EL DESAFÍO DEL PNEUMOVIRUS AVIAR

Ing. Miguel ChaleAvda. La Selva 135

Girona – Españamcv@hipra.com

Temario

1. Pneumovirus aviar: La enfermedad

Características, Subtipos, Transmisión,

Patogénesis, Agentes secundarios

2. APV en ponedoras

3. APV en reproductoras

4. APV en broilers

5. Diagnóstico

6. Vacunación

Pneumovirus Aviar (APV)

SHS – Síndrome de cabeza hinchada

TRT – Rinotraqueítis del pavo

ART – Rinotraqueítis aviar

MPV – Metapneumovirus aviar

Síndromes y sinónimos

Clasificación de APV

FAMILIA:PARAMYXOVIRIDAE

SUBFAMILIA:PNEUMOVIRNAE

GENERO: PNEUMOVIRUS

VRS VirusesMouse pneumovirus

GENERO:METAPNEUMOVIRUS

Pneumovirus aviar (APV)Metapneumovirushumano (hMPV)

Fusión & Penetración (F) Membrana Lipídica

Adhesión (G)

Matriz

Complejo RNP

Características del Pneumovirus

Subtipos

• 1 Serotipo

• Cuatro subtipos descritos: (Moabs – Seq proteína G )

- A

- B

- C: USA (pavos) y Francia (patos)

- D: Francia (patos)

• Cepas de origen pavo son, menos patogénicas para

pollos y gallinas, pero cepas de gallinas y pollos son,

usualmente, también patogénicos para pavos

Europa, Asia, África, América (exc. EEUU), Medio Oriente

Se puede confundir con otras enfermedades:

• Escherichia coli• Ornithobacterium rhinotracheale (ORT)• Mycoplasmosis (MG/MS)• Pasteurella multocida

• Bronquitis infecciosa (BI)• Enfermedad de Newcastle (ND)• Influenza aviar (IA)

Pneumovirus Aviar (APV)

Transmisión

1) Horizontal • Contacto directo e indirecto• Rápidamente dentro de la manada• El virus es eliminado por cornetes nasales y tráquea• Transmisión aérea es altamente efectiva• Una valla puede retrasar la difusión del virus (ave a

ave)• Persistencia corta: 5-8 días

2) Vertical?• Virus encontrado en tracto reproductivo (epitelio

oviducto)• Se encontraron pavos de 3 días positivos por PCR

(Subtipo C)• No hay reportes de transmisión al huevo

Patogénesis

Replicación en el tracto respiratorio alto

APV A o B: Entrada (Oculo-nasal)

Lesiones en epitelio (Pérdida de cilios)

Consecuencia: Signos clínicos

Infección de macrófagos/viremia

Desarrollo de respuesta inmune

Inmunidad celular(Persistencia corta)

Inmunidad humoral(Persistencia larga)

Distribución por diferentes órganos

Limpieza del virus y recuperación

Ag. Secundarios (E. Coli, etc)

Patogénesis

Tiempos

24 horas PI en cornetes nasales y tráquea

96 horas: completa deciliación de tráquea

Signos clínicos se presentan luego de que el virus ya

no se encuentra en ave

Aislamiento sólo hasta aprox. 10 días PI

Daño de mucosa en cornetes nasales

Patogénesis

Agentes secundarios

• E. Coli O2, O8, O78

• APV + E. Coli Lesiones

• Pasteurella multocida

• Mycoplasma gallisepticum

• ORT

• APV + ORT Lesiones

Alta interacción con agentes secundarios

250 muestras positivas a APV

Factores que exacerban

APV

Higiene

Ventilación

Multiedad

Bioseguridad

Densidad

Cama

Estacionalidad de APV

Granjas con APV entre los años 1998-2000 en EEUU (Nezworski, 2002)

