE MUESTRA
EI nivel correcto de sujecion, esel que permite tamar una muestra satisfactoria
al primer intento sin causar panico innecesario en el animal, en cuyo easo, otros
animales proxenos pueden atarmarse, 1 0 que Uevarfa a complicaciones tanto crentfficas30
Existen cuatro efectos adversos: hemorragias, hematomas, trombosis y estres
causados par una manipulaci6n inadecuada.. El tratamiento adecuada depende dellugar, de ta causa y del animal en particular.
La hemorragia debida a una hemostasia pobre, no es un problema habitual, a
menos que el animal tenga un defecto de coaqulacion yen algunos casas, una presion
suave continua durante unos minutes, puede ser todo 1 0 que se necesite para parar el
sangrado.
los hematomas se deben al sangrado subcutaneo en el momenta de la pURcien
venosa 0 son provocados por el propio animal al lamerse 0 rasearse una vez devuelto
a su jaula 0 corral .. Se debe controlar a t animal despues de unos 30 minutes y si es
necesario, tomar las medidas adecuadas ..
La trombosis (coagulo) y la flebitis (inflarnaeion de la vena), se producen
habitualmente par tecnicaa incorrectas 0 restos de una sustaneia irritante (por ejemplo
productos quimicos basados en alcohol) alrededer de la vena. Ocasionalmente
pueden ocurrir a consecuencia una auto-mutilaci6n.
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(por ejemplo, elevacion de I'a glucosa en sangre, presion sangulnea) como de
bienestar.
Otros problemas incluyen la infeccion del lugar de entrada de la aguja que
puede despues extenderse slstematicamente. Eli sangrado repetido, puede producir
flebitis y cicatrices que tambien pueden ocurrir, a consecuencia de intentos repetidosde punci6n venosa. La probabilidad de que esto ocurra, puede reducirse mejorando la
tecrnca (utilizando canulas introducidas permanentemente) y allemando las zonas de
muestra.
Es posible extraer sangre de la rnayorla de las especies con una variedad de
agujas de entre 10-50 mm de longitud yentre 15-27 G de calibre ..Asl, la extracci6n d esangre de la vena. yugular degrandes mamlferos,por ejemplo animales de granja"
petros, gatos y algunos primates podria IIevarse a cabo con una variedad de agujas de
entre 14-20 G x 25-40 mm. Para la extracci6n de sangre de la vena del rabo de una
rata a vena de la oreja en el conejo una aguja del orden de 23-26G x 10--20rnm podria
ser la mas apropiada. Cuando se muestrea repetidamente se debe utilizar una agujanueva cada vez. La direcci6n de la aguja es habituaJmente la del flujo sanguineo. Esto
puede variar segun la accesibitidad del fugar.
Tabla. 1: Sitios mas comunes y tamafio de agujas y jeringas para la extracci6n de
sangre por especie.
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VOLUMEN DE SANGRE A EXTRAER
Si se extrae mucha sangre rapidamente, 0 demasiado a menudo sin reponerla,
un animal puede entrar en un shock hipovolernico de corta duraci6n y a largo plazo
sufrir de anemia. La extracci6n de alrededor de 10% del volumen de sangre circulante
inieiara fos mecanismos homeostaticos coligemi,cos. Si seextrae entre el' 1'5-20 % del
volumen, se redueira el gasto cardfaco la presion sanguinea. La extracei6n de 3040%
puede indueir el shock hemomigico y una perdida de 40% puede causar una
mortalidad del 50% en ratas. Volumenes mas pequenos extraidos a intervalos
demasiado frecuentes provoearan anemia. Estos efeetos deberian aparecer raramente
y han de evitarse siempre que sea posible. Sin embargo, es fundamental poder
reeonocer los signos y sintomas de shock y de anemia y poder tamar Jas medidas
adecuadas.
Tabla 2 Vol' umen.'esangre crrcu atona en nlmaes
EspeeiesI,
Volumen de
sangre (mllkg)*
Pallo 60
Gerbo 67
Cabra 70
Cobayo 67-92
Hamster 78
Raton 78-80:
Conejo 44-70Rata 50-70
Oveja 60
d A" deLaboratorio.
