DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTATORIO Dra. Dolores Lozano Arana LABORATORIO DE FIV

DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTATORIODIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTATORIO

Dra. Dolores Lozano AranaDra. Dolores Lozano Arana

LABORATORIO DE FIV LABORATORIO DE FIV UNIDAD CLÍNICA DE GENÉTICA Y REPRODUCCIÓN UNIDAD CLÍNICA DE GENÉTICA Y REPRODUCCIÓN HHOSPITALES OSPITALES UUNIVERSITARIOSNIVERSITARIOS VIRGEN DEL ROCÍO VIRGEN DEL ROCÍO

SEVILLASEVILLA

DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTATORIODIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTATORIO

Dra. Dolores Lozano AranaDra. Dolores Lozano Arana

LABORATORIO DE FIV LABORATORIO DE FIV UNIDAD CLÍNICA DE GENÉTICA Y REPRODUCCIÓN UNIDAD CLÍNICA DE GENÉTICA Y REPRODUCCIÓN HHOSPITALES OSPITALES UUNIVERSITARIOSNIVERSITARIOS VIRGEN DEL ROCÍO VIRGEN DEL ROCÍO

SEVILLASEVILLA

DefiniciónDefinición

Análisis genético de los Análisis genético de los prepreembrionesembriones obtenidos obtenidos por por técnicas de fecundación in vitro antes de técnicas de fecundación in vitro antes de ser transferidos al útero.ser transferidos al útero.

1990 (1990 (Handyside et alHandyside et al) primer embarazo tras ) primer embarazo tras PGD.PGD.

Consorcio para PGD (ESHRE)Consorcio para PGD (ESHRE)

Diagnóstico Genético PreimplantatorioDefinición

ObjetivoObjetivo

Ofrecer una Ofrecer una opciónopción reproductiva a familias reproductiva a familias

con con alto riesgoalto riesgo de transmitir enfermedades de transmitir enfermedades

de base genética a su descendencia.de base genética a su descendencia.

Diagnóstico Genético PreimplantatorioObjetivo

ParejasParejas Historial reproductivo particular:Historial reproductivo particular:

- Hijo afecto- Hijo afecto- IVE- IVE- Conocimiento exhaustivo de su- Conocimiento exhaustivo de su patologíapatología

Opciones:Opciones:

- No tener hijos - No tener hijos biológicos/Adoptar/Donación biológicos/Adoptar/Donación

gametosgametos- Diagnóstico prenatal - Diagnóstico prenatal - PGD- PGD

PGDPGDvsvs

Diagnóstico PrenatalDiagnóstico Prenatal

Diagnóstico Genético PreimplantatorioObjetivo

TiposTipos

PGD de alto riesgoPGD de alto riesgo..

PGD de bajo riesgo.PGD de bajo riesgo.

Diagnóstico Genético PreimplantatorioTipos

PGD de alto riesgoPGD de alto riesgo

Parejas con elevado riesgo de transmitir Parejas con elevado riesgo de transmitir anomalías cromosómicas o genéticas a sus anomalías cromosómicas o genéticas a sus hijos.hijos.

Autosómicas recesivasAutosómicas recesivasFibrosis quísticaFibrosis quísticaAtrofia muscular espinalAtrofia muscular espinal

Ligadas a XLigadas a X HemofiliasHemofiliasDM DuchenneDM Duchenne

Autosómicas dominantesAutosómicas dominantesCorea de HuntingtonCorea de HuntingtonDistrofia miotónica Distrofia miotónica

Anomalías cromosómicas Anomalías cromosómicas estructuralesestructurales

PGD alto riesgo

Diagnóstico Genético PreimplantatorioPatologías

PGD bajo RIESGO (PGS ó PGD-AS)

Parejas infértiles en tratamiento de FIV para Parejas infértiles en tratamiento de FIV para mejorar tasas de gestación.mejorar tasas de gestación.

Edad avanzada (>37 años)Edad avanzada (>37 años) Fallos repetidos de implantación tras FIVFallos repetidos de implantación tras FIV Parejas con cariotipo normal con abortosParejas con cariotipo normal con abortos de repeticiónde repetición

PGD bajo riesgo(PGS ó PGD-AS)

Diagnóstico Genético PreimplantatorioPatologías

Screening de aneuploidias:Screening de aneuploidias: Alteración en el número de Alteración en el número de cromosomas cromosomas

Diagnóstico por FISHDiagnóstico por FISH

Sondas más frecuentes:Sondas más frecuentes:13 (Trisomía - Sd. Patau)13 (Trisomía - Sd. Patau)18 (Trisomía - Sd. Edwards)18 (Trisomía - Sd. Edwards)21 (Trisomía - Sd. Down)21 (Trisomía - Sd. Down)X, Y (X0, XXY,...)X, Y (X0, XXY,...) Otros: 22, 16, 15Otros: 22, 16, 15

Diagnóstico Genético Preimplantatorio

PGD de alto riesgoPGD de alto riesgo

Parejas con elevado riesgo de transmitir Parejas con elevado riesgo de transmitir anomalías cromosómicas o genéticas a sus anomalías cromosómicas o genéticas a sus hijos.hijos.