Primavera Verano Otoño InviernoInvierno

0

5

10

15

20

25

Jan Feb Mar Apr May Jun Jul Aug Sep Oct Nov Dec

Núm

ero

de g

ranj

as

1998

1999

2000

media

APV en ponedoras

Signos clínicos en ponedoras comerciales

Afinidad por tracto respiratorio y

reproductivo

Caída de producción 5-40%

Problemas de calidad de huevo

Edema facial

Descarga nasal

Virus se difunde por jaulas

Ponedoras: Cae producción

Resumen de lotes afectados por APV

0102030405060708090

100

1 4 7 10 13 16 19 22 25 28 31 34 37 40 43 46 49 52 55 58 61

7 lotes de ponedoras

685 muestras de sueros de 54 lotes

Edad de seroconversión

EDAD (Semanas)

Núm

ero

de lo

tes

Peritonitis

Calidad de huevo

Color de cáscara

Fragilidad de cáscara

Huevos sin cáscara

Porcentaje variable

APV en reproductoras

Signos clínicos en reproductoras

Se produce entre las 24-52 semanas

Caída de postura e incubabilidad

Signos clínicos: Opistótonos/torticolis

Postración y somnolencia

Edema facial

Oídos con exudado amarillento

Opistótonos

APV en broilers

Signos clínicos en broilers

Se produce sobre 4-6 semanas

Edema facial uni o bilateral (1-2% total)

Ronquera

Estornudos

Ojo acuoso

Descarga nasal

Postración

Los más afectados son los mejores machos de la

manada

APV en pavos

Signos clínicos en Pavos

• Especie más sensible

• Ojo acuoso

• Conjuntivitis

• Edema facial uni o bilateral

• Signos respiratorios: Exudados nasales serosos

• Morbilidad es alta (100%)

• Mortalidad es variable (10-15%)

Diagnóstico de APV

Diagnóstico

Clínico

Inmunoquímico

Aislamiento vírico

Molecular

Serología

Diagnóstico clínico

Signos clínicos similares con otras enfermedades de

tipo respiratorio (coriza, CRD, Pasteurella, ORT)

Correcto diagnóstico diferencial es un deber: Coriza

infeccioso

Diferentes circunstancias clínicas:

Signos clínicos > APV

APV > Signos clínicos

Inmunofluorescenciadirecta

(IF)

Streptavidin biotinInmunoperoxidasa

(IP)

Métodos inmunoquímicas

Aislamiento viral

Difícil de material de campo.

El virus se elimina rápidamente.

Recogida de muestras antes de que

aparezcan los signos clínicos.

Recogida de muestras del tracto respiratorio

superior (cornetes y tráquea)

Cook and Cavanagh, AP, 2002, pp 117-132

Aislamiento viral

0

1

2

3

4

5

6

7

1 2 3 4 5

Días postinfección

1 3 5 7 10

Signos clínicos

Cornetes

Tráquea

Pulmones

RiñonesViru

s/gr

de

tejid

o

Aislamiento viral

Recolección de muestras

4. Dejar secar la tarjeta 40 minutos

1. Realizar el corte sagital 2. Exponer la parte interna del cornete

3. Estampar el cornete nasal

RT-PCR

Primers específicos A & B

Técnicas moleculares

Subtipo BMuestra de campo

Subtipo AControl positivo

Subtipo BControl positivo

Persistencia de Subtipos A y B en tejidos

Estudio propio

Aung, 2006

1 3 6 8 10 14 17 21Escobillon + + + + + - - -Cornetes + + + + - + - -Escobillon + + + + + + + -Cornetes + + - + + - + +

Días post-infecciónTejido

Subtipo A

Subtipo B

APV

APV-A APV-B APV-A APV-B APV-A APV-BCornete nasal + + + + - -Glándula de harder + + + + - -Tráquea - + + + - +Pulmon - - - + - -Bazo - - - + - -Bolsa de Fabricio - - - + - -

Tejido3 días PI 6 días PI 11 días PI

Serología

Seroneutralización (SN)

Inmunofluorescencia indirecta (IIF)

Elisa: Mayoría de los Kits ELISA dan positivo después de 10

días post-infección.

