Bioq. Alejandro Kuc Diagnóstico Virológico. Bioq. Alejandro Kuc Importancia Determinar una...

Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc

Diagnóstico Diagnóstico VirológicoVirológico

ImportanciaImportancia Determinar una intervención Determinar una intervención terapéuticaterapéutica Definir el Definir el pronósticopronóstico en la evolución de en la evolución de

un paciente un paciente Indicar la necesidad de una Indicar la necesidad de una vacunaciónvacunación Adoptar medidas de salud pública en una Adoptar medidas de salud pública en una

comunidad: comunidad: epidemiologíaepidemiología.. Tendencia: Sensibilidad y RapidezTendencia: Sensibilidad y Rapidez

Métodos de DiagnósticoMétodos de Diagnóstico

DirectosDirectos: : presencia de presencia de virusvirus en muestras clínicas en muestras clínicas Agente infeccioso:Agente infeccioso: aislamiento viral aislamiento viral PPartículaartícula viral: viral: microscopía electrónica microscopía electrónica AAntígenos virales:ntígenos virales: inmunomarcación inmunomarcación GGenomas virales: biología molecularenomas virales: biología molecular

IndirectosIndirectos: : resrespuesta de puesta de anticuerposanticuerpos específicos específicos antivirales en el suero del pacienteantivirales en el suero del paciente

Tipo de MuestrasTipo de Muestras Virus respiratorios: Virus respiratorios: aspirado nasofaríngeoaspirado nasofaríngeo

Lesiones Cutáneas: Lesiones Cutáneas: raspado e hisopadoraspado e hisopado

Sangre: Sangre: aislamiento viralaislamiento viral

Suero: Suero: búsqueda de anticuerpos (serología)búsqueda de anticuerpos (serología)

Materia Fecal: Materia Fecal: enterovirusenterovirus

Orina: Orina: aislamiento de CMVaislamiento de CMV

LCR: LCR: enterovirus y parotiditisenterovirus y parotiditis

Muestras oculares: Muestras oculares: hisopadohisopado

Tejidos: Tejidos: aislamiento viral o inmunohistoquímicaaislamiento viral o inmunohistoquímica

Transporte y Transporte y conservaciónconservación

AislamientoAislamiento Inmediatamente (inactivación Inmediatamente (inactivación

y contaminación)y contaminación) No congelarNo congelar

ConservaciónConservación Temp amb: horasTemp amb: horas 4ºC: 1-2 días4ºC: 1-2 días -20ºC: meses-20ºC: meses -70ºC: años-70ºC: años

Métodos Métodos DirectosDirectos

1- Aislamiento Viral1- Aislamiento Viral Huevos, Animales o CélulasHuevos, Animales o Células Tipos de cultivos celularesTipos de cultivos celulares

Primario: directamente del tejido humano o Primario: directamente del tejido humano o animal; 1-2 subpasajesanimal; 1-2 subpasajes

Diploide: derivado del tejido fetal o de RN; Diploide: derivado del tejido fetal o de RN; 20-50 subpasajes20-50 subpasajes

Hetroploide: extraídas de tejido tumoral o Hetroploide: extraídas de tejido tumoral o tranformado; infinitos subpasajestranformado; infinitos subpasajes

Variación en suceptibilidadVariación en suceptibilidad Es indispensable el Diagnóstico presuntivoEs indispensable el Diagnóstico presuntivo

Inoculación e incubación (ATB)Inoculación e incubación (ATB) Decontaminar muestras no estérilesDecontaminar muestras no estériles Inocular en tubos de cultivo:Inocular en tubos de cultivo: de la muestra de la muestra

en medio con ATBen medio con ATB 1 hr a 37º para permitir la adsorción1 hr a 37º para permitir la adsorción Añadir medio de cultivo y cambiarlo cada 2-Añadir medio de cultivo y cambiarlo cada 2-

3 días.3 días.

Detección de los efectos de los virusDetección de los efectos de los virus Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y

cultivocultivo

Tipo de ACPWikipwdia

cultivocultivo HemadsorciónHemadsorción

cultivocultivo HemadsorciónHemadsorción HemaglutinaciónHemaglutinación

Detección de los efectos de los virus Detección de los efectos de los virus ((Dx presuntivo: debe confirmarse)Dx presuntivo: debe confirmarse)

Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivoAcción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo HemadsorciónHemadsorción HemaglutinaciónHemaglutinación InterferenciaInterferencia

IdentificaciónIdentificación InmunofuoresenciaInmunofuoresencia ImunoperoxidasaImunoperoxidasa

Cuantificación de virusCuantificación de virus Titulación de punto finalTitulación de punto final Plaqueo bajo agarosaPlaqueo bajo agarosa

2- Microscopía 2- Microscopía ElectrónicaElectrónica

MétodosMétodos InmunoelectromicroscopíaInmunoelectromicroscopía Coloración negativaColoración negativa

VentajasVentajas Rápido Rápido (pocas muestras)(pocas muestras)

DesventajasDesventajas Costo del MECosto del ME Baja SensibilidadBaja Sensibilidad

3- Inmunoflourescencia 3- Inmunoflourescencia TécnicaTécnica

DirectaDirecta IndirectaIndirecta

VentajasVentajas Muestra estableMuestra estable Muy SensibleMuy Sensible Muy EspecíficaMuy Específica RápidoRápido

DesventajasDesventajas Costo del MFCosto del MF Observador experimentadoObservador experimentado

IFIIFI

4- Aglutinación4- Aglutinación

VentajasVentajas SencilloSencillo RápidoRápido No requiere No requiere

equipamientoequipamiento

DesventajasDesventajas Poco especificaPoco especifica

5- Enzimoinmunoensayo 5- Enzimoinmunoensayo (EIA)(EIA)

VentajasVentajas Muy SensibleMuy Sensible No se necesita observador experimentadoNo se necesita observador experimentado Gran numero de muestras simultáneamenteGran numero de muestras simultáneamente AutomatizableAutomatizable

DesventajasDesventajas Falsos Positivos (necesita confirmación)Falsos Positivos (necesita confirmación)

ELISAELISA

EnzymeEnzymeLinkedLinkedImmuno-Immuno-SorbentSorbentAssayAssay

ELISA CompetitivoELISA Competitivo

ELISA captura IgMELISA captura IgM

Tests Rápidos en un solo Tests Rápidos en un solo pasopaso

5- Radioinmunoensayo 5- Radioinmunoensayo (RIA)(RIA)

Fundamento idéntico a ELISAFundamento idéntico a ELISA VentajasVentajas

Similar al ELISASimilar al ELISA

DesventajasDesventajas Reactivos InestablesReactivos Inestables Residuos RadiactivosResiduos Radiactivos Relativamente mas CostosoRelativamente mas Costoso

Métodos Métodos IndirectosIndirectos

Métodos IndirectosMétodos Indirectos Detección de IgMDetección de IgM

Infección agudaInfección aguda Infección congénitaInfección congénita FR: f+FR: f+ ↑ ↑ IgG: f-IgG: f- IgM CapturaIgM Captura

Detección de IgGDetección de IgG SeroconversiónSeroconversión Recién NacidosRecién Nacidos AvidezAvidez

Δ >4 títulos

TécnicasTécnicas

Aglutinación de Aglutinación de partículaspartículas

IFI IFI EIAEIA

ELISAELISA LIALIA

RIARIA Western BlottWestern Blott

Western BlotWestern Blot Muy especificaMuy especifica Método confirmatorioMétodo confirmatorio

Western BlotWestern Blot

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