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SGIT-INIA DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
1º FORO DE COLABORACIÓN PÚBLICO-PRIVADA EN SANIDAD ANIMAL Sector Porcino
13 de Noviembre de 2012
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Grupos de investigación (porcino):
• Inmunología porcina:
F. Alonso, J. Domínguez, A. Ezquerra, G. del Real, C. Revilla
• Biotecnología y Biología Molecular y Celular
R. Blasco, J.C. Saiz
• Biotecnología de virus animales
C. Alonso, J. M. Escribano
Spin off
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Modelos víricos (porcino):
Virus de la estomatitis vesicular
Virus de la fiebre aftosa
Virus de la peste porcina africana
Virus de la peste porcina clásica
Virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino
Virus de la gripe
Enterovirus porcinos
Virus de la hepatitis E
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Líneas de investigación (porcino):
Desarrollo de:
Vectores virales
Adyuvantes
Biofactorias
Vacunas
Sistemas de detección (serológica y genómica)
Ac Monoclonales
Antivirales (Interacción patógeno-célula hospedador)
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
• Hasta 8 veces más producción • Mejor expressión y secrección
Líneas de investigación (porcino):
Vectores virales:
Mejora de sistemas de expresión
Baculovirus
HindIII EcoRI
YFG
Amp
Myc
pRB21-Myc-His
HIS 97 kDa
54 kDa
37 kDa
116kDa
199kDa
Coomassie Suero porcino (IgG)
Vaccinia
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Líneas de investigación (porcino):
Biofactorias
• IBES® = Improved Baculovirus Expression System
100 mg/L
400 mg/L
1,000 mg/L
Conventional Bac
Top-Bac®
IBES® + Top-Bac®
Líneas de investigación (porcino):
Adyuvantes
Direccionamiento
Uso de ligandos específicos como adyuvantes para el
direccionamiento de antígenos a células de SI
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Nanopartículas de transporte dirigido para vacunas
Análisis de la capacidad inmunomoduladora
de citoquinas y quimioquinas
Líneas de investigación (porcino):
Adyuvantes
Direccionamiento
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
poly I:C
IRES
S
PBS
nAb
100 pfu
0 5 10 15 0
25
50
75
100
dpi
Surv
ival
(%
)
5´NCR
VPg
S
IRES
Pk
S
IRES
Cn
5´NCR
(403) (470)
(1.335)
Análisis de la capacidad
inmunomoduladora de regiones
genómicas no codificantes de
virus RNA
Líneas de investigación (porcino):
Sistemas de detección (genómica y serológica)
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Polimorfismos del gen Mx1 en cerdo Ibérico Susceptibilidad a la infección por virus de Influenza porcina y PRRS
450 (a,wt)
450 422
422 (g, D28)
aa
ag
gg
aa ab ag bb gg
N (%) N (%) N (%) N (%) N (%)
IBÉRICO
TORBISCAL 134 (87,6%) _ 19 (12,4%) _ 0 (0%)
GUADYERBAS 27 (71,1%) _ 8 (21,1%) _ 3 (7,9%)
OTROS 139 (97,9%) 3 (2,1%) _ 0 (0%) _
JABALÍ 55 (88,7%) 5 (8,1%) _ 2 (3,2%) _
DUROC 32 (82,1%) 7 (17,9%) _ 0 (0%) _
LANDRACE 13 (65,0%) 6 (31,6%) _ 1 (5%) _
LARGE WHITE 21 (100%) 0 (0%) _ 0 (0%) _
MEISHAN 16 (100%) 0 (0%) _ 0 (0%) _
ZUMU 80 (100%) 0 (0%) _ 0 (0%) _
a b g
Líneas de investigación (porcino):
Sistemas de detección (serológica y genómica)
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
86 KDa
50 KDa
37 KDa
Antigen (ng/well)
A495
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
80 40 20 10 5 2.5
0
2
4
6
8
0 1 2 3 4 5 6 7 8
EL
ISA
“ca
sero
”
(P/N
)
Golden Standard (Ratio)
ESPECIFICIDAD SENSIBILIDAD
Humano Porcino Humano Porcino
“Casero”
comercial
96.4 % 100 %
96,4 % 88.2 %
96.9 % 100 %
75 % 83,3 %
Desarrollo, optimización y validación de inmunoensayos:
Especificidad y Sensibilidad
Desarrollo y caracterización de anticuerpos monoclonales para:
el análisis del SI porcino, con énfasis en APC
Líneas de investigación (porcino):
Ac Monoclonales
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Inmunoensayos y caracterizacion de interacciones célula-virus
4G
11
2F
8
BAC-ORF2
BAC-OR 2
BAC-Δ (1-111)
ORF2
BAC-Δ (1-111) ORF2
BAC-CONTROL
BAC-CONTROL
SIN INFECTAR
SIN INFECTAR
Líneas de investigación (porcino):
Antivirales (Interacción patógeno-célula hospedador)
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
O
OH
VPA
BHK-21 8 h
BHK-21 25 h
Vero 8 h
Vero 25 h Cel
l via
bili
ty (%
)
0
20
40
60
80
100
120
0 0.1 1 10 100 1000 VPA (mM)
7 VIRAL FAMILIES (ENVELOPED & NON-ENVELOPED)
Log
viru
s yi
eld
(PFU
/ml)
1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12
EMCV ERAV SFV SINV VSV LCMV WNV USUV EMCV SFV SINV VSV LCMV USUV
Control VPA
ERAV WNV * * * * * * * * * * * * * *
Vero
Non-enveloped Enveloped Non-enveloped Enveloped
ASFV ASFV
Preinfection treatment Post-infection treatment
Inhibición de la multiplicación de virus con envuelta en
cultivo celular
Líneas de investigación (porcino):
Antivirales (Interacción patógeno-célula hospedador)
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
• Antivirales:
Péptidos antivirales inhibidores: impiden el transporte de virus
• Estatinas: Inhiben el colesterol
• Antivirales de fuentes naturales:
• resveratrol y oxyresveratrol (complemento piensos)
Oxyresveratrol Resveratrol
(trans-2,3,4,5-tetrahydroxystilbenes)