* Temenda en cuenta que el ammal es madura, sana y con
una plan de notncron adecuada.
CONEJOS
Los conejos pueden ser sangrados por punci6n intracamiaca, por corte de la
vena marginal de la oreja y venipunci6n de la arteria central de la oreja
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( ( < ~ ~lIustraci6n 19. Localizaci6n de la vena marginal yarteria
central de la oreja en conejo.
VENA MARGINAL DE LA OREJA
Para Uevar a cabo este procedimiento, se debe inmovrlizar correctamente al
conejo, ya sea mediante una caja de sujecion para conejos 0envolverlo en un trozo de
tela 0 sabana, Una de las orejas de conejo se humedece con jabon y agua, y se
precede a rasurar la superfrcie superior del borde posterior, sobre " 8 vena marginal. La
vena debe observarse facilmente, si no esta visible caliente ta oreja coloeandola bajo
una lampara.
EI area rasurada se seca con alqodon, se eubre can vaselina y entonees se
practice una incision diagonal (angulo de 45°) sobre la vena marginal con una hoja de
bisturi. Inmediatamente despues de hacer el corte, se coloca el recipiente para
recolectar la sangre debajo de la misma. AI mismo tiernpo, ublizando los dedos indicey pulgar, se hace presion en la base de la oreja para oduir el retorno venoso. Si
posteriormente la sangre comienza a fluir can fentitud, hay que limpiar vigorosamente
la incision can algod6n para remover la sangre coagulada, 1 0 cual restablecera el flujo.
Generalmente no es necesario hacer un segundo corte. En un solo sangrado se
pueden obtener de 25 a 50 mt de' sangre de un conejo, y cantidades similares se
pueden colectara intervalos de cuatro semanas
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lIustracion 20: Toma de muestra mediante corte y goteo de
Javena marginal de fa.oreja en conejo
ARTERIA CENTRAL DE LA OREJA
EI rnejor rnetodo para extraer mayores cantidades de sangre del conejo es el
uso de la arteria de la oreja y un vacutainer de 50 cc. Con esta tecnica entre 30 a 40
cc de sangre pueden ser colectadas. El conejo debe estar bien sujeto y evitarse tos
hematomas. Una de las orejas de conejo se humedece con jabon yagua, y se procedea rasurar la superficie superior de la zona media, sobre la arteria central. EI area
rasurada se seca con algOO6n. AI, mismo tiempo, utilizando los dedos indice y pulqar,
se hace presion en la punta de la oreja para oeluir el f1ujo sanguineo, al Ifenarse la
arteria se procede a la introducci6n de la aguja en la arteria central de la oreja. La
aguja debe ser introducida dernro de la arteria a traves de la piel" en un angula de 20°.,
en un solo movimiento. Un suave tiron al e m bolo permite que la sangre fluya dentm de
la jeringa. Una vez obtenida la sangre necesaria,. se procede aliberar la presion digital
La aguj,a es retirada rspidarnente y se aplica presion digital allugar de la punci6n, en
forma simuftanea para evitar asi hemorragias 0 la formaci6n de un hematoma.
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Hustracion 21. Toma de muestra de sangre a partir de la arteria central de la oreja.
PUNC fON INTRACARO iACA
Se procede a inmovilizar al conejo en una superficie elevada. EI ayudante tomaal conejo por los miembros traseros con la mano izquierda, mientras sostiene con ta
mana derecha la cabeza y patas delanteras del conejo, deJando expuesta fa region
pectoral, facilitando el acceso al esternon. Se limpia la zona inmediata inferior al
manubrio del estem6ncon un algod6n empapado en alcohol. at 70%, procediendo
posteriormente a inserter una aguja calibre 21 de 3,75 cm en dicha zona, r o . mas cerca
posible del estern6n. Se diri.ge hacia el hombro derecho pudiendose sentir el latido
cuando atraviesa el coraz6n, en ese momento se procede a colectar la sangre
lentamente.
