Fermentación en estado sumergido para la obtención de enzimas, utilizando los hongos Trichoderma sp y

Aspergillus sp

Xiomara Cogollo LópezProfesional en acuicultura

Darío González R.Ingeniero Agropecuario

Maestría en BiotecnologíaCohorte 7

Universidad de Córdoba2014º

• Las enzimas tienen numerosas aplicaciones en la industria de alimentos y bebidas.

Se utilizan para transformación y producción de aromas y de productos

intermedios. Se emplean varias enzimas microbianas en la industria de alimentos

tales como: α y ß amilasa, proteasas, Invertasa, pululanasa, glucosa-isomerasa,

dextranasa, lipasa, lactasa, amiloglucosidasa, glucosa-oxidasa, Pectinasa y otras .

• Las enzimas pectolíticas se utilizan en la industria de alimentos para clarificar

néctares y obtener más volumen de producción, aumentando en un 25% por cada

tonelada tratada de materia prima (frutas).

Amiloglucosidasa

Pectinasa α amilasa

El hongo Aspergillus pertenece a la clase Deuteromicetos es decir

que carecen de esporas sexuales. Al orden Moniliales lo cual indica

que presentan micelio claro y sin coloración o con un coloreado débil.

El género Aspergillus es abundante. Muchos de ellos son los

responsables de ciertas alteraciones alimenticias y otros útiles en la

preparación de algunos alimentos.

Es un hongo que se encuentra de manera natural en un número importante de

suelos agrícolas y otros tipos de medios. Pertenece a la subdivisión

Deuteromicetes, la cual se caracteriza por no presentar un estado sexual

determinado.

Antagonista de patógenos vegetales que se encuentra presente en la mayoría de

los suelos. Activa el crecimiento radicular de las plantas, es capaz de colonizar y

crecer en las raíces a medida que éstas se desarrollan y aumenta la resistencia

del cultivo frente al ataque de posibles patógenos

Solución de esporas

Inducción a la producción de enzimas

Medio líquido + pectina comercial

5 días a 150 rpm

Maceración

Centrifugación

Sobrenadante

Actividad de la poligalacturonasa (DNS)

Pectina comercial

Pectina nativa

Complejo enzimático + pectina comercial

0,1ml

Espectrofotometría 540 nm

DNS

Incubar 1 y 2 horas

Figura 1. Curva de absorbancia para fermentación de azucares reductores

y=0,5856x-0,0294R²=0,99989

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4

AB

S

concentración

CURVADNS

Grupo Microorganismo Peso(gr)

1 BiomasaAspergillussp 0,17

2 BiomasaAspergillussp 0,16

3 BiomasaTrichodermasp 0,59

4 BiomasaTrichodermasp 0,72

GRUPO 1 ABSORBANCIA

(1 HORA)

ENZIMA (1

HORA)

ABSORBANCI

A (2 HORA)

ENZIMA (2

HORA) PECTINA NATIVA + COMPL ENZIM

CMCIAL

1,754 3,0454 1,338 2,335

PECTINA CMCIAL + ASPERGILLUS 1,774 3,0796 1,417 2,4699

PECTINA NATIVA + ASPERGILLUS 0,232 0,4464 0,114 0,2449

GRUPO2 PECTINA NATIVA + COMPL ENZIM

CMCIAL

1,537 2,6749 1,465 2,5519

PECTINA CMCIAL + ASPERGILLUS 1,394 2,4307 1,383 2,4119

PECTINA NATIVA + ASPERGILLUS 0,093 0,209 0,113 0,2432

GRUPO3 PECTINA NATIVA + COMPL ENZIM

CMCIAL

0,398 0,539 0,286 0,73

PECTINA CMCIAL + TRICHODERMA 0,105 0,349 0,175 0,23

PECTINA NATIVA + TRICHODERMA 0,058 0,236 0,109 0,15

GRUPO4 PECTINA NATIVA + COMPL ENZIM

CMCIAL

0,233 0,4481* 1,633 0,8154*

PECTINA CMCIAL + TRICHODERMA 0,135 0,2807* 0,753 0,5296*

PECTINA NATIVA + TRICHODERMA 0,351 0,6496* 0,163 1,1595*

Tabla 2. Técnica de DNS

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

1 2

Co

ncen

tració

n (

mg

/ml)

de a

zu

care

s r

ed

ucto

res

Tiempo (horas)

PECTINA COMERCIAL+ HONGO

Aspergillus sp

Aspergillus sp

Trichoderma sp

Trichoderma sp

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

1 2

Co

ncen

tració

n (

mg

/ml)

de a

zu

care

s r

ed

ucto

res

TIEMPO (HORAS)

PECTINA COMERCIAL + COMPLEJO ENZIMATICO

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

1 2

Co

ncen

tració

n (

mg

/ml)

de a

zu

care

s r

ed

ucto

res

Tiempo (horas)

PECTINA NATIVA+ HONGO

Aspergillus sp

Aspergilllus sp

Trichoderma sp

Trichoderma sp

La diferencia entre los tratamientos evaluados

con pectina nativa, pectina comercial y enzima

mas la enzima comercial , pudo deberse

principalmente a la actividad metabólica del

hongo y al efecto de la interacción entre los

factores (pH, temperatura, aireación,

contaminación y manipulación)

La actividad de la pectina para los

cuatro casos, fue mayor en la

primera hora de evaluación, debido

a la concentración de sustrato que es

superior en comparación a la del

segundo tiempo asumiendo la

actividad enzimática.

En la segunda hora donde se evaluó el

Aspergillus sp, la concentración disminuyo

mientras que en el grupo 4 donde se

evaluó Trichoderma sp, la concentración

aumento en la segunda hora, hallándose

diferencias entre microorganismos en el

mismo sustrato.

Aspergillus sp

Trichoderma sp

GRACIAS