Lotes vacunados con vacuna viva proveen bajos títulos

ELISA, debido a que la inmunidad celular juega un rol

importante en la protección (Cook, 1989; Williams,

1991; Jones, 1996)

Pneumovirus en reproductoras 28 semanasPlan vacunal utilizado: 1 vacuna viva -12 semanas / 1 inactivada -18 semanas

Pneumovirus en reproductoras 38 semanasPlan vacunal utilizado: 1 vacuna viva -12 semanas / 1 inactivada -18 semanas

Pneumovirus en reproductoras 48 semanasPlan vacunal utilizado: 1 vacuna viva -12 semanas / 1 inactivada -18 semanas

Pneumovirus en reproductoras 63 semanasPlan vacunal utilizado: 1 vacuna viva -12 semanas / 1 inactivada -18 semanas

Cinética del pneumovirus en reproductoras

1 vacuna viva (12 semanas) 1 inactivada (18 semanas)

0

2000

4000

6000

8000

10000

12000

14000

16000

18000

28 38 48 63

Pneumovirus en broilers

Broilers vacunados 1 día de edad

Pneumovirus en broilers

Broilers infección de campo

Pneumovirus en ponedoras

Títulos vacunales obtenidos en gallinas ponedoras SPF

0

5.000

10.000

15.000

20.000

25.000

30.000

Inactivada Subtipo A (33 dpv) Inactivada Subtipo B (51 dpv) Viva subtipo A (21 dpv) Viva subtipo B (21 dpv)

Biochek Civtest-Hipra Idexx

Vacuna dpv Biochek Civtest-Hipra IdexxInactivada Subtipo A (33 dpv) 33 15.923 5.693 10.134Inactivada Subtipo B (51 dpv) 51 18.764 16.434 26.026Viva subtipo A (21 dpv) 21 1.540 635 2.906Viva subtipo B (21 dpv) 21 8.805 8.194 12.016

Incidencia de APV

Estudio basado en muestras recibidas en el serviciodiagnóstico de HIPRA (DIAGNOS)

POSITIVAS 54%

NEGATIVAS 46%

600 muestras

Control de APV

Claves de manejo

Calidad de aire

Correcta ventilación

Temperatura

Vacunación temprana

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

1800

2000

2200

2400

2600

2800

3000

3200

3400

3600

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 560

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

110

120

130

140

150

160

170

180

Gramos de alimento/ave/día

Peso corporal(Gramos)

Mortalidad acumulada(%)

Mantener observadas:

• Arranque

• Manejo de camas

• APV Vacunación

APV - Vacunación

Vacunas: Hechos

Anticuerpos maternales no protegen contra

infecciones de campo

Muestra baja respuesta serológica, pero una buena

eficacia

Inmunidad es principalmente celular, aunque también

tiene inmunidad humoral

Importancia de vacunas homólogas origen pollo para

pollos y gallinas

Vacunas: Hechos

Vacunas con cepas Subtipo B y Subtipo A dan

protección cruzada entre ellas.

Vacunas subtipo C no protegen contra subtipos B o A

Vacunas vivas protegen signos clínicos

Vacunas inactivadas protegen caídas de postura

Vivas + inactivadas: previenen signos clínicos y caída

de postura.

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

3,5

4

3 4 5 6 7 8 9 10

MDA -MDA +

Punt

uaci

ón d

e si

gnos

clín

icos

Días postinfección

Anticuerpos maternales no protegen

Vacunas: Hechos

Puntuación de signos clínicos: 3 semanas PI

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

1 2 3 4 5 6

Días postinfección

Vacunas: Hechos

Vacunadas

Control

Punt

uaci

ón d

e si

gnos

clín

icos

0102030405060708090

100

25 26 27 28 29 30 31 32

VivaViva+InctInactivadaControl

Edad (semanas)