uustracton zz: Tecnlca de sujecion conayudante y punci6n intracardiaca en conejos
uustrecton 23: Tecnlca de sujeclonsln ayudante para realizar puncion intracardiaca en
conejos. Esta tecnica requiere de destreza y experiencia
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TECNICAS DE SANGRADO EN RATAS Y RATONES
PUNC.ON INTRACARDiACA
Mediante esta tecnica se pueden obtener grandes vohimenes de sangre el
animal, debe estar anestesiado y se recomienda utilizar esta tecnica unicamente como
procedimiento tenninaL
Se coloca el raton bien apoyado sobre el dorso, se ubica el apoflsis xifoides y se
inserta ta aguja perpendicular a la columna vertebral. Can una leve presion digital se
localiza el ventricuto; al punzar el corazon se siente el choque cardiaco. EI volumen
extraido de sangre dependera del peso del raton. Las medidas de las agujas son de
20a25G.
• I, l-L -
Uustraci6n 24: Metodo para la extracclon de sangre del
corazon de ratas mediante abordaje del apendice xifoides.
EI latido del corazon es palpado con el dedo y la aguja es
introducida pegada al dedo a traves del pecho en la camara
cardiaca como se muestra en la figura izquierda.
Tambien, previa anestesia inhalatoria, se puede proceder a colocar al roedor
sabre una tabla de trabajo que pennita la sujeci6n de las cuatro patas y faciHte la
exposlcion del esternon. Se limpia la zona costal, izquierda can un al'god6n empapado
en alcohol al 70%. procediendo posterionnente a insertar una aguja calibre 21 de 1,25
em en el costado Izquierdo dell anima.I, a,traves del tercer 0 cuarto espacio intercostal,.
arriba del arco costal, 1 0 mas cerca posible del estemon. Se dirige hacia el hombro
derecho pudiendose sentir el latido cuando atraviesa el corazon, en ese momenta se
precede a col.ectar la sangre lentamente. Mediante esta tecruca puede obtenerse
aproximadamente 5 ml de sangre de una rata de 250 9 a intervalos de dos semanas.
La extracci6n debe ser lenta y la cantidad limitada a menos que se decida la eutanasia
del animal.
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Itustracion 25: Metodo para la extracci6n de sangre del coraz6n en rata a traves del tercer 0
cuarto espacio intercostal, arriba del arco costal. La aguja es introducida 10mas cerca posible
del estern6n. Se dirige hacia el hombro derecho pudlendose sentir el latido cuando atraviesa el
corazon,
PLEXO RETRO-ORBITAL
Esta tacrnca aunque es muy usada no esta recomendada y requiere una particular
justificacion dado 10 agresivo de la misma. Implica pinchar el sena venasa orbital
detras del globa del ojo y se conoce de diferentes maneras como retro-orbital,. peri-
orbital, orbital posterior y sangrado del plexo venoso orbital.. En manos expertas
puede ser un metoda util para obtener vohimenes mayo res de los que se pueden
obtener de la vena de la cola. Es una tecnica que puede tener severas consecuencias
para el anhnal par 1 0 que no se recornienda et usa del sangrado del seno orbital can
recuperacion del animal mas que en circunstancias excepcionales cuando no haya
ning;(m otro metodo disponible.. Esta tecnica no es aceptable mas que como
procedimiento terminal baio anestesla.
Cuando se extraiga sangre del raton, la rata y el hamster de la peri6rbital del
oio, el tuba capitar se coloca en la mayor de las estructuras venosas arbitales. La
extraecion de sangre en el sena orbital del ra ton requiere que et tubo capilar entre
directamente en el sinus orbital. Los animates se anestesian antes de realizar este
procedimiento. La sangre se colecta insertando un tubo capilar heparinizado 0 la punta
de una pipeta Pasteur en el angula anterior del ojo, girando suavemente para que los
capilares sean rotos contra el hueso. Empleando este metodo pueden obtenerse entre
0,.4rnl y 0,6 rnl de sangre a rntervalos de una ados semanas
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llustraeten 26: Puncion retroorbitat en roedores empleando el extremo
ca,pilar de una pipeta Pasteur
Cuando se usa en hamster, el tubo capilar es colocado en el caudal del sinus
orbital. En la rata. se faciHta cuando el tubo capilar se coloca encima del globo ocular y
se alcanza la vena mayor entre la mas profunda y la vena superfi:ci'at de la orbita EI
conocer la ubicacion de las estructuras venosas del raton, la rata y el hamster ayuda al
exito de la tecnica. Es obligatoria la anestesia en toda tecniea de extraccicn de sangre
periorbital,
VENA DE LA COLA
Los rnetodos que impliquen el cortar la eolia repetidamente deben evitarse, ya
que actualmente es posible obtener canulas y agujas del tarnano correcto para
practicarnente todas las especies. Para obtener muestras de sangre de la vena de la
cola se utifiza et mismo metoda que para la administraci6n intravenosa mencionadaanteriormente.