Genética

ProgramaPGD

Consejogenético

Biopsia

Análisis previos

Fijación

Diagnóstico Genético PreimplantatorioOrganización

Transf

Fase previaFase previa

Obtención de embrionesObtención de embriones

Biopsia embrionariaBiopsia embrionaria

Análisis genético diagnósticoAnálisis genético diagnóstico

Transferencia embrionariaTransferencia embrionaria

Diagnóstico Genético PreimplantatorioMétodo

FASE PREVIA:FASE PREVIA: CONSULTA CONJUNTA DE GENÉTICA CONSULTA CONJUNTA DE GENÉTICA CLÍNICA Y REPRODUCCIÓN CLÍNICA Y REPRODUCCIÓN

- Consejo Genético- Consejo Genético- Análisis genéticos previos - Análisis genéticos previos - Consulta pre-FIV- Consulta pre-FIV

- Criterios de Inclusión/exclusión:- Criterios de Inclusión/exclusión:El diagnóstico es técnicamente posible y El diagnóstico es técnicamente posible y

fiablefiableRiesgo de recurrenciaRiesgo de recurrenciaEBG que genereEBG que genere graves problemas de salud graves problemas de saludEdad materna*, FSH basal*Edad materna*, FSH basal*No contraindicaciones para FIVNo contraindicaciones para FIV

- Consentimientos informados de PGD y FIV- Consentimientos informados de PGD y FIV

Obtención de embriones: Obtención de embriones: Tratamiento de FIVTratamiento de FIV

-- Estimulación ovárica controlada.Estimulación ovárica controlada.

- Controles clínicos y ecográficos.- Controles clínicos y ecográficos.

- Punción folicular bajo anestesia.- Punción folicular bajo anestesia.

- Obtención de ovocitos.- Obtención de ovocitos.

- Fecundación de los ovocitos.- Fecundación de los ovocitos.

Tratamiento de FIVTratamiento de FIV

Consideraciones especiales:Consideraciones especiales:

- Mejor respuesta mayor número de ovocitos- Mejor respuesta mayor número de ovocitos12 ovocitos (M II)12 ovocitos (M II)10 fecundados10 fecundados 1 sin resultados1 sin resultados 4 afectos4 afectos 1 bloqueado1 bloqueado

- ICSI- ICSI

Día 0

Día + 1

Día + 2

Tipos:Tipos:

- Corpúsculo polar - Corpúsculo polar información información

materna materna

- Blastómeras Habitual- Blastómeras Habitual

- Blastocisto Más células- Blastocisto Más células

Poco tiempoPoco tiempo

Mosaicismos Mosaicismos

Biopsia embrionaria – blastómerasBiopsia embrionaria – blastómeras

- Día + 3 (6-8 blastómeras)- Día + 3 (6-8 blastómeras)- Totipotenciales- Totipotenciales- Inicio de compactación- Inicio de compactación- Uniones calcio dependientes- Uniones calcio dependientes

Técnica:Técnica:

- Medio libre de calcio y magnesio - Medio libre de calcio y magnesio - Mecánico, Acido Tyrode, Láser*- Mecánico, Acido Tyrode, Láser*- Extracción de 1 ó 2 blastómeras- Extracción de 1 ó 2 blastómeras- Mononucleadas- Mononucleadas

Biopsia embrionaria – blastómerasBiopsia embrionaria – blastómeras

- Día + 3 (6-8 blastómeras)- Día + 3 (6-8 blastómeras)- Totipotenciales- Totipotenciales- Inicio de compactación- Inicio de compactación- Uniones calcio dependientes- Uniones calcio dependientes

Técnica:Técnica:

- Medio libre de calcio y magnesio - Medio libre de calcio y magnesio - Mecánico, Acido Tyrode, Láser*- Mecánico, Acido Tyrode, Láser*- Extracción de 1 ó 2 blastómeras- Extracción de 1 ó 2 blastómeras- Mononucleadas- Mononucleadas

Diagnóstico genéticoDiagnóstico genético

FISHFISH PCRPCR (Hibridación in situ fluorescente)(Hibridación in situ fluorescente) (Reacción en cadena de la (Reacción en cadena de la polimerasa)polimerasa)

Técnica:Técnica: Fijación de núcleosFijación de núcleos Lisis celularLisis celular HibridaciónHibridación AmplificaciónAmplificación

Diagnóstico:Diagnóstico: AneuploidiasAneuploidias MutacionesMutacionesSelección de sexoSelección de sexoTranslocacionesTranslocaciones

Cromosoma en el porta

DNA cromosómico

desnaturalización de sonda y cromosomas

FISH - Hibridación

Hibridación de sonda y cromosomas

Visualización de la señal fluorescente

FISH - Hibridación

Problemas de FISHProblemas de FISH

- Número limitado de sondas por ronda- Número limitado de sondas por ronda

- Fallo de hibridación- Fallo de hibridación

- Overlaps- Overlaps

- Número limitado de sondas disponibles- Número limitado de sondas disponibles

- Mosaicismos- Mosaicismos

Diagnóstico genéticoDiagnóstico genético

FISHFISH PCRPCR (Hibridación in situ fluorescente)(Hibridación in situ fluorescente) (Reacción en cadena de la (Reacción en cadena de la polimerasa)polimerasa)