Producción de huevos - IV inoculación de gallinas

Vacunas: Hechos

infección

0102030405060708090

100

25 26 27 28 29 30 31 32

Control

Viva

Viva+Inct

Inactivada

% huevos sin cáscara

Edad (semanas)

Infección

Vacunas: Hechos

Calidad de cáscara antes y después de desafío con APV

Administrado vía spray para protección inmunidad

local

Separada de otras vacunas respiratorias para

evitar la interferencia como es el caso de vacunas

de ND (Ganapathy, 2005) y BI (Jones, 1998;

Cook, 2001)

Protección cruzada entre Subtipos B y Subtipo A

Vacuna viva

Administración – Intramuscular

Protección contra caída de producción, calidad

del huevo e incubabilidad

Protección cruzada entre Subtipos B y Subtipo A

Vacuna inactivada

Programa vacunal

Primovacunación Viva

RevacunaciónViva

Baja incidencia 7 días ---

Alta incidencia 7-10 días 18-22 días

Broilers

Resultados de campo en broilers

Zona alto desafío

38-39 DMES Llegada Salida Mort % Peso IC EF Llegada Salida Mort % Peso IC EF

may-09 595.100 552.840 7,10 2,08 1,9 267,8 897.250 852.126 5,03 2,16 1,8 292,2jun-09 460.600 421.724 10,39 1,92 2,0 226,2 161.050 151.250 6,09 2,27 1,8 302,0jul-09 392.200 370.576 5,51 2,11 1,8 284,0 1.054.373 997.571 5,39 2,18 1,7 307,5ago-09 664.200 591.940 10,88 2,01 2,0 229,7 903.370 855.898 5,25 2,35 1,8 315,4sep-09 594.600 556.810 6,36 2,13 1,9 270,6 605.850 565.166 6,72 2,32 1,9 295,2Media 2.706.700 2.493.890 8,0 2,1 1,9 255,7 3.621.893 3.422.011 5,7 2,3 1,8 302,5

No vacunados Vacunados vacuna viva

Programa vacunal sugerido

Reproductoras pesadas y ponedoras comerciales

PrimovacunaciónViva

RevacunaciónInactivada

10 – 12 semanas 18 – 20 semanas

Reproductoras: eficacia de diferentes programas

0,0

10,0

20,0

30,0

40,0

50,0

60,0

70,0

80,0

90,0

100,0

23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62

Weeks of age

SHS-SHS % Laying

SHS-TRT % Laying

SHS-SHS % Fertility

SHS-TRT % Fertility

SHS-SHS % Hatchability

SHS-TRT % Hatchability

Reproductoras: Prueba de campo en área endémica

Número de manadas

(Media 10.000)

Prog. De Vacunación Sin TRT Con TRT

105Inactivada 18 sem.

82.8 % 17.2 %

20 Viva 12 sem. e Inac. 18 sem. 95 % 5 %

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66 68 70 72

% se

man

al d

e pu

esta

Semanas de edad

% de puesta

SHS TRT

SHS SHS

Ponedoras: eficacia de diferentes programas

0

50

100

150

200

250

300

350

20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66 68 70 72

Núm

ero

de H

uevo

s/A

ve

Semanas de edad

Producción Acumulada

SHS TRT

SHS SHS

Ponedoras: eficacia de diferentes programas

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66 68 70 72

Núm

ero

de A

ves

Semanas de edad

Mortalidad Acumulada

SHS TRT

SHS SHS

Ponedoras: eficacia de diferentes programas

Resumen de factores importantes

Diagnóstico adecuado es un deber

Estudio de interacción con otros patógenos

respiratorios

Bioseguridad y buenas prácticas de manejo

(ventilación)

Evaluación de costo/beneficio de vacunación

Selección de vacuna y programa de vacunación

Administración adecuada de vacuna es crítica

EL DESAFÍO DEL PNEUMOVIRUS AVIAR

Ing. Miguel ChaleAvda. La Selva 135

Girona – Españamcv@hipra.com