Enel raton la toma de muestra de sangre de la cola esUtiI para hematocrlto,
conteos celulares y hemoglobina. La cola debe ser calentada en agua a 40 - 50°C. EI
animal debe ser anestesiado antes. Despues de la desinfeccien de la cola, 1 a 2 mm
de la punta de la cota pueden cortarse y la sangre recogida. Sf la sangre no sale, se
puede "ordenar" la cola.
llustraclon 27: Sangrado mediante abordaje de la vena
lateral de la cola en roedores
La utilizacion de las almohadfllas plantares para la obtencion de sangre no es
aceptable debido a la sensibilidad de la zona y el riesgo de infeccion, ya que los
Animales de Laboratorio habitualmente se guardan cerca, a en techos contaminados
por orina y heces. La infeccion puede causar cojera y sufrimiento innecesario.
TECNrCAS DE SANGRADO EN AVES
EI volumen de sangre que tiene cada ave varia mucho en funcion de la especie.
Cuanda tratamos con especies de pequeno tamano, debemos de catcular que el
volumen total de sangre supone entre un 7 y un 10% del peso del animal. En un pajaro
sano, que no este anernico, la cantidad maxima de sangre que podemos extraer
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oscsara entre el 7-10% del volumen sanguineo, 1 0 que supone un 0,5-1% del peso
total del animal (Tabla 3).
Tabla 3: Ejemplo practice paracalcular el volumen de
sangre que podemos extraer a un loro sano.
- P e.so dellorb: 400 9
-Volumen total de sangr~ = = 7-10%, de 400 9 ~ 28-40 ml
- Volumen de sangre:a exrraer no excedera eI7-1O%
d'e 2B-t IO ml = 2-4 mI de sangre
VENA MEDIAL METATARSAL
Cuando queremos obtener un volumen pequeno de sangre, 1 0 podemos obtener
de, fa vena medial metatarsal en aves de tamano media 0 grande. Esta vena se
localiza facilmente en fa parte medial dela articulaci6n metatarsal (Uustracion 28). A
pesar de que la vena esta protegida por los musculos adyacentes, 1 0 que minimiza la
formacion de grandes hematomas, hay que ejercer cierta presion sabre Lazona para
evitar que sangre.
lIustraci6n 28: Punci6n de la vena medial metatarsal
VENA YUGULAR
Cuanda queremos obtener un volumen grande de sangre as preferible utHizar la
vena yugular. En la mayoria de las especies la yugular derecha es mayor que laizquierda y se visualiza facilmente par debajo de la piel. En especies pequefias, una
misma persona puede sujetar ai' animal y extraer la sang're. En aves de mayor tamano
seran neeesarias dos personas, una inrnovilizara al animal y Ie estirara el cuello,
estabilizando la vena y ejerciendo presion con at dedo para ingurgitarla (Uustraci6n
29).
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)/
___ ~ __ ./ A. or "
Fig. 2. Puncion de la vena yuqu lar.