Técnica:Técnica: Fijación de núcleosFijación de núcleos Lisis celularLisis celular HibridaciónHibridación AmplificaciónAmplificación

Diagnóstico:Diagnóstico: AneuploidiasAneuploidias MutacionesMutacionesSelección de sexoSelección de sexoTranslocacionesTranslocaciones

PCRPCR Cystic Fibrosis DF 508Cystic Fibrosis DF 508

Positive control (carrier)

Molecular weight marker

Affected embryo (first cell)

Affected embryo (second cell)

Heterozygote embryo (first cell)

Heterozygote embryo (second cell)

No diagnosis because of ADO in

the second cell of the embryo

Molecular weight marker

FIGO-IFSS, Barcelona 2004

Problemas de PCRProblemas de PCR- - Los fallos de amplificaciLos fallos de amplificación ón ocurren en el 5-ocurren en el 5-10%10% de PCR de cde PCR de célula única.élula única.

Posibles causas: Posibles causas: - - ppérdida de la célulaérdida de la célula- - ccélula sin núcleo o degeneradoélula sin núcleo o degenerado- - fallos en la lisis celularfallos en la lisis celular

- Alelle Dropout (amplificación de un alelo)- Alelle Dropout (amplificación de un alelo)- Contaminación (espermatozoides, células - Contaminación (espermatozoides, células dede granulosa…)granulosa…)- Mosaicismos- Mosaicismos

DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTATORIO

Biopsia d +3

Fijación

núcleo

citoplasmanúcleo

Verde - Cromosoma XAcqua - Cromosoma 18Verde – Cromosoma 13Rojo – Cromosoma 21

Día +4

Blastocisto

Tasa de gestación 15-20% por ciclo iniciadoTasa de gestación 15-20% por ciclo iniciado

Fiabilidad 95%Fiabilidad 95%

Se recomienda Se recomienda Diagnóstico Prenatal Diagnóstico Prenatal a todas a todas las gestanteslas gestantes

Diagnóstico Genético PreimplantatorioResultados

Consideraciones especiales del PGDConsideraciones especiales del PGD

- Consejo Genético- Consejo Genético- Parejas sin esterilidad- Parejas sin esterilidad- Necesidad de mejor respuesta ovárica- Necesidad de mejor respuesta ovárica- Mayor riesgo SHO- Mayor riesgo SHO- ICSI- ICSI- Diagnóstico prenatal recomendable- Diagnóstico prenatal recomendable- Evaluación y seguimiento RN - Evaluación y seguimiento RN recomendable recomendable

Diagnóstico Genético PreimplantatorioConsideraciones especiales

Limitaciones del PGDLimitaciones del PGD

- Las pacientes tienen que someterse - Las pacientes tienen que someterse a una un

ciclo de FIVciclo de FIV

-- Alta tasa de cancelaciones Alta tasa de cancelaciones

- Todos los embriones pueden ser - Todos los embriones pueden ser afectosafectos

- Viabilidad del embrión- Viabilidad del embrión

- Posibles errores de diagnóstico- Posibles errores de diagnóstico

Diagnóstico Genético PreimplantatorioLimitaciones

DECRETO 156/2005 de 28 de junio, por el que se DECRETO 156/2005 de 28 de junio, por el que se regula el Diagnóstico Genético Preimplantatorio en regula el Diagnóstico Genético Preimplantatorio en el Sistema Sanitario Público de Andalucía y se crea el Sistema Sanitario Público de Andalucía y se crea la Comisión Andaluza de Genética y Reproducción.la Comisión Andaluza de Genética y Reproducción.

Diagnóstico Genético PreimplantatorioSistema Sanitario Público de Andalucía

Enfermedades genéticas ligadas al sexo:

Enf. Duncan

Hemofilia B

Hemofilia A

Sind. Pellizaeus Merzbacher

Sind. Alport

Nº CICLOS: 13

TRANSFERENCIAS: 8

MEDIA/ciclo

EDAD DE LAS PACIENTES 30.3

OVOCITOS MADUROS 9.7

OVOCITOS FECUNDADOS 7.3 74.8 %

EMBRIONES BIOPSIADOS 5 69.4 %

EMBRIONES INFORMATIVOS 4.4 87.8 %

EMBRIONES TRANSFERIDOS 1.5*

TASA TRANSFERENCIA 61.5 %

TASA GEST. CLIN ./TRANSFER 25 %

*media de embriones transferidos en las 8 transferencias realizadas

RESULTADOS DE LABORATORIO

Embriólogas M. Dolores Lozano Arana Beatriz Sánchez Andújar

Genetistas Salud Borrego López Irene Marcos Luque Ana Peciña López Raquel Fernández García Javier Sánchez García

Director Guillermo Antiñolo

Ginecólogos Juan Carlos García Lozano José Luis García Benítez Antonio Jiménez Díaz de la Serna Manuel Ledesma Mestre Juan Luis Moliní Rivera Enrique Moreno Pacha

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