Uustraci6n 29: Punci6n de la vena yugular
VENAS MEDIAL METATARSAL Y CUTANEA CUBITAL
La apllcacion de alcohol sobre la zona de puncion perrmtira visualizar mejor la
vena. Tras la extracci6n de la sangre, el ayudante ejercera presion sobre ta zona para
evitar la formaci6n de hematomas, que suponen un gran riesgo sobre todo en aves de
pequeno tarnano. No esta indicada la punci6n en vena yugular cuando el buche esta
muy neno 0 su contenido es muy ftuido, para evitar que el anima.1regurgtte y pueda
pasar eli alimento a vias respiratonas. En aves de tarnano medio y grande' se pueden
utilizar otras dos venas para abtener sangre, la vena medial metatarsal y la eutanea
cubital. Esta ultima discurre par la cara ventral del codo y es muy superficial.por 1 0 que
su localizacron es sencilla (Uustraci6n 30).
lfustraci6n 30: Punci6n de la vena cutanea cubital.
La vena braquial del ala es aceptable para extraer la muestra de sangre de las
aves de mas de cuatro semanas de edad. En las aves mas j6venes las venas son
demasiado pequenas para una extraccron de sangre eficiente. Ef punto de penetracion
de la aguja debe ser cabal en medio entre el coda y las coyunturas del hombro. La
punta de fa aguja debe apuntar hacia la punta del, ala para tamar ventaja del hecho
que la sangre corre de regreso hacia et corazon, 1 0 cual facitita la extracci6n de sangre
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en la jeringa. Es cornun que se forme un hematoma 0 un coagulo de sangre en el area
de la inyeccion. Cuando se saque la aguja de la vena, la presion can eJdedo sobre eli
sitio de la inyeccion promovera una coagula cion rapida.
~~
I/\.
~~ ~~ ~ ~ B
llustraclon 31: Sujecion y abordaje de la vena braquial del ala en aves. A.- Sujecion de
la cabeza del ave entre las alas. B.- Obtenclon de la muestra sanguinea por abordaje
de la vena. braquial
La punci6n de la vena del ala con una navaja de escarapelo es un metoda muy
facil y probablemente el mas rapido para obtener sangre de la vena del ala. Se debe
cortar la vena braeuial justamente arriba de la coyuntura del codo. Se debe usar un
tubo para guardar la sangre mientras esta sale par la cortada. La utilizacion de este
metoda puede resultar en una muestra contaminada con bacteria 0 con moho. Se
puede correr el riesgo de daf'iar fa vena braquiat y el nervio.
PUNcrON INTRACAROiACA
Para una punci6n intracardiaca se necesitan agujas de calibre 18 a 20 de 1 ~
pulgadas.
Puncion cardiaca - metoda anterior. Es un metodo efectivo y rapido para
extraer sangre. Se corre el riesgo de causar una hemorragia. fatal. Se usa para obtener
un gran volumen de muestras de sangre (4 a 10 rnt.). Este rnetodo es aceptable para
aves j6venes y adultas. La posicion apropiada del ave es recostada con la cabeza
extendida. Usando el dedo indice como guia, la aguja es introducida en la cavidad
toracica en el punto mas alto de la V invertida que se forma par la clavicula ..La aguja
se mantiene en el mismo plano que el esternon y con un angulo hacia atras de la cola.Normalmente seintroduce la aguja completa (1 % pulgadas) antes de 11egaral corazon
mientras se introduce la aguja se apUea una presion negativa ligera. Cuando ta aguja
esta en mala posicion, sin estar en el mismo plano del esternon, entonces entra en el
tracto respiratorio del ave y entra aire en la jeringa, resultando en fa muerte por
hemorragia en el tracto respiratorio.
Punci6n cardiaca - rnetodo lateral. Un rnetodo alternativo a la punci6n
intracardiaca es par media de la pared izquierda del torax, Se debe acostar el ave
sabre su costado derecho, tornando las dos patas con una sofa mana y las dos alas
can la otra. Las marcas son sefialadas por los canales que se forman a la orilla del
musculo pectoral. EI punta para introducir ta aguja es de aproximadamente 2 pulgadas41
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verticales del punta del esternon. Se sastiene la aguja a un cingula de 90° del plano del
esternon, La posicion adecuada del ave es esencial para obtener resultadoscansistentes can este metodo,
lIustraci6n 32: Punci6n intra.cadiaca: A.- Metodo anterior. B.- Metodo lateral
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